一例保育豬鏈球菌感染的臨床診斷和防控

趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430064）

豬鏈球菌是由多種致病性豬鏈球菌引起的一種人畜共患病，可引起豬的關節(jié)炎、腦膜炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎、淋巴結膿腫等[1]，主要表現(xiàn)為高熱便秘、跛行、皮膚發(fā)紅、敗血癥為特征。豬鏈球菌病傳染源為病豬和帶菌豬，病菌經(jīng)鼻液、唾液、傷口感染等途徑傳播，常呈地方性流行，臨床上其發(fā)病率逐年升高，成為威脅豬場的主要致病性病原菌，給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重的經(jīng)濟損失[2]。豬鏈球菌還可感染人，是一種重要的人畜共患病原菌[3]，做好豬鏈球菌病綜合防控，在畜牧業(yè)和公共衛(wèi)生方面具有重大意義。筆者分享一起某小型豬場保育豬感染豬鏈球菌診斷和防控案例，為養(yǎng)豬同行對豬鏈球菌感染的防控提供借鑒參考。

1 發(fā)病情況

2021年12月下旬，武漢某小型豬場外購引進保育豬陸續(xù)開始發(fā)病，現(xiàn)場臨床診斷時已死亡5頭，病豬主要表現(xiàn)精神沉郁，食欲下降或廢絕，體溫41.0～42.5 ℃，稽留熱，四肢劃水，轉圈，眼結膜發(fā)紅，皮膚充血、潮紅，便秘，有的糞表面上附有黏膜，尿黃，四肢內(nèi)側、腹下皮膚發(fā)紫，關節(jié)腫脹（圖1），且局部出現(xiàn)波動感，驅趕時因疼痛發(fā)生尖叫，觸診出現(xiàn)明顯的疼痛反應，跛行，共濟失調(diào)，少部分病豬后軀軟弱無力，倒下臥地不起，出現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀，后期犬坐姿勢，呼吸困難，最后衰竭死亡，其中1頭急性死亡的豬天然孔流出暗紅色血液。

圖1 關節(jié)腫脹

2 臨床剖檢

挑選4頭具有典型臨床癥狀的病、死豬進行解剖，血液呈醬油色，凝固不良；斷牙處呈黑灰色；全身淋巴結出血、水腫，切面外翻；胸腔和心包積液，呈淡黃色；關節(jié)周圍水腫、滑膜腫脹充血、關節(jié)液混濁、化膿性干酪樣物質。其中1頭病例可見肺表面散布有出血點，肺臟邊緣有黃色纖維素性滲出物，肺間質增寬；脾稍微腫脹，呈暗紅色，脆而軟，邊緣有少量出血梗死區(qū)；腎臟腫大，肝、胃、腸未見明顯病理變化。分別無菌采集胸腔積液、關節(jié)液、淋巴結、脾、肺臟等病料4份冷藏保存后立即送實驗室進行檢測。

3 診斷

3.1 細菌分離培養(yǎng)

4份樣品分別接種于鮮血瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)，菌落呈灰白色、圓形或橢圓形、針尖大小見圖2，出現(xiàn)β型溶血。挑取典型菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，鏡檢結果見圖3，呈革蘭氏陽性，單個、成對、短鏈或長鏈的球菌。

圖2 豬鏈球菌培養(yǎng)結果

圖3 分離菌株染色鏡檢結果

3.2 PCR檢測

分別挑選單個菌落接種于含10%胎牛血清的TSB液體培養(yǎng)基，37 ℃、160 r/min震蕩培養(yǎng)18 h，增殖培養(yǎng)后按照要求制備細菌DNA模板，采用25 μL的反應體系對鏈球菌（SS）基因進行PCR擴增，當樣品中含有鏈球菌時會擴增出294 bp的陽性片段[4]。PCR檢測擴增產(chǎn)物電泳結果見圖4。結果1號、2號、4號樣品中擴增出294 bp的片段，檢出SS陽性比例為75%。

圖4 PCR擴增產(chǎn)物電泳結果

3.3 動物致病性試驗

取增菌培養(yǎng)后的豬鏈球菌菌液，3 000 r/min離心去上清液，對菌體用PBS液重懸，將菌液濃度稀釋至1×109CFU/mL。選擇20只SPF級昆明小鼠，隨機分為2組，每組10只，試驗組腹腔注射稀釋后菌液0.2 mL/只，對照組注射生理鹽水，相同條件下飼養(yǎng)觀察7 d，每天記錄存活情況。攻菌12 h后試驗組部分小鼠出現(xiàn)精神沉郁、采食下降，至試驗結束共有7只小鼠死亡，對照組小鼠無死亡。試驗結果表明，該場分離菌株具有較強的致病性。

3.4 藥敏試驗

將增菌培養(yǎng)后菌液用生理鹽水稀釋為1×105CFU/mL，取0.2 mL用玻璃棒將其均勻涂布于5%新生牛血清TSA平板上，然后用無菌鑷子取20種常見藥物的藥敏紙片，貼于已接種被檢菌株的平板上，每個平板藥敏紙片不超過6個，紙片之間距離1～2 cm，37 ℃培養(yǎng)18 h，取出分別測定抑菌環(huán)直徑。參考藥敏紙片說明書判定藥敏結果，分析菌株對各種藥物敏感性。鏈球菌藥敏試驗結果見表1，結果表明，分離的菌株對阿莫西林、頭孢吡肟、頭孢曲松、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢噻呋高度敏感，對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、阿奇霉素、慶大霉素、林可霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、磺胺嘧啶、氟苯尼考、多黏菌素耐藥。

表1 鏈球菌藥敏試驗結果

4 診斷結果

根據(jù)該場發(fā)病情況、流行病學調(diào)查、臨床剖檢、實驗室細菌分離培養(yǎng)和PCR檢測結果，確診該場保育豬感染豬鏈球菌。

5 綜合防控

5.1 生物安全防范

首先加強豬群健康巡視，及時隔離疑似病豬，集中隔離欄有效治療，控制人員和物品流動，對病死豬及其排泄物和污染的飼料進行無害化處理，減少環(huán)境中病原菌，防止交叉污染。其次加強消毒管理，使用0.5%過氧乙酸對食槽、欄舍、工具、周圍環(huán)境消毒，同時棟舍主走道鋪撒生石灰。

5.2 藥物預防保健

對無臨床癥狀豬群及時進行藥物保健緊急預防，每噸飼糧分別添加10%阿莫西林600 g+10%鹽酸多西環(huán)素700 g+30%替米考星500 g，連用5～7 d；采用每100 kg水中添加復方黃芪多糖100 g+電解多維60 g+維生素C 60 g，自由飲用，連用5 d。

5.3 對癥治療

早發(fā)現(xiàn)，早治療，及時選擇本場豬鏈球菌敏感藥物并保證用藥量。首選頭孢類藥物，頭孢噻呋5 mg/kg+安乃近2～4 mL+地塞米松1～2 mL，肌注1 d 1次，連用3 d；如果病豬關節(jié)出現(xiàn)嚴重膿腫，可用無菌手術刀切開膿腫部位，將膿液全部排除，使用0.1%高錳酸鉀溶液沖洗干凈，涂碘酊，對創(chuàng)面敷撒1瓶（1 g）氨芐西林粉劑，采用繃帶包扎，隔離飼養(yǎng)。嚴重病例需及時輸液（頭孢噻呋5 mg/kg+復合維生素B 1 mL+維生素C 1 mL+地塞米松1 mL+5%葡萄糖氯化鈉注射液40～60 mL），且肌注安乃近2～4 mL。對采食基本正常保育豬也可選擇中草藥蒲公英30 g+紫花地丁30 g+七葉一枝花15 g，全部煎汁拌料喂服，每天1次，連用3 d。

5.4 精細化飼養(yǎng)管理

首先加強飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生，改善飼養(yǎng)環(huán)境，舍內(nèi)添加暖風機，注意通風，改善空氣質量，溫濕度控制在豬只適宜范圍內(nèi)，保持豬舍清潔、干燥，營造舒適豬舍小環(huán)境。其次提供優(yōu)質飼料和潔凈飲水，減少應激，提高機體的免疫力與抗病力。最后做好豬群管理，實行全進全出，科學調(diào)節(jié)豬群飼養(yǎng)密度，如果豬只出現(xiàn)外傷時要及時進行處理，做好消毒工作，防止豬鏈球菌感染。

6 分析與討論

病因初步分析。首先外購引進保育豬未檢測隔離，因氣溫驟降，在應激狀態(tài)下豬群免疫力下降；其次仔豬并欄時相互咬架導致皮膚、黏膜損傷，而且飼養(yǎng)員清掃欄舍時用力過大，造成部分仔豬皮膚劃痕，通過傷口傳播成為鏈球菌感染的主要方式；最后豬舍環(huán)境衛(wèi)生差，通風不良，有害氣體超標，未進行有效消毒，為鏈球菌的繁殖提供了有利條件。豬鏈球菌為條件致病菌，與豬的免疫狀態(tài)、環(huán)境因素、致病菌株的毒力有直接的關系，良好的飼養(yǎng)管理和適當?shù)乃幬锉＝】捎行Ы档拓i鏈球菌病發(fā)病風險[3]。當環(huán)境溫度與通風出現(xiàn)矛盾時，優(yōu)先考慮溫度，豬的體溫在一定程度內(nèi)具有自我保健的本能，體溫升高，豬的免疫力增強。

本次藥敏試驗結果表明，鏈球菌分離菌株對頭孢類藥物高度敏感，在臨床防治豬鏈球菌病過程中，在其發(fā)病早期首選頭孢類藥物，選擇交替用藥方式，科學、合理、規(guī)范用藥。因豬鏈球菌滅活疫苗免疫效果不達預期，臨床上防治豬鏈球菌仍然依靠抗菌藥物。由于大量抗菌藥物使用和濫用，豬鏈球菌的耐藥特性呈上升趨勢，同一地區(qū)不同豬場流行的豬鏈球菌耐藥情況差異較大，應引起養(yǎng)豬場的高度關注。肖延光等報道2021年湖北分離菌株對氟苯尼考、環(huán)丙沙星、慶大霉素高度敏感[5]，但本場分離菌株對氟苯尼考、環(huán)丙沙星、慶大霉素均產(chǎn)生了耐藥，建議養(yǎng)豬場根據(jù)本場藥敏試驗結果首選高敏感藥物，避免臨床盲目用藥，遏制病原細菌耐藥性的產(chǎn)生[6]。在禁抗、減抗的大背景下，開展豬鏈球菌耐藥性檢測及中草藥替代防治研究將對指導臨床科學選藥及控制其耐藥性的傳播具有重要的指導意義。