疏花蛇菰石油醚部位的化學成分研究*

陳孝禮，江文婧，吳繼春，杜 江

(貴州中醫(yī)藥大學藥學院，貴州 貴陽 550025)

疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)，為蛇菰科蛇菰屬的草本寄生植物，又名鹿仙草、不上蓮、回春草、通天蠟燭，苗藥名為購俗(ngoub xud)，具有益腎養(yǎng)陰、清熱止血、鎮(zhèn)痛消炎的作用，常用于痔瘡、虛勞出血、腰痛等多種病癥的治療，廣泛分布于云南、四川、湖北等西南地區(qū)，西南地區(qū)民間常用于痔瘡、梅毒、小兒陰莖腫、胃痛、咳嗽咳血等多種病癥的治療[1]。現(xiàn)代研究表明疏花蛇菰含有酚酸、多糖、黃酮等多種化學成分，可以用于原發(fā)性肝癌、肝硬化等肝病的治療，但是目前對其研究較少。為了明確疏花蛇菰的物質基礎，為該藥的臨床應用提供科學依據(jù)，本實驗對疏花蛇菰的化學成分進行了研究，從該植物石油醚部位中分離得到5個化合物，分別鑒定為角鯊烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)?；衔?-4為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

數(shù)顯調溫熱風槍，寧波得力工具有限公司；Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀(TMS為內標),德國Bruker公司；1000Y西廚多功能粉碎機，永康市鉑歐五金制品有限公司；WFH-308B型三色紫外分析儀，上海精科實業(yè)有限公司； New Classic MF型電子天平，瑞士Metter-Toledo公司；Buchi 旋轉蒸發(fā)儀，瑞士步琦有限公司；GF254 薄層硅膠板，青島海洋化工有限公司；柱層析硅膠(140～160目，200～300目)，青島海洋化工有限公司；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，美國GE公司。

無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇(分析純)，天津市富宇精細化工有限公司；純凈水，華潤怡寶飲料有限公司。

實驗用材料購于云南省昆明市新螺獅灣中藥材市場，由貴州中醫(yī)藥大學江洪副教授鑒定為蛇菰科蛇菰屬疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)的全草。標本存放于貴州省苗醫(yī)藥重點實驗室(標本號為2018100402)。

2 提取與分離

干燥疏花蛇菰5 kg，粉碎成粗粉，1.5倍95%乙醇冷浸提取3次，回收溶劑，合并提取液，濃縮得浸膏800 g。將浸膏分散于2 L水中，經(jīng)過石油醚萃取、回收石油醚得到石油醚部分浸膏250 g。石油醚部分用200～300目硅膠拌樣，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得到A～C三個流份。A部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 100:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到A1～ A2兩個流份，A1再經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 70：1洗脫)得到化合物1(25 mg)，A2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 50:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物2(33 mg)；B部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯50:1洗脫)得到B1～B2兩個流份，B1經(jīng)Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物3(30 mg)、B2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯70:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)化合物4(21 mg)；C部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯7:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物5(273 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：角鯊烯

黃色油狀液體，分子式為C30H50。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.06～5.18(1H, m, H-3, 7, 11, 14, 18, 22), 1.93～2.14(2H, m, H-4, 5, 8, 9, 12, 13, 16, 17, 20, 21), 1.68(3H, s, H-1, 24), 1.60(3H, 重疊, H-25～30);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 17.5(C-1, 24), 131.1(C-2, 23), 124.2(C-3, 22), 26.8(C-4, 21), 39.6(C-5, 20), 134.7(C-6, 19), 124.1(C-7, 14), 26.5(C-8, 17), 39.6(C-9, 16), 134.9(C-10, 15), 124.1(C-11, 18), 28.1(C-12, 13), 25.5(C-25, 30), 15.8(C-26, 29), 15.9(C-27, 28)。以上數(shù)據(jù)與文獻[2]報道基本一致，故鑒定該化合物為角鯊烯。

化合物2：羽扇豆醇乙酸酯

白色粉末，分子式C32H52O2。氫譜數(shù)據(jù)中顯示在化學位移4.68出現(xiàn)d峰且耦合常數(shù)為2.4 Hz，化學位移4.57出現(xiàn)d峰且耦合常數(shù)為2.4 Hz，說明是一組相關峰；在化學位移2.37出現(xiàn)d 峰。碳譜數(shù)據(jù)中顯示化學位移在14.5, 16.2, 16.0, 16.5, 18.0, 19.3， 21.3, 27.9分別為甲基碳信號，化學位移150.8和109.4為一組烯烴碳信號，化學位移170.9為酯基碳信號。該化合物的數(shù)據(jù)與文獻[3]報道基本一致，故鑒定該化合物為羽扇豆醇乙酸酯。

化合物3：羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。該化合物與化合物2在母體結構上一致，1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中母體結構上質子信號類似，唯一不同在于該化合物還有脂肪鏈，故在高場區(qū)質子信號較為豐富，氫譜信號中化學位移在2.28為t 峰，耦合常數(shù)為7.5 Hz，峰面積顯示有2個質子，該峰為連酯基的質子信號；碳譜數(shù)據(jù)角甲基化學位移值與化合物2相似，在化學位移151.0、109.4為一對烯烴碳信號，在173.7為酯基碳信號，不同的是該化合物多了脂肪酸上的碳信號，即多了甲基碳和一些亞甲基碳信號。該化合物的數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定該化合物為羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物4：齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中化學位移在5.18 為t峰，耦合常數(shù)為3.7 Hz，氫譜信號中化學位移在2.29為t峰，耦合常數(shù)為7.5 Hz，峰面積顯示有2個質子，該峰為連酯基的質子信號；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)中化學位移在15.6, 16.8, 16.8, 26.0, 23.6, 28.1, 28.4, 33.4均為母體結構上角甲基碳信號，化學位移在14.1為脂肪鏈上甲基碳信號，化學位移在121.6, 145.2為一對烯烴碳信號，化學位移在173.7為酯基碳信號，該化合物數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定該化合物為齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物5：

白色結晶，分子式C29H50O。氫譜數(shù)據(jù)中，化學位移在5.30(1H, m) 為烯烴質子信號；化學位移在1.09(3H, s), 1.01(3H, s), 0.92(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.84(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.80(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.68(3H, s) 為6個角甲基質子信號；碳譜數(shù)據(jù)中，化學位移在11.0, 12.0, 17.9, 18.9, 18.9, 19.1為6個角甲基碳信號，化學位移在121.0, 140.0為一對烯烴碳信號以及化學位移在71.0為連羥基的碳信號。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

4 結 論

疏花蛇菰石油醚部位經(jīng)過硅膠柱層析、凝膠柱層析等分離技術和波譜數(shù)據(jù)鑒定得到5個化合物，分別是為角鯊烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)，化合物1～4均為萜類化合物，化合物5為甾醇?；衔?具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種藥理活性[7～8]；化合物2具有抗完全弗羅因德氏佐劑誘導的大鼠關節(jié)炎作用[9]；化合物5具有降血脂、抗癌、抑菌等多種藥理活性[10]，化合物1、5在現(xiàn)代研究中具有較好的活性，非常具有研究價值。蛇菰屬藥用資源相對豐富，民間藥用基礎深厚，全世界約有18個屬120種，我國2個屬20種，廣泛分布于臺灣、四川、貴州、云南等地。近年來國內外學者對蛇菰屬植物研究廣泛，如筒鞘蛇菰、杯莖蛇菰、印度蛇菰等蛇菰的研究相對成熟且廣泛，但疏花蛇菰的基礎研究相對較少，本課題對疏花蛇菰化學成分進行研究，為其開發(fā)與利用提供參考。