太子參參須多糖對小鼠OVA蛋白的免疫佐劑作用研究

曾 麗，甘思言，杜鎣鎣，喬 石，張炎達，黃一帆，王全溪*，馬玉芳*

（1.中西獸醫(yī)結(jié)合與動物保健福建省高等學(xué)校重點實驗室，福建 福州 350002；2.福建省獸醫(yī)中藥與動物保健重點實驗室（福建農(nóng)林大學(xué)），福建 福州 350002；3.福建貝迪藥業(yè)有限公司，福建 寧德 355399）

中藥含有多種免疫調(diào)節(jié)成分，具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用。隨著研究的深入，越來越多的植物提取物被應(yīng)用于疫苗中作為佐劑，其成分包括多糖、皂苷、黃酮和異黃酮、多酚等[1-2]。太子參參須多糖（Radix pseudostellariae fibrous roots polysaccharide，RP-FRP）是從太子參（Pseudostellaria heterophylla）參須中提取的活性成分，已有研究表明，RPFRP 能夠提高動物機體的免疫功能[3-6]，本研究室前期實驗也證明了RPFRP 具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用[4,7]，由此推測其具有增強機體對抗原的免疫應(yīng)答潛力。卵清白蛋白（Ovalbumin，OVA）作為一種模式抗原常被以注射方式免疫機體用于檢驗疫苗的佐劑效力[8]。有研究表明植物提取物通過口服方式給藥可增強模式抗原特異性抗體效價，起到免疫佐劑的作用[9]。

目前關(guān)于RPFRP 協(xié)助抗原免疫機體的佐劑效果研究鮮見報道，因此本實驗將不同劑量的RPFRP 以口服方式給藥后再以注射的方式將OVA 模式抗原免疫小鼠，通過檢測免疫小鼠相關(guān)的免疫學(xué)指標(biāo)，探究RPFRP 對模式抗原OVA 的免疫佐劑作用及可能的作用機理，為進一步尋找高效、無毒、安全的中藥免疫佐劑提供實驗參考。

1 材料與方法

1.1 主要實驗材料60 只20±2g 清潔級雌性ICR 小鼠購自福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。太子參參須（柘榮縣所產(chǎn)）由福建貝迪藥業(yè)有限公司提供。 采用水提醇沉法提取RPFRP，經(jīng)純化后測得多糖含量為62.7%。金標(biāo)級OVA 購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；RPMI 1640 培養(yǎng)基購自Gibco 公司；胎牛血清購自CellMax 公司；PBS 購自美國Hyclone 公司；紅細胞裂解液、刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）購自美國Sigma 公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；細胞因子ELISA 檢測試劑盒、特異性IgG 抗體及其亞類ELISA 檢測試劑盒購自上海邦奕生物有限公司；APC Anti-Mouse CD3e、 FITC Anti-Mouse CD4、 PE Anti-Mouse CD8a 購 自Tonbo Biosciences 公 司。

1.2 小鼠免疫實驗設(shè)計60 只3 周齡～4 周齡ICR 小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后隨機分成對照空白組（CK 組）、OVA 免疫對照組（OVA 組）、OVA+RPFRP 低、中、高劑量組（50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg，即D、Z、G 組）共5 組，12 只/組。本實驗免疫程序參考文獻[10-11] 方法改進，在實驗開始的第1 d～第5 d 和第16 d～第20 d，除CK 組和OVA 組小鼠灌胃雙蒸水之外，其他組分別灌胃對應(yīng)劑量RPFRP。第6 d 和第21 d，除CK 組小鼠經(jīng)腹股溝皮下注射0.2 mL/只無菌PBS 外，其余各組小鼠均經(jīng)腹股溝皮下注射0.2 mL/只即100 μg/只OVA 溶液，抗原含量≥99.9%。飼養(yǎng)期間各組小鼠自由采食、飲水。第36 d 將各組小鼠摘眼球采血，分離血清，采用ELISA 法檢測各組小鼠血清中細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）、特異性IgG 抗體及其亞類（IgG1、IgG2a 和IgG2b）含量，經(jīng)頸椎脫臼法迫殺各組小鼠，采用MTT 法檢測小鼠脾淋巴細胞增殖指數(shù)及NK 細胞活性、qRT-PCR 法檢測各組小鼠脾淋巴細胞中的細胞因子以及轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄水平，以及采用流式細胞術(shù)檢測各組小鼠脾細胞中CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞亞群數(shù)量及CD4+/CD8+T 細胞比值。

1.3 脾淋巴細胞懸液制備小鼠迫殺后無菌取脾，置于研缽中研磨，加入3.75 mL PBS 緩沖液后混勻，過濾，各組標(biāo)記清楚，參考文獻[12]制備脾淋巴細胞懸液，臺盼蘭法計數(shù)活細胞≥95%，用RPMI 1640 完全培養(yǎng)液調(diào)到所需濃度。

1.4 各組小鼠脾淋巴細胞增殖水平的測定在96孔板里加入5×106個/mL 脾細胞懸液100 μL，空白組孔只加100 μL RPMI 1640 完全培養(yǎng)液，實驗孔分別加入4 μg/mL ConA 稀釋液（用于刺激T 淋巴細胞增殖）、10 μg/mL LPS 稀釋液（用于刺激B 淋巴細胞增殖）、10 μg/mL OVA 稀釋液（用于刺激淋巴細胞增殖）各100 μL，各重復(fù)3 孔。于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)44 h 后，各孔再分別添加5 mg/mL 的MTT 20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后，2 000 r/min 離心5 min，棄上清，加入150 μL 酸性DMSO，低速遮光震蕩10 min，空白孔調(diào)零后測定其余各孔OD492nm值。參照文獻[12]公式計算小鼠脾淋巴細胞刺激指數(shù)（SI），SI=實驗孔OD492nm值/空白孔OD492nm值。

1.5 各組小鼠脾NK 細胞的活性測定于96 孔板中加入100 μL 濃1×107個/mL 的脾細胞懸液作為效應(yīng)細胞，另再取濃度為2×105個/mL YAC-1 腫瘤細胞懸液作為靶細胞（效應(yīng)細胞與靶細胞體積比為50：1）100 μL加入上述含脾細胞的孔中，作為實驗孔；另做效應(yīng)細胞對照孔（只加脾細胞）、靶細胞對照孔（只加YAC-1 細胞）和空白對照孔（不加任何細胞）。于微量震蕩儀上震蕩片刻，置于37 ℃、 5% CO2培養(yǎng)4 h，各孔再加入5 mg/mL 的MTT，20 μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；2 000 r/min 離心5 min，去上清，按150 μL/孔加入酸性DMSO 溶液（含4% 1N HCl），避光，低速遮光震蕩10 min，空白孔調(diào)零后測定其余各孔OD492nm值，根據(jù)公式算NK 細胞殺傷活性：NK 細胞活性=[靶細胞對照OD492nm值-（實驗組OD492nm值-效應(yīng)細胞對照組OD492nm值)]/靶細胞對照OD492nm值×100%。

1.6 各組小鼠血清細胞因子、特異性抗體及其亞類含量的檢測小鼠麻醉后摘眼球取血分離血清，-20 ℃保存。利用相應(yīng)ELISA 試劑盒檢測血清細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10 和IFN-γ）以及特異性IgG 及其亞類（IgG1、IgG2a、IgG2b）抗體的水平。

1.7 各組小鼠脾細胞因子及轉(zhuǎn)錄因子mRNA 轉(zhuǎn)錄水平檢測取1.3 制備的脾細胞懸液，采用TRIzol 法提取RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA 后作為模板，采用參考文獻[12-13]中qRT-PCR 方法檢測小鼠脾臟細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10 和IFN-γ）及轉(zhuǎn)錄因子（T-bet、GATA-3）mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。計算公式參照文獻[14]：相對表轉(zhuǎn)錄水平=2-ΔΔCt，ΔΔCt=（Ct目的基因-Ct管家基因）實驗組-（Ct目的基因-Ct管家基因）對照組。引物序見表1。

表1 基因及引物序列Table 1 Gene and primer sequences

1.8 各組小鼠脾臟T 淋巴細胞亞群分析取第36 d的各組小鼠脾臟，參照文獻[12]制備脾細胞懸液，各組小鼠脾細胞各取100 μL，分別加入CD3、CD4 和CD8 抗體各10 μL（0.05 μg/μL）后混勻，同時分別設(shè)CD3、CD4 和CD8 抗體標(biāo)記管各1 支（共3 支，均不加細胞）、1 支空白管。4 ℃避光孵育15 min 后，各管分別加入1 mL 紅細胞裂解液，混勻避光靜置15 min，1 500 r/min 離心5 min，棄上清。分別各用1 mL pH值呈中性的PBS 沉淀兩遍，最后用300 μL 的PBS 將沉淀重懸后置于冰上，采用流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟中的CD3+、CD4+和CD8+T 細胞的數(shù)量及CD4+/CD8+T 細胞的比例。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計所有數(shù)據(jù)均利用SPSS Statistics 24.0軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA），利用LSD 法進行多重比較，P<0.05 表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 RPFRP 對小鼠脾淋巴細胞增殖水平影響的測定結(jié)果本實驗開始的第36 d（后同），迫殺各組小鼠取脾細胞制備懸液，采用MTT 法檢測RPFRP 對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。結(jié)果顯示，與CK組相比，各劑量RPFRP 均能夠顯著提高T 細胞和淋巴細胞的SI值（P<0.05）；與OVA 組比，各劑量RPFRP 均能夠顯著提高T細胞的SI值（P<0.05），其中低、中劑量的RPFRP能夠顯著提高淋巴細胞的SI 值（P<0.05）；各劑量RP-FRP 組之間的T 細胞和淋巴細胞的SI 值均差異不顯著（P>0.05）；各組之間B 細胞的SI 值均差異不顯著（P>0.05）（圖1）。表明RPFRP 能夠提高小鼠脾臟T 細胞及淋巴細胞的增殖，從而在一定程度上促進小鼠對OVA 的體液免疫反應(yīng)。

圖1 RPFRP對小鼠脾淋巴細胞增殖水平影響的檢測結(jié)果Fig.1 Results for the effect of RPFRP on the proliferation level in spleen lymphocytes in experimental mice

2.2 RPFRP 對小鼠NK 細胞殺傷活性影響的檢測結(jié)果采用MTT 法檢測RPFRP 對小鼠NK 細胞殺傷活性的影響。結(jié)果顯示， CK 組小鼠NK 細胞對YAC-1腫瘤細胞的殺傷活性最低，與OVA 免疫組小鼠差別不顯著（P>0.05），雖然各劑量RPFRP 組小鼠NK 細胞的殺傷活性與CK 組和OVA 組差異不顯著（P>0.05），但均對NK 細胞的殺傷活性有一定的促進作用，且以高劑量的RPFRP 效果較好（圖2）。表明RPFRP 能夠在一定程度上促進小鼠脾臟NK 細胞對YAC-1 腫瘤細胞的殺傷活性。

圖2 各組小鼠脾臟NK細胞殺傷活性的檢測結(jié)果Fig.2 Results for the killing activity of NK cell in spleen of experimental mice

2.3 RPFRP 對小鼠血清中細胞因子含量影響的檢測結(jié)果采用ELISA 試劑盒檢測各組小鼠血清中的細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）含量，分析RPFRP 對小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ 含量的影響。結(jié)果顯示，各劑量RPFRP 組小鼠血清中IL-2 含量與CK 組和OVA 組差異均不顯著（P>0.05）；Z、D 組小鼠血清中的IL-4 含量較CK 組顯著升高，較OVA 組差異不顯著（P>0.05）；各組小鼠血清中的IL-10 含量均差異不顯著（P>0.05）；G 組小鼠血清中的IFN-γ 含量較CK 組顯著提高（P<0.05），其余RP-FRP 組IFN-γ 含量較OVA 免疫組雖有一定升高，但均差異不顯著（P>0.05）（圖3）。表明RPFRP 能夠通過刺激機體分泌IL-4 和IFN-γ 來提高細胞的免疫反應(yīng)能力，從而在一定程度上增強機體對OVA 的免疫應(yīng)答。

圖3 RPFRP對小鼠血清中細胞因子含量影響的檢測結(jié)果Fig.3 Results for the effect of RPFRP on cytokines in serum of experimental mice

2.4 RPFRP 對小鼠血清中特異性IgG 抗體及其亞類水平影響的檢測結(jié)果采用ELISA 試劑盒檢測各組小鼠血清中特異性IgG 抗體及其亞類（IgG1、IgG2a、IgG2b）水平，結(jié)果顯示，與CK 組相比，其余各組小鼠血清中的特異性IgG 及各亞類抗體水平均顯著上升（P<0.05），且RPFRP 高劑量組IgG 抗體水平比OVA 免疫組顯著提高（P<0.05）；與OVA 組相比，各劑量RPFRP 組小鼠血清中的特異性IgG1 抗體水平均有所提高，但均差異不顯著（P>0.05）；G、Z組IgG2a 抗體水平比OVA 組顯著升高（P<0.05）；與OVA 組相比，各劑量RPFRP 組小鼠血清中的IgG2b抗體水平均有升高的趨勢，但以高劑量RPFRP 組的IgG2b 抗體水平升高顯著（P<0.05）（圖4）。表明RP-FRP 可以增強小鼠機體對OVA 的免疫應(yīng)答，促進相應(yīng)抗體分泌，提高機體的體液免疫應(yīng)答。

圖4 RPFRP對小鼠血清中特異性IgG抗體及亞類含量影響的檢測結(jié)果Fig.4 Results for the effect of RPFRP on the specific antibody in serum of experimental mice

2.5 RPFRP 對小鼠脾臟細胞因子及轉(zhuǎn)錄因子mRNA 轉(zhuǎn)錄水平影響的檢測結(jié)果采用qRT-PCR 方法檢測各組小鼠脾淋巴細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10 和IFN-γ）及轉(zhuǎn)錄因子（T-bet、GATA-3）mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，本實驗開始的第36 d，與CK組相比，OVA 組、各劑量RPFRP 組小鼠脾淋巴細胞IL-2 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平均顯著升高（P<0.05）；而與OVA 免疫組比，G、Z 組小鼠脾淋巴細胞IL-2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著升高（P<0.05）（圖5A）。與CK 組比較， G、Z 組小鼠脾淋巴細胞IFN-γ mRNA 轉(zhuǎn)錄水平顯著升高（P<0.05），而與OVA 組相比，各劑量RP-FRP 組IFN-γ mRNA 轉(zhuǎn)錄水平均有所升高，但差異均不顯著（P>0.05）（圖5A）。與CK 組相比，各劑量RP-FRP 組和OVA 組的IL-4、IL-10 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平 均顯著升高（P<0.05），但與OVA組相比，各劑量RPFRP組IL-4、IL-10 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平差異均不顯著（P>0.05）（圖5A）。各組小鼠脾細胞中T-bet、GATA-3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平均差異不顯著（P>0.05），T-bet/GATA-3 比值各組間的差異也不顯著（P>0.05）（圖5B、5C）。表明RPFRP 能夠不同程度提高免疫小鼠機體IL-2 和IFN-γ、IL-4 和IL-10 兩類細胞因子的轉(zhuǎn)錄水平，雖然T-bet、GATA-3 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平在各組間無明顯差異，但高劑量RPFRP 一直保持在最高水平。

圖5 RPFRP對小鼠脾臟細胞因子（A）、轉(zhuǎn)錄因子（B）mRNA轉(zhuǎn)錄水平及T-bet/GATA-3比值（C）影響的檢測結(jié)果Fig.5 Results for the effect of RPFRP on mRNA transcription level of cytokines(A),transcription factors(B),and the ratio of T-bet/GATA-3(C)in splenic lymphocyte of experimental mice

2.6 RPFRP 對小鼠脾臟T 淋巴細胞亞群影響的檢測結(jié)果以流式細胞術(shù)檢測各組小鼠脾細胞中T 細胞亞群的含量以及及CD4+/CD8+T 細胞數(shù)量的比值，以分析RPFRP 對小鼠脾T 細胞亞群的影響。結(jié)果顯示，G、Z 組和小鼠脾細胞中的CD3+T 細胞數(shù)量較CK 組顯著升高（P<0.05），而OVA 組CD3+T 細胞數(shù)量較CK 組顯著升高（P<0.05）。各劑量RPFRP 組CD4+T細胞數(shù)量較CK 組顯著升高（P<0.05），G 組小鼠脾細胞中的CD4+T細胞數(shù)量較OVA組顯著升高（P<0.05）。Z、D 組小鼠脾細胞中CD8+T 細胞數(shù)量較CK 組顯著降低（P<0.05），而G、Z 組的CD8+T 細胞數(shù)量較OVA 組顯著升高（P<0.05）。OVA 組的CD4+/CD8+T 細胞比值較CK 組顯著升高（P<0.05），G、Z 組CD4+/CD8+T 細胞比值較OVA 組明顯降低（P<0.05），更接近CK 組的CD4+/CD8+T 細胞比值（圖6）。表明各劑量的RPFRP均能不同程度的調(diào)節(jié)小鼠脾臟T 細胞亞群含量及CD4+/CD8+T 細胞比值，以加強T 細胞的免疫應(yīng)答。

圖6 RPFRP對小鼠脾臟T淋巴細胞亞群及CD4+/CD8+T細胞比值影響的檢測結(jié)果Fig.6 Results for the effect of RPFRP on spleen T cell subpopulation and CD4+/CD8+T cells in experimental mice

3 討 論

淋巴細胞體外轉(zhuǎn)化及增殖能力體現(xiàn)機體細胞免疫功能的強弱，對脾淋巴細胞體外增殖的效果研究是研究機體免疫功能強弱的重要方式[15]。有研究表明，口服黃芪多糖[16]以及OVA 聯(lián)合新疆栽培一枝蒿粗多糖免疫小鼠[17]均可提高小鼠脾細胞的增殖能力，后者還可提高機體對OVA 的免疫應(yīng)答。本實驗結(jié)果表明3 種劑量的RPFRP 能夠明顯促進T 細胞的增殖，雖然其促進B 細胞增殖的效果并不顯著，但也有一定的促進作用，表明RPFRP 在一定程度上能夠協(xié)同OVA 促進小鼠脾淋巴細胞的增殖提高其的細胞、體液免疫反應(yīng)從而達到增強機體免疫力的期望。

NK 細胞具有天然的殺傷功能，機體固有免疫系統(tǒng)的激活能促使NK 細胞的分泌，在自身免疫疾病中起重要作用。有研究報道OVA 聯(lián)合多糖能夠提高小鼠脾NK 細胞的活性[11]，喬石等發(fā)現(xiàn)RPFRP 促進了ConA或LPS 誘導(dǎo)的脾臟T、B 淋巴細胞的增殖反應(yīng)，增強了其脾臟NK 細胞的活性，提高了CD4+/CD8+T 細胞的比值[18]。Oh 等發(fā)現(xiàn)，將小鼠的脾細胞與YAC-1 腫瘤細胞的共培養(yǎng)比例從12.5：1 增到50：1，YAC-1 細胞的凋亡率增加了約3 倍多[19]。本實驗采用50：1 的比例共培養(yǎng)小鼠脾臟細胞和YAC-1 細胞，結(jié)果表明各劑量的RPFRP 均可在一定程度上提高NK 細胞對YAC-1 細胞的殺傷活性，說明RPFRP 能夠刺激小鼠脾細胞的，使機體細胞免疫功能得到提升，進一步增強機體對OVA 的免疫應(yīng)答水平，這與相關(guān)研究報道類似[18-19]。

Th1 免疫反應(yīng)主要與細胞免疫有關(guān)，而Th2 免疫反應(yīng)主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)[20]，Th1/Th2 免疫反應(yīng)的平衡對機體保持健康尤為重要，前者主要產(chǎn)生IL-2、IFN-γ 等細胞因子，后者主要產(chǎn)生IL-4 和IL-10 等。Feng 等的研究結(jié)果顯示，口服川牛膝多糖可促使小鼠機體加強對OVA 的免疫應(yīng)答，其可在體外促進小鼠脾細胞中IL-4 和IFN-γ 的分泌，以及CD4+T 細胞中的IL-2、IFN-γ 和IL-4 的分泌量，表明川牛膝多糖能通過促進小鼠脾細胞因子的分泌提高其細胞免疫應(yīng)答的能力[21]；Lin 等發(fā)現(xiàn)靈芝多糖作為佐劑時能夠極大提高小鼠脾臟中的CD4+和CD8+T 細胞分泌IFN-γ 和IL-17 的能力[22]。本研究結(jié)果顯示，G 組小鼠血清中的IFN-γ 含量上升，Z、D 組小鼠血清中的IL-4 含量上升，說明RPFRP 能夠刺激機體分泌相應(yīng)的Th1 和Th2 細胞因子來提高其體液及細胞免疫能力，在一定程度上增強機體對OVA 的免疫應(yīng)答反應(yīng)。T-bet 和GATA-3 與Th1/Th2 的分化密切相關(guān)，二者可通過調(diào)節(jié)細胞因子的分泌而影響Th1/Th2 免疫反應(yīng)的平衡[23]。本研究結(jié)果顯示，G、Z 組小鼠脾淋巴細胞中IL-2、IFN-γ mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平較CK 組顯著上升；與OVA 組相比，各劑量RPFRP 組小鼠脾淋巴細胞中IL-4、IL-10 的相對轉(zhuǎn)錄水平明顯上升，Tbet/GATA-3 比值雖然無顯著升高，該值仍有一定程度的升高，說明RPFRP 可以通過同時提高Th1 和Th2細胞因子、轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄水平來提高機體的細胞免疫反應(yīng)。本研究結(jié)果中小鼠血清細胞因子含量與其脾細胞mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的結(jié)果不盡一致，其二者之間的調(diào)節(jié)關(guān)系有待進一步深入研究。

常用IgG2a 和IgG1 來分別體現(xiàn)機體的免疫反應(yīng)是偏向于Th1 還是Th2 型。在小鼠中，Th1 型免疫反應(yīng)產(chǎn)生IgG2a 亞類，Th2 型免疫反應(yīng)產(chǎn)生IgG1 亞類以及IgE[11]。Liu 等利用立方脂質(zhì)體聯(lián)合黃精多糖制備成免疫佐劑與OVA 一起免疫小鼠，結(jié)果顯示免疫后該免疫佐劑可以促使小鼠特異性IgG 的分泌，提高其體液免疫反應(yīng)，表明被修飾的黃精多糖具有很好的佐劑作用[24]；張愛蓮等研究發(fā)現(xiàn)新疆栽培一枝蒿粗多糖可作為小鼠OVA 蛋白的免疫佐劑增強其的體液和細胞免疫應(yīng)答[16]。本研究結(jié)果表明，3 種劑量的RPFRP 均能夠提高OVA 特異性IgG1 和IgG2a 抗體水平，其中高中劑量的RPFRP 比OVA 更能促進IgG2a、IgG2b 抗體的分泌，且3 種劑量RPFRP 組小鼠血清中IFN-γ 的含量及其脾臟中IFN-γ mRNA 轉(zhuǎn)錄水平均升高，表明RPFRP 可誘導(dǎo)小鼠機體Th1 和Th2 反應(yīng)促進IgG1 和IgG2a 抗體分泌，且由于IFN-γ 可促進CD4+T細胞向Th1 細胞分化[25]，表明RPFRP 可能更趨向于誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生Th1 型免疫反應(yīng)，提高細胞免疫反應(yīng)，調(diào)動機體T 細胞的活化，上調(diào)小鼠機體對OVA 的免疫應(yīng)答，其中以中高劑量RPFRP 的免疫效果最強。

作為維持免疫功能最重要的細胞群之一，T 淋巴細胞亞群間通過相互協(xié)調(diào)，保證機體免疫功能的正常運行[26]，其主要包括CD3+、CD4+和CD8+T 細胞，各亞群細胞的數(shù)量及CD4+/CD8+T 細胞的比值可表示機體的免疫情況[26]。張愛蓮等研究發(fā)現(xiàn)，新疆栽培一枝蒿粗多糖可以上調(diào)小鼠免疫OVA 后脾臟CD3+、CD4+、CD8+T 細胞數(shù)量，同時提高CD4+/CD8+T 細胞的比值，增強T 細胞的免疫應(yīng)答[16]。本研究結(jié)果表明，低、中劑量的RPFRP 能夠提高小鼠脾淋巴細胞中CD4+T 細胞數(shù)量，中、高劑量的RPFRP 能夠顯著提高CD3+T 細胞數(shù)量，且各劑量RPFRP 均可降低CD4+/CD8+T 細胞的比值，從而提高小鼠的免疫反應(yīng)，增強機體對OVA 的應(yīng)答過程。但RPFRP 如何通過口服途徑發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用仍需進一步探究。

RPFRP 在一定程度上能夠提高小鼠脾淋巴細胞的增殖水平，提高NK細胞的殺傷活性，提高OVA特異性IgG抗體及其亞類的含量，促進相關(guān)細胞因子的分泌及提高細胞因子、轉(zhuǎn)錄因子mRNA 轉(zhuǎn)錄水平等從而提高小鼠的免疫功能，增強小鼠機體對OVA 的免疫應(yīng)答，起到一定佐劑的作用。本研究既可豐富太子參參須的免疫學(xué)內(nèi)容，又可為節(jié)約太子參資源，為進一步尋找高效、無毒、安全的中藥免疫佐劑提供一定參考。