飲用金花香櫞茶3個(gè)月對(duì)小樣本高脂血癥人群糖脂代謝的改善效果研究

孫穎，陳鑫，楊華，應(yīng)劍，邵丹青*，呂曉華*，肖杰，陳志雄，李頌，覃俊杰，鄭斌，高建設(shè)

飲用金花香櫞茶3個(gè)月對(duì)小樣本高脂血癥人群糖脂代謝的改善效果研究

孫穎1,3,4，陳鑫1,3,4，楊華2，應(yīng)劍1,3,4，邵丹青1,3,4*，呂曉華2*，肖杰1,3,4，陳志雄5，李頌6，覃俊杰7，鄭斌5，高建設(shè)5

1. 中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院有限公司，北京 102209；2. 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院/四川大學(xué)華西第四醫(yī)院，四川 成都 610041；3. 營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102209；4. 老年?duì)I養(yǎng)食品研究北京市工程實(shí)驗(yàn)室，北京 102209；5. 廈門(mén)茶葉進(jìn)出口有限公司，福建 廈門(mén) 361013；6. 中茶科技（北京）有限公司，北京 102209；7. 深圳譜元科技有限公司，廣東 深圳 518000

探討一款用黑茶工藝、經(jīng)冠突散囊菌發(fā)花的烏龍茶——金花香櫞茶飲用3個(gè)月對(duì)小樣本高脂血癥人群糖脂代謝的臨床改善效果。招募38名志愿者，試飲金花香櫞茶3個(gè)月，通過(guò)檢測(cè)和對(duì)比試飲前后的體成分（體重、體脂百分比等）、血液生化指標(biāo)（空腹血糖、血尿酸、血脂四項(xiàng)）、肝臟超聲、腸道菌群等，探討金花香櫞茶的健康功效。結(jié)果表明，試飲金花香櫞茶3個(gè)月后，志愿者體重、體質(zhì)指數(shù)、體脂百分比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)、血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖顯著降低（＜0.05），脂肪肝嚴(yán)重程度減輕，腸道菌群均勻性和多樣性增加，考拉桿菌屬（）、瘤胃球菌屬（）、嗜血桿菌屬（）、韋榮球菌屬（）等豐度升高，戴阿利斯特桿菌屬（）、丁酸蓖麻單胞菌屬（）豐度降低。提示金花香櫞茶具有輔助降血糖、降血脂、改善非酒精性脂肪肝的作用，可能通過(guò)增加產(chǎn)短鏈脂肪酸菌屬的豐度，增加短鏈脂肪酸，改善胰島素抵抗，進(jìn)而改善糖脂代謝。本研究所得結(jié)果仍需更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)拈L(zhǎng)期試驗(yàn)進(jìn)一步加以確證。

金花香櫞茶；糖脂代謝；腸道菌群；短鏈脂肪酸

隨著我國(guó)居民的收入水平提高，人們的膳食模式在悄然發(fā)生變化，由傳統(tǒng)的高碳水化合物、低脂肪的膳食結(jié)構(gòu)逐步向高脂肪、低碳水化合物轉(zhuǎn)變[1]。隨之而來(lái)，糖脂代謝紊亂相關(guān)疾病患病率迅速增長(zhǎng)，情況不容樂(lè)觀，2019年全國(guó)18歲以上居民超重率和肥胖率分別達(dá)34.3%和16.4%，血脂異?？傮w患病率高達(dá)35.6%[2]，糖尿病患病率達(dá)11.2%[3]，發(fā)達(dá)城市的成人非酒精性脂肪性肝病的患病率高達(dá)15.0%[4]。超重、肥胖、糖尿病、血脂異常、非酒精性脂肪肝病是典型的糖脂代謝紊亂性疾病，這類(lèi)疾病的危害在于長(zhǎng)期糖脂異常會(huì)損害全身臟器進(jìn)而導(dǎo)致其功能減退，且?guī)追N糖脂代謝紊亂性疾病常合并出現(xiàn)，進(jìn)一步增加血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，微血管和大血管損傷是造成患者致殘、致死的重要原因[5]。糖脂代謝紊亂性疾病嚴(yán)重威脅我國(guó)居民的健康，成為國(guó)家的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題[5]，這一系列疾病的核心病理表現(xiàn)之一即胰島素抵抗[6]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，腸道菌群可能在胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展機(jī)制上扮演著重要角色。健康的膳食和生活方式可有效改善胰島素抵抗[7]，進(jìn)而改善糖脂代謝紊亂性疾病的發(fā)生發(fā)展，為此，我國(guó)先后發(fā)布了《“健康中國(guó)2030”規(guī)劃綱要》《國(guó)民營(yíng)養(yǎng)計(jì)劃（2017—2030年）》和《健康中國(guó)行動(dòng)（2019—2030年）》等重要文件，均指出要推動(dòng)營(yíng)養(yǎng)型農(nóng)業(yè)和食品加工業(yè)的轉(zhuǎn)型升級(jí)，引導(dǎo)人民提高健康素養(yǎng)，建立健康的生活方式，豐富營(yíng)養(yǎng)健康產(chǎn)品的供給，幫助人民吃出健康[8-10]。

茶葉作為世界三大飲料之一，是我國(guó)傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)健康食物資源，其功能成分主要包括多酚、黃酮、多糖類(lèi)、生物堿等，具有顯著的抗氧化、抗炎、改善糖脂代謝等作用[11-12]。已有研究顯示，在高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠模型中，烏龍茶干預(yù)可以有效減緩小鼠肥胖以及脂肪肝的發(fā)生發(fā)展[13]；在高脂大鼠模型中，高劑量烏龍茶水浸提物干預(yù)可以有效抑制大鼠體重增加，改善腹膜后脂肪、性腺周?chē)镜慕M織重量及臟器指數(shù)，且可以有效改善血脂水平[14]；而以冠突散囊菌（）為優(yōu)勢(shì)菌發(fā)酵的茯磚茶的提取物能夠顯著抑制高脂誘導(dǎo)大鼠的體重增加及脂肪積累，顯著降低血清中總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycerides，TG）以及低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的水平[15]。金花香櫞茶，是采用福建永春佛手（香櫞茶）的新鮮葉片，結(jié)合海堤焙酵工藝，經(jīng)過(guò)原料精制、渥堆發(fā)酵、氣蒸壓磚和干燥發(fā)花而制得的新工藝茶[16]。“發(fā)花”是形成茯磚茶獨(dú)特品質(zhì)的關(guān)鍵工藝，其實(shí)質(zhì)是通過(guò)控制一定的外界條件，促使優(yōu)勢(shì)菌——冠突散囊菌生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生金黃色閉囊殼，俗稱(chēng)“金花”[16]。課題組前期對(duì)金花香櫞茶的物質(zhì)成分進(jìn)行鑒定，共鑒定出41種關(guān)鍵成分，主要包括茶多酚、黃酮和多糖等[17]，這些成分可能是金花香櫞茶健康功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，金花香櫞茶茶湯可以顯著降低肥胖大鼠的體重增長(zhǎng)、血脂和肝臟脂肪蓄積[18]。基于前期研究，初步認(rèn)為金花香櫞茶具有改善糖脂代謝的潛力。本研究將通過(guò)人群研究對(duì)金花香櫞茶的功效進(jìn)一步驗(yàn)證，采用自身前后對(duì)照，觀察志愿者試飲金花香櫞茶前后身體指標(biāo)（包括體成分、生化指標(biāo)、脂肪肝、腸道菌群等）的改善情況，探討金花香櫞茶的健康功效，從而為糖脂代謝紊亂性疾病的防控提供思路。

1 材料與方法

1.1 樣品

本研究干預(yù)所用的金花香櫞茶（貨號(hào)：XTJ2902）是中茶廈門(mén)茶葉進(jìn)出口有限公司生產(chǎn)的同批次產(chǎn)品，于陰涼避光通風(fēng)處存放。開(kāi)展人群臨床研究前，金花香櫞茶樣品委托譜尼測(cè)試集團(tuán)股份有限公司和國(guó)家副食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)（表1），樣品經(jīng)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)驗(yàn)證屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)，氟含量為0.16?mg·kg-1，低于《茶葉中鉻、鎘、汞、砷及氟化物限量》中氟的限量標(biāo)準(zhǔn)，有毒金屬和霉菌毒素均未檢出。

1.2 主要儀器和試劑

InBody370人體成分分析儀，拜斯倍斯醫(yī)療器械貿(mào)易（上海）有限公司；AU400全自動(dòng)生化儀，奧林巴斯（日本）；NemioMX超聲診斷儀，東芝集團(tuán)（日本）。

試驗(yàn)所用TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、LDL-C、葡萄糖、尿酸（Uric acid，UA）等試劑盒，均購(gòu)于四川新健康成生物股份有限公司。

1.3 研究對(duì)象

本研究獲得四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院（華西第四醫(yī)院）醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并全程跟蹤。由四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院負(fù)責(zé)招募志愿者，對(duì)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的高脂血癥和/或合并非酒精性脂肪肝人群進(jìn)行招募入組并簽署知情同意書(shū)。

1.3.1 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）年齡18～80歲；（2）血脂異常（TC≥6.4?mmol·L-1或TG≥2.0?mmol·L-1或LDL-C≥3.1?mmol·L-1）患者或非酒精性脂肪肝患者；（3）具有一定的閱讀能力，自愿且知情同意參加本研究者；（4）能遵從研究方案，研究期間能堅(jiān)持飲茶。

表1 金花香櫞茶樣品安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)及結(jié)果

1.3.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）年齡在18歲以下或80歲以上，妊娠或哺乳期婦女或過(guò)敏體質(zhì)者；（2）使用二甲雙胍藥物治療和胰島素治療的糖尿病患者；（3）合并有心血管、腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病、精神病患者；（4）合并其他傳染性疾病，如甲肝、乙肝、丙肝和獲得性免疫缺陷綜合征者；（5）規(guī)律或計(jì)劃服用可能影響脂代謝藥物者；（6）規(guī)律或計(jì)劃服用保肝藥物者；（7）有飲用烏龍茶習(xí)慣者；（8）近3個(gè)月服用益生菌、益生元、抗生素者；（9）因其他原因不能配合本研究者。

1.4 研究方法

采用自身干預(yù)前后對(duì)照研究設(shè)計(jì)，觀察飲用3個(gè)月金花香櫞茶對(duì)高脂血癥和/或合并非酒精性脂肪肝人群的糖脂代謝改善效果。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，募集合適的試飲志愿者，采取金花香櫞茶試飲干預(yù)，在干預(yù)前（干預(yù)0?d）和干預(yù)后（干預(yù)90?d）分別測(cè)量志愿者身高、體重、體脂、體脂比、腰圍、臀圍、內(nèi)臟脂肪等級(jí)、血脂四項(xiàng)（TC、TG、HDL-C和LDL-C）、空腹血糖（Fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、血UA、脂肪肝程度以及腸道菌群健康狀態(tài)，比較上述指標(biāo)在干預(yù)前后的差異，進(jìn)而判斷干預(yù)措施對(duì)健康狀況有無(wú)改善作用。要求所有志愿者干預(yù)過(guò)程中保持其他因素（如飲食、運(yùn)動(dòng)習(xí)慣）不變，同時(shí)于檢查前一天正常飲食，避免吸煙、飲酒和攝入咖啡因，避免異常劇烈運(yùn)動(dòng)，晚飯后禁食10～14?h。

金花香櫞茶飲用方法：每日實(shí)際用量6?g，使用300?mL飄逸杯；每次200?mL沸水沖泡60～90?s，待不燙口時(shí)盡快飲用；可反復(fù)沖泡，以飲茶代替飲水；第一泡建議在30?min內(nèi)喝完；對(duì)于沒(méi)有飲用茶和咖啡習(xí)慣的人，建議飲用時(shí)間最遲不晚于下午3點(diǎn)；推薦早飯或午飯后1?h開(kāi)始飲用。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 身體測(cè)量及體成分指標(biāo)測(cè)定

使用皮尺測(cè)量志愿者的腰圍、臀圍。使用InBody370型人體成分分析儀通過(guò)生物電阻抗測(cè)量法進(jìn)行體質(zhì)量（kg）、體脂（kg）、體脂百分比（%）和內(nèi)臟脂肪等級(jí)的測(cè)定。通過(guò)腰圍/臀圍計(jì)算腰臀比，通過(guò)體質(zhì)量÷身高2計(jì)算體質(zhì)指數(shù)（Body mass index，BMI），體質(zhì)量和身高的單位分別為kg和m。檢測(cè)由受過(guò)專(zhuān)業(yè)訓(xùn)練的專(zhuān)業(yè)人員完成。

1.5.2 血清生化指標(biāo)檢測(cè)及脂肪肝評(píng)估

在調(diào)查當(dāng)天采集志愿者的空腹靜脈血，使用TC、TG、HDL-C、LDL-C、葡萄糖和UA的檢測(cè)試劑盒，通過(guò)全自動(dòng)生化儀進(jìn)行血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG和UA檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。使用超聲診斷儀進(jìn)行脂肪肝的診斷及嚴(yán)重性評(píng)估。采血、指標(biāo)檢測(cè)及肝臟超聲均由專(zhuān)業(yè)護(hù)士和醫(yī)生完成。

1.5.3 腸道菌群檢測(cè)

按照正規(guī)采樣規(guī)程，采集志愿者的糞便，加冰冷藏運(yùn)輸，由深圳譜元科技有限公司完成腸道微生物16?S基因靶向測(cè)序分析。使用MOBIO PowerSoil DNA Isolation Kit（12888-100）從志愿者糞便樣本中提取細(xì)菌DNA，并在–80℃下儲(chǔ)存在Tris-EDTA緩沖溶液中備用。使用通用引物（515F-806R）對(duì)16?S rRNA基因的V4區(qū)進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增，并使用Illumina MiniSeq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。使用QIIME2處理16?S rRNA擴(kuò)增子序列。代表性序列（即特征）被定義為100%相似的合并序列，即操作分類(lèi)單元（Operational taxonomic units，OTU）。使用Greengenes 13.8數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)基因序列進(jìn)行分析和注釋。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 試飲志愿者基本信息

本次研究共納入符合招募要求的試飲志愿者38人，其中男性29人，女性9人，志愿者基本信息見(jiàn)表2。入選的試飲志愿者中，血脂異常（TC≥6.4?mmol·L-1或TG≥2.0?mmol·L-1或LDL-C≥3.1?mmol·L-1）合并非酒精性脂肪肝者19人，單純血脂異常者9人，單純性非酒精性脂肪肝者10人。

2.2 試飲前后志愿者體重和體成分的變化

試飲金花香櫞茶3個(gè)月后，試飲志愿者的體重、BMI、體脂、體脂百分比及內(nèi)臟脂肪等級(jí)均顯著下降（<0.05）。其中，男性志愿者試飲后體重、BMI、體脂及體脂百分比均顯著下降（<0.05），體質(zhì)量下降0.87?kg，BMI下降0.26，體脂下降0.99?kg，體脂百分比下降1.1個(gè)百分點(diǎn)；女性志愿者試飲后體重、BMI、體脂、體脂百分比、臀圍、腰臀比及內(nèi)臟脂肪等級(jí)顯著下降（<0.05），體質(zhì)量下降0.71?kg，BMI下降0.53，體脂下降1.37?kg，體脂百分比下降2.04個(gè)百分點(diǎn)，臀圍下降2.99?cm，腰臀比下降0.01，內(nèi)臟脂肪等級(jí)下降0.78（表3）。

2.3 試飲前后志愿者血液生化指標(biāo)的變化

試飲金花香櫞茶3個(gè)月后，試飲志愿者血清TC、LDL-C和FBG水平顯著下降（<0.05）。其中，男性志愿者試飲后血清TC和FBG水平顯著下降（<0.05），分別下降9.6%和14.0%；女性志愿者試飲后血清TC、LDL-C和FBG水平顯著下降（<0.05），下降比例分別達(dá)14.5%、20.8%和13.6%（表4）。

2.4 試飲前后志愿者非酒精性脂肪肝情況的變化

試飲金花香櫞茶3個(gè)月后，志愿者總體脂肪肝患病數(shù)從29人下降到28人，中度脂肪肝人數(shù)從9人減少到3人，脂肪肝總體患病數(shù)減少，脂肪肝嚴(yán)重程度減輕（表5）。

表2 試飲志愿者基本信息

表3 試飲前后志愿者體質(zhì)量和體成分的變化

注：*表示與試飲前比較，<0.05。下同

Note:*represents a significant difference compared to the group of before drinking,<0.05. The same below

表4 試飲前后志愿者血液生化指標(biāo)的變化

表5 試飲前后志愿者非酒精性脂肪肝情況的變化

2.5 試飲前后志愿者腸道菌群的變化

納入研究的38名志愿者中有29名完成試飲前后的糞便采集及測(cè)序，其中男性志愿者22名，女性志愿者7名，對(duì)29人的腸道菌群進(jìn)行分析。

多樣性通常表征腸道菌群的豐富度和物種的均勻度，常用Evenness、PD、Observed OTUs和Shannon指數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行表征，指數(shù)越大，則微生物群落多樣性越好。本研究結(jié)果顯示（圖1），與試飲前相比，試飲金花香櫞茶3個(gè)月后志愿者的腸道菌群豐富度和物種均勻度均有所提高，但各組間差異不顯著（>0.05）。

多樣性是以矩陣的數(shù)據(jù)形式，逐一比較每個(gè)物種在不同樣本群落中的數(shù)量和分布的差異，主成分分析（PCA）可以直觀反映樣本群落間的差異。對(duì)試飲前后的腸道菌群進(jìn)行PCA分析，發(fā)現(xiàn)試飲前后志愿者腸道菌群群落間無(wú)顯著差異（圖2）。

對(duì)門(mén)水平的組成進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)試飲志愿者的腸道菌群主要由擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）、厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、變形菌門(mén)（Proteobacteria）、放線菌門(mén)（Actinobacteria）和梭桿菌門(mén)（Fusobacteria）構(gòu)成，飲茶后志愿者的腸道菌群中厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)和放線菌門(mén)（=0.007）相對(duì)豐度上升，擬桿菌門(mén)（=0.039）和梭桿菌門(mén)相對(duì)豐度下降，厚壁菌門(mén)/擬桿菌門(mén)（F/B）從飲茶前的0.70升高到飲茶后的0.98。分析不同性別志愿者的腸道菌群，未發(fā)現(xiàn)門(mén)水平存在顯著的性別差異（圖3）。

圖1 試飲前后志愿者腸道菌群α多樣性的變化

注：PC1為主成分分析的第一主成分，PC2為主成分分析的第二主成分

對(duì)屬水平的組成進(jìn)行分析，與試飲前相比，試飲后志愿者腸道菌群中的巨單胞菌屬（）、羅斯氏菌屬（）、布勞特氏菌屬（，=0.008）、柯林斯氏菌屬（）等相對(duì)豐度上升，擬桿菌屬（）、普雷沃氏菌屬（）、糞桿菌屬（）、毛螺菌屬（）等相對(duì)豐度下降。分析不同性別志愿者的腸道菌群，未發(fā)現(xiàn)屬水平存在顯著的性別差異（圖4）。

對(duì)志愿者的體成分指標(biāo)（包括體重、體脂比、腰臀比和內(nèi)臟脂肪等級(jí)）和生化指標(biāo)（包括TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG、UA）同腸道菌群屬水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示（圖5），戴阿利斯特桿菌屬（）與體重、體脂比、腰臀比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)指標(biāo)正相關(guān)；考拉桿菌屬（）與體重、腰臀比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)成負(fù)相關(guān)；瘤胃球菌屬（）與FBG成負(fù)相關(guān)；與FBG成負(fù)相關(guān)，與HDL-C成正相關(guān)；與體重、TG成負(fù)相關(guān)，與HDL-C和LDL-C正相關(guān)。將上述菌屬相對(duì)豐度進(jìn)行試飲前后對(duì)比，戴阿利斯特桿菌屬試飲后豐度降低，而考拉桿菌屬、瘤胃球菌屬、試飲后豐度升高。

圖3 試飲前后志愿者腸道菌群門(mén)水平組成的變化

圖4 試飲前后志愿者腸道菌群屬水平組成的變化

2.6 試飲志愿者個(gè)體化差異分析

評(píng)估試飲志愿者的體成分指標(biāo)、血液生化指標(biāo)和非酒精性脂肪肝轉(zhuǎn)化情況，對(duì)志愿者進(jìn)行個(gè)體分析，將飲茶干預(yù)的效果進(jìn)行定量細(xì)分，分為干預(yù)效果明顯和不明顯2個(gè)水平（表6），分析這兩部分試飲志愿者腸道菌群的菌屬變化情況。

結(jié)果顯示，29名試飲志愿者中，有22名志愿者干預(yù)效果明顯，7名干預(yù)效果不明顯，將干預(yù)效果明顯與不明顯的志愿者試飲前后的腸道菌群變化情況進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)戴阿利斯特桿菌屬、嗜血桿菌屬（）、韋榮球菌屬（）和丁酸蓖麻單胞菌屬（）的變化在兩組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。干預(yù)效果明顯的志愿者腸道菌群中戴阿利斯特桿菌屬升高值低于在干預(yù)效果不明顯者的升高值（=0.01）；嗜血桿菌屬和韋榮球菌屬在干預(yù)效果明顯者腸道中升高，在干預(yù)效果不明顯者腸道中降低（分別為0.14和0.003）；丁酸蓖麻單胞菌屬在干預(yù)效果明顯者腸道中降低，在干預(yù)效果不明顯者腸道中升高（=0.003），具體如圖6所示。將上述菌屬相對(duì)豐度進(jìn)行試飲前后對(duì)比，戴阿利斯特桿菌屬和丁酸蓖麻單胞菌屬試飲茶后豐度降低，而嗜血桿菌屬、韋榮球菌屬試飲后豐度升高。

3 討論與結(jié)論

金花香櫞茶是以烏龍茶為基底，經(jīng)黑茶的發(fā)酵工藝，通過(guò)優(yōu)勢(shì)菌冠突散囊菌的增殖而得到的新工藝茶。本研究首次在人群中開(kāi)展金花香櫞茶對(duì)高脂血癥和/或合并非酒精性脂肪肝患者的糖脂代謝功能影響的研究。本研究發(fā)現(xiàn)，試飲金花香櫞茶3個(gè)月后，試飲志愿者體重、BMI、體脂百分比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)、血清TC、LDL-C、FBG水平與飲茶前相比顯著下降，提示飲用金花香櫞茶3個(gè)月改善了志愿者的糖脂代謝。

注：BW為體重，BFR為體脂比，WHR為腰臀比，VFG為內(nèi)臟脂肪等級(jí)，UA為尿酸，F(xiàn)BG為空腹血糖，TC為總膽固醇，TG為甘油三酯，HDL-C為高密度脂蛋白膽固醇，LDL-C為低密度脂蛋白膽固醇。*和**表示體成分及生化指標(biāo)與腸道菌群屬水平的相關(guān)性存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別表示P<0.05和P<0.01

表6 試飲茶干預(yù)效果細(xì)分

圖6 飲茶干預(yù)效果明顯與不明顯志愿者腸道菌群變化情況對(duì)比

茶葉是我國(guó)傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)健康飲料資源，既往研究顯示茶葉具有諸多健康功效。Yuan等[13]發(fā)現(xiàn)，陳年烏龍茶可以降低高脂飲食誘導(dǎo)的體重增加，脂肪堆積，血清TC、TG和LDL-C升高，同時(shí)提高血清HDL-C水平，并明顯減輕了脂肪肝，同時(shí)可以使附睪脂肪中脂肪細(xì)胞減小。He等[19]發(fā)現(xiàn)烏龍茶可通過(guò)改善脂質(zhì)代謝降低體脂含量，減輕體重，認(rèn)為長(zhǎng)期飲用烏龍茶可以預(yù)防肥胖。Rothenberg等[15]總結(jié)發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵茶在增加短鏈脂肪酸的產(chǎn)生、調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)脂質(zhì)代謝方面優(yōu)于不發(fā)酵茶。本項(xiàng)目組前期利用高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠模型[18]，研究飲用金花香櫞茶對(duì)預(yù)防肥胖的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，干預(yù)45?d后，高劑量干預(yù)組的體重增長(zhǎng)顯著低于高脂模型組，且血脂指標(biāo)顯著改善，TC、TG顯著降低，HDL-C升高。HE染色結(jié)果顯示，高脂模型組中大鼠肝臟存在大小不一的空泡（脂肪滴），肝細(xì)胞體積增大、腫脹，而高劑量金花香櫞茶茶湯干預(yù)組中肝臟空泡較少，且肝索形態(tài)較為正常[18]，因此認(rèn)為金花香櫞茶能有效改善脂肪肝小鼠的脂代謝功能。在此基礎(chǔ)上，本研究在人群中開(kāi)展了功效研究，發(fā)現(xiàn)了與上述研究一致的結(jié)果。

研究發(fā)現(xiàn)，隨著發(fā)酵進(jìn)程的加深，金花香櫞茶中茶多糖（Tea polysaccharides，TPS）含量呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，成品茶中TPS的含量高達(dá)3.9%[17]。TPS是茶葉中活性多糖的總稱(chēng)，具有降血糖、降血脂、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等諸多生物活性[20-21]，因此TPS很有可能是金花香櫞茶降糖、降脂功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。

茶多酚是茶葉的主要功能成分，Heber等[14]研究發(fā)現(xiàn)，綠茶、紅茶和烏龍茶多酚可降低肥胖飲食小鼠的內(nèi)臟脂肪和炎癥水平，不同茶類(lèi)的多酚含量雖然存在顯著差異，但均有誘導(dǎo)體重減輕、抗炎等作用。兒茶素是茶多酚中含量最多的成分，具有顯著的抗氧化、抗炎等保健功效和藥理活性[22]。侯粲等[17]研究發(fā)現(xiàn)，金花香櫞茶在加工過(guò)程中酯型兒茶素含量顯著下降，但是成品茶葉的抗氧化活性仍維持在原有水平，可能是因?yàn)榘l(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了新型黃酮類(lèi)化合物，以及從兒茶素結(jié)構(gòu)中脫落的沒(méi)食子酸，抵消了因兒茶素含量降低發(fā)生的抗氧化活性變化，且該研究發(fā)現(xiàn)金花香櫞茶具有抑制-葡糖糖苷酶和-淀粉酶的能力，可以減緩葡萄糖的生成和吸收，具有降糖的潛力，這在本研究中得到驗(yàn)證，飲茶3個(gè)月后，志愿者的空腹血糖從5.9?mmol·L-1降低到5.1?mmol·L-1（<0.05）。

近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明腸道菌群與神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神疾病、呼吸系統(tǒng)疾病和代謝性疾病等存在關(guān)聯(lián)，其中，腸道菌群與糖脂代謝的關(guān)系越來(lái)越受到研究人員的關(guān)注[23]。有研究認(rèn)為，腸道菌群可能通過(guò)細(xì)菌的脂多糖（LPS）導(dǎo)致慢性炎癥或減少循環(huán)短鏈脂肪酸（Short-chain fatty acid，SCFA）或增加衍生代謝產(chǎn)物（如丙酸咪唑、色氨酸衍生代謝產(chǎn)物、吲哚、犬尿氨酸、5-羥色胺、支鏈氨基酸等）等多種機(jī)制，介導(dǎo)胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展，進(jìn)而引起糖脂代謝紊亂，同時(shí)越來(lái)越多的證據(jù)表明，SCFA可以充當(dāng)腸道上皮特殊營(yíng)養(yǎng)和能量組分，改善腸道屏障功能，抑制胰島素介導(dǎo)的脂肪組織中的脂肪積累，表現(xiàn)出抗炎作用，并保護(hù)宿主免受結(jié)腸疾病的侵害[24-25]。

研究發(fā)現(xiàn)，茶葉通過(guò)TPS、茶多酚、茶黃酮等物質(zhì)基礎(chǔ)[26]，能夠顯著降低2型糖尿病大鼠的FBG、TC、TG、LDL-C和游離脂肪酸水平，其內(nèi)在機(jī)制是茶葉有助于改善腸道菌群的多樣性，有助于腸道有益菌生長(zhǎng)并抑制有害菌的生長(zhǎng)[27]，如茯磚茶可以顯著改善高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠的腸道菌群，促進(jìn)雙歧桿菌（）的增殖[28]；金花黑茶干預(yù)使得BALB/c小鼠腸道微生物多樣性增加，如雙歧桿菌（）、乳球菌等有益菌增加，大腸桿菌等有害菌降低[29]，進(jìn)而促進(jìn)健康；TPS可增加腸道微生物群的多樣性，恢復(fù)一些因糖尿病而減少的菌屬（如、）的相對(duì)豐度[21]。與前述研究結(jié)果一致，本研究發(fā)現(xiàn)飲用金花香櫞茶后志愿者的腸道菌群多樣性增加。多樣性代表樣人體內(nèi)腸道菌群的復(fù)雜度，受菌群豐富度和均勻度影響，是反映受檢者腸道菌群健康水平的重要指標(biāo)之一。多樣性越高代表受試者腸道菌群越健康，反之則提示腸道菌群可能存在失衡，且腸道菌群多樣性與各種代謝疾病的發(fā)生以及并發(fā)癥的發(fā)生關(guān)系緊密[30-31]。同時(shí)，本研究也發(fā)現(xiàn)試飲后和豐度增加，與前述研究結(jié)果一致。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者在對(duì)腸道菌群影響肥胖的研究上，通常以門(mén)水平的組成即厚壁菌門(mén)/擬桿菌門(mén)（F/B）的比值來(lái)反映機(jī)體肥胖狀況，但仍存在爭(zhēng)議。小鼠和人體試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肥胖組的F/B較正常組更高，而且經(jīng)過(guò)飲食干預(yù)后肥胖組的F/B值隨體重的減輕而下降[32]。但也有研究指出，F(xiàn)/B值與肥胖無(wú)關(guān)[33]，肥胖者的厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)豐度均降低[34]，肥胖者減肥成功后其腸道菌群中厚壁菌門(mén)豐度升高[35]，甚至肥胖組F/B的值較體重正常組相對(duì)降低[36]。茶葉相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)飲用兩周的綠茶（400?mL·d-1），在促進(jìn)產(chǎn)SCFA菌屬生長(zhǎng)、降低糞便中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的同時(shí)，也增加了F/B的比例[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，與飲茶前相比，飲茶后志愿者腸道中擬桿菌門(mén)降低，厚壁菌門(mén)上升，F(xiàn)/B呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，提示對(duì)于F/B與肥胖之間關(guān)系還應(yīng)該再進(jìn)一步探討。

在腸道菌群構(gòu)成的門(mén)水平上，厚壁菌門(mén)的許多成員都是有益菌，如乙酸鹽生產(chǎn)者乳桿菌，產(chǎn)丁酸的糞桿菌、真桿菌、羅氏桿菌等[37-38]。而本研究中發(fā)現(xiàn)飲茶后厚壁菌門(mén)豐度增加，金花香櫞茶可能通過(guò)促進(jìn)厚壁菌門(mén)增殖進(jìn)而使得SCFA增加，促進(jìn)健康。梭桿菌門(mén)也是人類(lèi)腸道菌群中所占比例很高的菌，主要分為纖毛菌科（Leptotrichiaceae）和梭桿菌科（Fusobacteriaceae），其中梭桿菌科成員中的具核梭桿菌可促進(jìn)消化道腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但同時(shí)也是人體中的共生菌和機(jī)會(huì)致病菌[39]。本研究發(fā)現(xiàn)志愿者飲用金花香櫞茶后，腸道中的梭桿菌門(mén)降低。

在腸道菌群構(gòu)成的屬水平上，有學(xué)者研究我國(guó)9個(gè)省市7個(gè)民族314名健康年輕人糞便菌群結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)所有研究者中均出現(xiàn)包括考拉桿菌屬、瘤胃球菌屬在內(nèi)的9個(gè)與合成SCFA有關(guān)的菌屬[40]?？祭瓧U菌屬是丙酸生產(chǎn)者，瘤胃球菌屬是丁酸生產(chǎn)者[41]，本研究發(fā)現(xiàn)考拉桿菌屬與體重、腰臀比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)成負(fù)相關(guān)，瘤胃球菌屬與FBG成負(fù)相關(guān)，提示2個(gè)菌屬為有益菌，且2個(gè)菌屬在飲茶后均出現(xiàn)豐度的升高，提示金花香櫞茶能促進(jìn)二者的增殖，這可能是金花香櫞茶改善糖脂代謝、發(fā)揮健康功效路徑上的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。對(duì)于產(chǎn)丁酸菌屬，有研究評(píng)估其作為潛在新一代益生菌的安全性，發(fā)現(xiàn)其安全性及耐受性良好，有成為二代益生菌的潛力，也有研究者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)益生元干預(yù)的小鼠腸道菌群中豐度增加[42]。本研究發(fā)現(xiàn)，與HDL-C成正相關(guān)，與FBG成負(fù)相關(guān)，同時(shí)經(jīng)過(guò)飲茶干預(yù)，該菌的豐度升高，是一個(gè)有益菌，與上述研究觀點(diǎn)基本一致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)、嗜血桿菌屬、韋榮球菌屬可能是有助于發(fā)揮糖脂代謝改善功效的菌屬。有研究發(fā)現(xiàn)，與焦慮和運(yùn)動(dòng)功能顯著相關(guān)[43]，嗜血桿菌屬在口腔內(nèi)較多[44]，但關(guān)于二者與糖脂代謝的相關(guān)性并未檢索到相關(guān)文獻(xiàn)支持，而針對(duì)韋榮球菌屬，有研究發(fā)現(xiàn)其同時(shí)具有促炎和抗炎作用，在腸道中韋榮球菌屬與唾液鏈球菌菌株1共培養(yǎng)時(shí)可降低炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，而與菌株2共培養(yǎng)時(shí)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生比各自單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)顯著增加[45]，產(chǎn)生相互矛盾的結(jié)論或許是由于腸道微環(huán)境以及菌群構(gòu)成不同所導(dǎo)致。

有研究表明，戴阿利斯特桿菌屬可能通過(guò)增加一些代謝產(chǎn)物，使得糖脂代謝惡化[46-47]。本研究發(fā)現(xiàn)戴阿利斯特桿菌屬與體重、體脂比、腰臀比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)指標(biāo)成正相關(guān)，而飲用金花香櫞茶后該菌豐度下降。關(guān)于，大多數(shù)研究認(rèn)為其是一個(gè)產(chǎn)丁酸菌屬，具有抗炎并促進(jìn)結(jié)腸細(xì)胞功能恢復(fù)的作用[45,48-49]，但本研究發(fā)現(xiàn)其在干預(yù)效果好的志愿者腸道中豐度降低，在干預(yù)差者腸道中豐度升高，且試飲茶后總體豐度降低，與以往研究不一致。

本研究以小樣本量的自身對(duì)照試驗(yàn)方案初步探索了規(guī)律性飲用金花香櫞茶3個(gè)月對(duì)高脂血癥人群糖脂代謝的改善效果，雖然無(wú)法證明腸道菌群在金花香櫞茶改善糖脂代謝通路上的因果關(guān)系，但通過(guò)結(jié)果可以猜測(cè)飲用金花香櫞茶可能基于其TPS、茶多酚等功能成分，通過(guò)增加產(chǎn)SCFA菌的豐度，增加循環(huán)中SCFA的濃度，進(jìn)而改善胰島素抵抗程度，從而改善志愿者的糖脂代謝水平。本研究因研究設(shè)計(jì)在統(tǒng)計(jì)效能上低于隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，后續(xù)欲探討金花香櫞茶對(duì)糖脂代謝的確切效果、可能機(jī)制及糖脂代謝通路上的因果關(guān)系等，仍需開(kāi)展更大規(guī)模、更加深入、更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)拈L(zhǎng)期試驗(yàn)，如開(kāi)展志愿者的腸道菌群代謝通路分析等。

綜上所述，金花香櫞茶經(jīng)過(guò)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)和有毒有害物質(zhì)檢測(cè)，呈現(xiàn)良好的安全性。小樣本高脂血癥和/或合并非酒精性脂肪肝人群飲用該茶3個(gè)月后，體重、BMI、體脂重量、體脂百分比、內(nèi)臟脂肪等級(jí)顯著降低，同時(shí)，血清TC、LDL-C、FBG顯著下降，脂肪肝嚴(yán)重程度減輕，腸道菌群改善。提示金花香櫞茶具有降低體脂肪、輔助降低血清膽固醇和血糖及改善腸道菌群的作用。但是本研究在金花香櫞茶改善糖脂代謝的機(jī)制方面未做深入探討，需要未來(lái)更加深入的、規(guī)模更大的作用機(jī)制和因果關(guān)系研究。

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Clinical Trial on the Effect of Drinking Jinhua Xiangyuan Tea for 3 Months on the Improvement of Glucose and Lipid Metabolism in A Small Sample Hyperlipidemia Population

SUN Ying1,3,4, CHEN Xin1,3,4, YANG Hua2, YING Jian1,3,4, SHAO Danqing1,3,4*, Lü Xiaohua2*, XIAO Jie1,3,4, CHEN Zhixiong5, LI Song6, QIN Junjie7, ZHENG Bin5, GAO Jianshe5

1. Nutrition and Health Research Institute, COFCO Ltd., Beijing 102209, China; 2. West China School of Public Health and West China Fourth Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, China; 3. Beijing Key Laboratory of Nutrition & Health and Food Safety, Beijing 102209, China; 4. Beijing Engineering Laboratory for Geriatric Nutrition Food Research, Beijing 102209, China; 5. Xiamen Tea Import and Export Co., Ltd., Xiamen 361013, China; 6. China Tea Technology (Beijing) Co., Ltd., Beijing 102209, China; 7. Shenzhen Puyuan Technology Co., Ltd., Shenzhen 518000, China

This study is aimed at investigating the clinical effect of drinking Jinhua Xiangyuan tea for 3 months on the glucose and lipid metabolism in a small sample patients with hyperlipidemia (with/without non-alcoholic fatty liver). Jinhua Xiangyuan tea was produced by the new process usingIn this study, before-and-after control design was used. The body composition (body weight, BMI, waist hip ratio, percentage of body fat, visceral fat grade), blood biochemical indicators (fasting blood glucose, uric acid, blood lipid), fatty liver, and gut microbiota were examined before and after the test. After drinking Jinhua Xiangyuan tea for 3 months, the body weight, BMI, percentage of body fat, visceral fat grade, serum total cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol, and fasting blood glucose of 38 volunteers were significantly reduced (<0.05).Fatty liver was less severe. Gut microbiota’s diversity and richness were increased. The relative abundance of,,andwere increased, andandwere decreased. Jinhua Xiangyuan tea could increase the relative abundance of short-chain fatty acid-producing bacteria, increasing short-chain fatty acids, and improving insulin resistance, then improving glucose and lipid metabolism. The results of this study still need to be further confirmed by more rigorous long-term experimental observation.

Jinhua Xiangyuan tea, glucose and lipid metabolism, gut microbiota, short-chain fatty acids

S571.1；TS272.5+5

A

1000-369X(2022)04-561-16

2022-02-08

2022-03-17

中糧集團(tuán)重大項(xiàng)目-2017、云南科技專(zhuān)項(xiàng)-2021

孫穎，女，工程師，主要從事食物與營(yíng)養(yǎng)方向研究。*通信作者：shaodanqing@cofco.com；luxiaohua@scu.edu.cn