β-谷甾醇靶向CDC25B抑制肝癌細(xì)胞增殖

王凱，李衛(wèi)，李志芳，紀(jì)會(huì)瓊，郭志偉，曹俊秋

（1.達(dá)州中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院公共基礎(chǔ)部，四川達(dá)州 635000；2.達(dá)州市疾病預(yù)防控制中心附屬醫(yī)院，四川達(dá)州 635000；3.南充市中心醫(yī)院影像科，四川南充 637000；4.四川大學(xué)華西醫(yī)院肝膽外科，四川成都 610000）

肝癌是發(fā)生在肝臟的惡性實(shí)體瘤，肝癌發(fā)病早期無典型癥狀，晚期可表現(xiàn)為發(fā)熱、乏力和肝臟區(qū)域疼痛等癥狀，肝癌早期治愈幾率較高，晚期治療方案復(fù)雜且患者預(yù)后差異較大［1］。肝癌發(fā)病率位居惡性腫瘤第4位，致死率位居第2位，男性發(fā)病率高于女性，肝癌發(fā)病具體作用機(jī)制和誘發(fā)因素尚未闡明，普遍認(rèn)為肝癌發(fā)病與飲酒、食用霉變食物、病毒性肝炎、寄生蟲和遺傳等因素有關(guān)［2］，肝癌基因組學(xué)研究［3］顯示肝癌發(fā)病或進(jìn)展和轉(zhuǎn)移與多種基因突變、表觀遺傳修飾有關(guān)，肝細(xì)胞癌變后會(huì)重新激活端粒酶，導(dǎo)致癌變細(xì)胞增殖失控。細(xì)胞分裂周期25B（cell division cyclin 25B，CDC25B）是調(diào)控細(xì)胞周期的蛋白酪氨酸磷酸酶家族成員CDC25 的異構(gòu)體之一，在細(xì)胞周期的特定階段發(fā)揮作用［4］，有研究［5-6］顯示CDC25B可參與乳腺癌、黑色素瘤等疾病的調(diào)節(jié)過程。多種植物中的天然成分表現(xiàn)明顯的抗腫瘤活性，其中包括紫杉醇、姜黃素、長春花素等，β-谷甾醇是廣泛分布于植物中的甾醇類物質(zhì)，我國杜仲、玄參和天冬等傳統(tǒng)中草藥的藥用成分中也含有大量的植物甾醇類物質(zhì)。已有研究表明［7］紅豆杉中的β-谷甾醇和β-谷甾醇-葡萄糖苷對(duì)肝癌細(xì)胞表現(xiàn)毒性作用，但其具體作用機(jī)制尚不明確，故本研究通過肝癌數(shù)據(jù)庫平臺(tái)聯(lián)合分子生物學(xué)技術(shù)探討黃β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞和主要試劑

HepG2細(xì)胞系和Hep3B細(xì)胞系（中科院上海細(xì)胞庫），6 周齡BALB∕C Nude 裸小鼠【成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司SCXK（川）2020-030】，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵守3R 原則并通過達(dá)州中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批號(hào)20210309A）；β-谷甾醇（貨號(hào)CFN99916，純度＞95%，武漢中標(biāo)科技有限公司），CCK-8試劑盒（貨號(hào)CK04，深圳市紐邦生物技術(shù)有限公司），細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期試劑盒（貨號(hào)A025、F10797，艾美捷科技有限公司），CDC25B 抗體（貨號(hào)FNab01522，武漢菲恩生物科技有限公司），Ki67 抗體（貨號(hào)AD80028，上海研卉生物科技有限公司），PVDF 膜（貨號(hào)ISEQ00010，美國Milipore公司），蛋白提取試劑盒（貨號(hào)SD-001，美國Invent Biotechnologies 公司），LipofectamineTM2000（貨號(hào)11668019，美國Invitrogen公司）。

1.2 主要儀器

流式細(xì)胞儀（Aurora 3L-5L，美國Cytek Biosciences 公司），顯微鏡（X-Cite? 120PC Q，武漢提沃克科技有限公司），酶標(biāo)儀（SpectraMax iD3，美國Molecular Devices 公司），冷凍離心機(jī)（Selectspin?17R，美國Select BioProducts 公司），細(xì)胞培養(yǎng)箱（Galaxy 48 R，德國Eppendorf公司）。

1.3 生物信息學(xué)分析

通過SwissTarget 和TargetNet 數(shù)據(jù)平臺(tái)預(yù)測(cè)β-谷甾醇的靶點(diǎn)基因37 個(gè)，GEO2R 分析GSE101728肝癌數(shù)據(jù)集中表達(dá)上調(diào)基因并與37 個(gè)靶點(diǎn)的交集基因5 個(gè)，然后通過下載TCGA_LIHC 數(shù)據(jù)矩陣分析得到5 個(gè)基因中只有CDC25B 與肝癌TNM 分期（T1、T2-4）、臨床分期（I 期、Ⅱ-Ⅳ期）、癌癥組織分化（G1-2 分化、G3-4 分化）、復(fù)發(fā)情況（復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)）和患者生存預(yù)后（預(yù)后良好、預(yù)后不良）存在關(guān)系。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和β-谷甾醇處理

將HepG2 細(xì)胞系和Hep3B 細(xì)胞系置于DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）中培養(yǎng)的96 孔板培養(yǎng)（每孔3×105個(gè)），培養(yǎng)條件為37℃、5% CO2加濕培養(yǎng)箱，孵育12 h 后，HepG2 細(xì)胞系給予β-谷甾醇（0、5、10、15、20μmol∕L）處理48 h，Hep3B 細(xì)胞系給予β-谷甾醇（0、6、12、18、24 μmol∕L）處理48 h，加入10μL CCK-8 溶液，繼續(xù)孵育2 h，在波長450 nm處檢測(cè)光密度（OD），計(jì)算細(xì)胞活力相對(duì)活力=（實(shí)驗(yàn)組OD∕空白組OD）×100%。根據(jù)兩種細(xì)胞系的細(xì)胞相對(duì)活力情況，Hep3B 細(xì)胞系以15 μmol∕L 作為β-谷甾醇處理濃度，HepG2 細(xì)胞系以18μmol∕L 作為β-谷甾醇處理濃度，分別作用于0、1、2、3、4、5 d時(shí)使用CCK-8 法檢測(cè)在450 nm 處OD，并設(shè)置不用β-谷甾醇處理的細(xì)胞作為Control 組，并繪制生長曲線。

1.5 細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況

將HepG2 細(xì)胞和Hep3B 細(xì)胞接種至6 孔板（每孔1 000 個(gè)），孵育12 h 后，Hep3B 細(xì)胞加入β-谷甾醇至終濃度為18μmol∕L，HepG2 細(xì)胞加入β-谷甾醇至終濃度為15μmol∕L，繼續(xù)培養(yǎng)2 周，使用多聚甲醛固定15 min、1%結(jié)晶紫染色30 min，沖洗，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞集落形成數(shù)目，計(jì)算相對(duì)集落形成率=（實(shí)驗(yàn)組集落形成數(shù)目∕對(duì)照組集落形成數(shù)目）×100%

1.6 流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡情況

收集Hep3B 細(xì)胞系（15μmol∕L β-谷甾醇處理48 h）和HepG2 細(xì)胞系（18 μmol∕L β-谷甾醇處理48 h），2 000g離心5 min 收集細(xì)胞沉淀。一部分細(xì)胞沉淀中經(jīng)磷酸緩沖液洗滌2 次，75%乙醇-20℃固定24 h，0.4μL PI 避光孵育0.5 h，上樣流式細(xì)胞儀檢測(cè)處于不同細(xì)胞周期的細(xì)胞分布情況。一部分細(xì)胞沉淀中加入300μL 1×Binding Buffer 使細(xì)胞重懸，然后加入5 μL Annexin V∕FITC、10 μL PI 避光孵育15 min上樣流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.7 裸鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)

取18 只BALB∕C Nude 裸小鼠均分為Control 組和β-谷甾醇組，分別于皮下注射HepG2 細(xì)胞（8×106個(gè)細(xì)胞），同時(shí)β-谷甾醇組裸鼠腹腔注射β-谷甾醇50 mg∕kg·d，Control組裸鼠注射等體積DMSO，每2 d 測(cè)量1 次腫瘤的體積（1∕2×腫瘤長軸×腫瘤短軸2），連續(xù)14 d，處死裸鼠稱量移植瘤質(zhì)量和測(cè)量移植瘤體積，使用免疫組化檢測(cè)移植瘤中Ki67 蛋白表達(dá)水平。

1.8 免疫組化

參考文獻(xiàn)報(bào)道的方法［8］進(jìn)行免疫組化檢測(cè)蛋白表達(dá)，將移植瘤固定于40 g∕L 多聚甲醛溶液中并進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片，枸櫞酸抗原修復(fù)液微波修復(fù)10 min，磷酸緩沖液沖洗2 次，加入3%過氧化物酶阻斷液封閉30 min，加入Ki67 抗體（1：500）37 ℃反應(yīng)45 min，加入生物素標(biāo)記的二抗繼續(xù)孵育30 min，磷酸鹽緩沖液沖洗×2 次，DAB 顯色5 min，蒸餾水沖洗，蘇木素染色20 s，乙醇濃度梯度脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡（×200）下觀察Ki67 表達(dá)水平，呈棕褐色顆粒即為Ki67 表達(dá)陽性。

1.9 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)

提取細(xì)胞總蛋白，調(diào)整蛋白濃度一致，經(jīng)SDSPAGE 凝膠電泳、電轉(zhuǎn)膜至PVDF 膜，5%脫脂奶粉密封2 h，加入兔抗人CDC25B、β-actin 一抗（1：500）4 ℃孵育過夜，TBST 漂洗，加入HRP 標(biāo)記的二抗（1：500）孵育1 h，TBST 漂洗，顯色、定影，使用凝膠成像儀自帶系統(tǒng)分析蛋白條帶相對(duì)灰度值。

1.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

參照LipofectamineTM2000 說明書進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，細(xì)胞轉(zhuǎn)染前24 h 將細(xì)胞提前接種于24 孔板，當(dāng)細(xì)胞生長至融合30%～50%時(shí)，將培養(yǎng)基更換為無血清的培養(yǎng)基，加入CDC25B 過表達(dá)質(zhì)粒和空質(zhì)粒，同時(shí)每孔細(xì)胞中加入200μL 轉(zhuǎn)染液繼續(xù)孵育6 h，然后將無血清培養(yǎng)基更換為含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后，用G418 篩選出穩(wěn)定過表達(dá)CDC25B 的HepG2 和Hep3B 細(xì)胞系。使用Western blot驗(yàn)證細(xì)胞中CDC25B蛋白表達(dá)水平。β-谷甾醇處理穩(wěn)定過表達(dá)CDC25B 的HepG2 和Hep3B 細(xì)胞（作用濃度同1.5；記為β-谷甾醇+CDC25B 組），空載對(duì)照組且進(jìn)行β-谷甾醇處理的細(xì)胞記為β-谷甾醇組，不做處理的細(xì)胞記為Control 組，使用CCK-8、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡情況。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 22.0軟件、Graph pad 5.0軟件，數(shù)據(jù)以（）表示；二組計(jì)量資料的均數(shù)比較，如果每一組資料都呈正態(tài)分布并且方差齊性，組間比較采用t檢驗(yàn)，反之用校正t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；多組間計(jì)量資料的均數(shù)比較，如果每一組資料都呈正態(tài)分布并且方差齊性，組間比較采用方差分析，方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)采用Bonferroni 法進(jìn)行兩兩比較；二組生存分析使用Log-rankt檢驗(yàn)。α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CDC25B與β-谷甾醇和肝癌臨床關(guān)系分析

SwissTarget 和TargetNet 預(yù)測(cè)β-谷甾醇的靶點(diǎn)，共有37 個(gè)靶點(diǎn)。37 個(gè)靶點(diǎn)與GEO2R 分析GSE101728 肝癌數(shù)據(jù)集所得上調(diào)基因的交集基因有5個(gè)，其中包括CDC25B基因（圖1A）。TCGA_LIHC 表達(dá)數(shù)據(jù)和臨床信息比對(duì)發(fā)現(xiàn)只有CDC25B 的表達(dá)水平與肝癌患者總生存期相關(guān)，因此選擇CDC25B 進(jìn)一步研究。TCGA_LIHC 表達(dá)數(shù)據(jù)和臨床對(duì)應(yīng)信息分析顯示CDC25B 在肝癌組織表達(dá)水平顯著高于其癌旁組織（t=90.414，P＜0.001；圖1B），肝癌不同TNM 分期（T2-4）的CDC25B 表達(dá)水平顯著高于TNM 分期（T1）（F=3635.158，P＜0.001；P＜0.001；圖1C），肝癌臨床分期（Ⅱ-Ⅳ）的CDC25B表達(dá)水平顯著高于臨床分期（I）（F=3136.663，P＜0.001；P＜0.001；圖1D），肝癌G3-4 患者的CDC25B表達(dá)水平顯著高于G1-2 患者（t=38.728，P＜0.001；圖1E），肝癌復(fù)發(fā)患者的CDC25B 表達(dá)水平顯著高于未復(fù)發(fā)肝癌患者（t=29.710，P＜0.001；圖1F），預(yù)后不良肝癌患者的CDC25B 表達(dá)水平顯著高于預(yù)后良好肝癌患者（t=27.006，P＜0.001；圖1G），以CDC25B 表達(dá)水平的中位數(shù)將患者分為CDC25B 低表達(dá)組和CDC25B 高表達(dá)組，CDC25B 高表達(dá)組肝癌患者的總生存率顯著低于CDC25B 低表達(dá)組（Log-rankt=7.509，P=0.006；圖1H）。

圖1 CDC25B與β-谷甾醇和肝癌臨床關(guān)系Fig.1 Clinical relationship among CDC25B，β-sitosterol and HCC

2.2 β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

Hep3B 和HepG2 的細(xì)胞活力隨著β-谷甾醇劑量增加而逐漸降低（F=108.400，P＜0.001，圖2A；F=95.180，P＜0.001，圖2B），Hep3B（β-谷甾醇15μmol∕L）和HepG2（β-谷甾醇18μmol∕L）的細(xì)胞生存率約為50%，因此選擇此濃度做后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖2A～D）；Hep3B（β-谷甾醇15 μmol∕L）和HepG2（β-谷甾醇18μmol∕L）的相對(duì)克隆數(shù)目顯著低于Control 組（t=16.515，P＜0.001；t=22.517，P＜0.001），S 期細(xì)胞百分比均顯著低于Control 組（t=4.906，P=0.008；t=4.359，P=0.0125），G0∕G1期細(xì)胞百分比高于Control組（t=4.109，P=0.015；t=3.618，P=0.022），細(xì)胞凋亡率均高于Control 組（t=23.674，P＜0.001；t=20.577，P＜0.001；圖2E～H）。

圖2 β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響Fig.2 Effects of β-sitosterol on the proliferation and apoptosis of HCC cells

2.3 β-谷甾醇對(duì)體內(nèi)移植瘤生長的影響

β -谷甾醇組移植瘤的體積顯著低于Control 組（F=214.114，P＜0.001，圖 3A；t=2.240，P=0.040，圖3B），移植瘤質(zhì)量低于Control 組（t=2.475，P=0.025；圖3C），Ki67 相對(duì)表達(dá)水平均顯著低于Control 組（t=26.163，P＜0.001；圖3D）。

圖3 β-谷甾醇對(duì)體內(nèi)移植瘤生長的影響Fig.3 Effects of β-sitosterol on the growth of xenografted tumors in vivo

2.4 β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞CDC25B 蛋白表達(dá)的影響

Hep3B 和HepG2 細(xì)胞中的CDC25B 蛋白水平隨著β-谷甾醇濃度增加而逐漸降低，Hep3B（β-谷甾醇15μmol∕L）和HepG2（β-谷甾醇18μmol∕L）中的CDC25B 蛋白水平均隨著β-谷甾醇作用時(shí)間延長而逐漸降低（圖4）。

圖4 β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞CDC25B蛋白表達(dá)的影響Fig.4 Effects of β-sitosterol on the expression of CDC25B protein in HCC cells

2.5 β-谷甾醇通過CDC25B抑制肝癌細(xì)胞增殖

β-谷甾醇作用下Hep3B和HepG2細(xì)胞CDC25B蛋白表達(dá)降低（t=25.351，P＜0.001；t=31.859，P＜0.001；圖5A），給予CDC25穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞系可以恢復(fù)細(xì)胞中CDC25蛋白表達(dá)（F=149.686，P＜0.001；F=182.844，P＜0.001；圖5B）。Hep3B細(xì)胞的β-谷甾醇+CDC25B組的細(xì)胞生長、相對(duì)克隆數(shù)目、S期細(xì)胞百分比均顯著高于β-谷甾醇組（F=176.247，P＜0.001；F=168.153，P＜0.001；F=25.052，P=0.001），而G0∕G1期細(xì)胞百分比、細(xì)胞凋亡率均顯著低于β-谷甾醇組（F=15.490，P=0.004；F=222.843，P＜0.001）（圖5C、E、F、H）。HepG2 細(xì)胞的β-谷甾醇+CDC25B 組的細(xì)胞生長、相對(duì)克隆數(shù)目、S期細(xì)胞百分比均顯著高于β-谷甾醇組（F=186.723，P＜0.001；F=253.500，P＜0.001；F=18.138，P=0.003），而G0∕G1 期細(xì)胞百分比、細(xì)胞凋亡率均顯著低于β-谷甾醇組（F=17.138，P=0.003；F=413.382，P＜0.001；圖5D、E、G、H）。

圖5 β-谷甾醇通過CDC25B抑制肝癌細(xì)胞增殖Fig.5 β-Sitosterol inhibited the proliferation of HCC cells by CDC25B

3 討論

肝癌的臨床治療方案確定主要依賴于患者的肝功能、腫瘤侵犯程度和轉(zhuǎn)移情況，目前普遍認(rèn)為手術(shù)切除治療或肝移植治療是可能根治肝癌的重要方式，但術(shù)后復(fù)發(fā)和手術(shù)切除率低仍舊是肝癌的治療難點(diǎn)［9］。非手術(shù)治療在控制肝癌病情、輔助術(shù)前和術(shù)后治療具有重要意義，其中包括消融治療、化療、放射治療和分子靶向治療等［10］。β-谷甾醇是植物中廣泛存在的多酚羥酸類化合物，同時(shí)也是構(gòu)成真核生物細(xì)胞膜的主要成分之一，目前已經(jīng)鑒定植物甾醇約200 種，β-谷甾醇在植物油、種子和果蔬中含量較高，具有抗氧化［11］、抗衰老［12］、降低膽固醇［13］和神經(jīng)保護(hù)作用［14］。國外有研究［15］表明β-谷甾醇介導(dǎo)的銀納米粒子在人結(jié)腸癌HT-29 細(xì)胞中呈現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用，可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。本研究通過分析β-谷甾醇不同作用濃度和不同作用時(shí)間的Hep3B、HepG2 細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖趨勢(shì)發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇可以顯著抑制肝癌Hep3B 和HepG2細(xì)胞增殖，此結(jié)果在裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中也得到證實(shí)。

腫瘤增殖抑制受到多方面因素影響，其中包括細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡［16-17］，本研究結(jié)果顯示β-谷甾醇作用下的Hep3B、HepG2 細(xì)胞相對(duì)克隆數(shù)目和S期細(xì)胞百分比顯著降低，而細(xì)胞凋亡率和G0∕G1期細(xì)胞百分比顯著升高，同時(shí)體內(nèi)移植瘤中的Ki67表達(dá)水平顯著降低，說明β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞抑制作用可能是通過抑制癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞增殖速率與細(xì)胞周期正常運(yùn)轉(zhuǎn)具有密切關(guān)系，一個(gè)完整的細(xì)胞周期包括有絲分裂和分裂間期，分裂間期包括G1 期、S 期和G2 期，任何一個(gè)時(shí)期出現(xiàn)問題均會(huì)影響細(xì)胞周期的正常運(yùn)轉(zhuǎn)［18］。G1 期主要是RNA 和蛋白質(zhì)的合成，S 期是DNA 的復(fù)制［19］，Ki67 是與核糖體RNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)的核蛋白，與細(xì)胞的有絲分裂具有密切關(guān)系，Ki67 常用于臨床腫瘤惡性程度的判斷，其表達(dá)水平越高表示細(xì)胞增殖越活躍［20］。本研究結(jié)果說明β-谷甾醇可阻礙使肝癌細(xì)胞周期運(yùn)行，對(duì)細(xì)胞增殖有抑制作用，關(guān)于β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用可能與通過核因子相關(guān)因子2、氧化應(yīng)激激活人肝癌細(xì)胞線粒體凋亡有關(guān)［21］。

本研究通過數(shù)據(jù)庫分析顯示CDC25B 是β-谷甾醇靶點(diǎn)之一，還發(fā)現(xiàn)CDC25B 在肝癌組織、高臨床分期、復(fù)發(fā)和不良預(yù)后患者中呈高表達(dá)，并且還會(huì)影響患者的生存時(shí)間。CDC25B 為半衰期磷酸化蛋白，與細(xì)胞分裂有關(guān)的紡錘體前期的形成關(guān)系密切，是細(xì)胞早期有絲分裂的啟動(dòng)因子，目前普遍認(rèn)為CDC25B 過量表達(dá)會(huì)促進(jìn)腫瘤增殖和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化［22-23］。本研究結(jié)果顯示β-谷甾醇可降低Hep3B、HepG2 細(xì)胞中CDC25B 表達(dá)水平，推測(cè)β-谷甾醇對(duì)肝癌增殖的抑制作用可能是通過降低CDC25B 表達(dá)實(shí)現(xiàn)，本研究通過構(gòu)建CDC25B 穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞系并給予β-谷甾醇處理，發(fā)現(xiàn)CDC25B表達(dá)水平升高可以逆轉(zhuǎn)β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞增殖抑制作用和促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用，說明β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞的抑癌作用可能與抑制CDC25B 表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，β-谷甾醇對(duì)肝癌細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用，從體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)移植瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)β-谷甾醇可抑制肝癌細(xì)胞的增殖，其作用機(jī)制可能是通過抑制CDC25B 蛋白表達(dá)使細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)發(fā)生阻礙，從而抑制肝癌細(xì)胞增殖，但β-谷甾醇下調(diào)CDC25B 表達(dá)的具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。本研究主要發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇抑制肝癌細(xì)胞增殖的可能作用機(jī)制，而關(guān)于其對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制尚不清楚。