日糧添加酵母硒對(duì)夏季湖羊血液指標(biāo)和睪丸發(fā)育及基因表達(dá)的影響

夏雨婷,萬(wàn)永杰,姜志洋,陳琪,茆達(dá)干

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,江蘇 南京 210095)

我國(guó)南部地區(qū)夏季高溫高濕常引起動(dòng)物熱應(yīng)激,損害動(dòng)物的健康福利,降低動(dòng)物的免疫、生長(zhǎng)和繁殖性能。熱應(yīng)激能激活下丘腦-垂體-腎上腺軸,升高皮質(zhì)酮分泌水平,誘導(dǎo)免疫抑制[1],降低抗氧化能力[2];導(dǎo)致羔羊采食量、肌肉生長(zhǎng)和代謝效率降低,從而降低生產(chǎn)性能[3];引起睪丸代謝增加導(dǎo)致精索損傷[4],雄性動(dòng)物的性欲、精子活力和精液質(zhì)量降低[5],雌性動(dòng)物發(fā)情周期紊亂、妊娠母畜和子代產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)[6]。

如何減輕熱應(yīng)激給畜牧生產(chǎn)中帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失已引起人們的廣泛研究。如通過(guò)建造人工圍欄遮蔽物、噴水器以及圍欄灑水器等物理方法,降低夏季高溫給動(dòng)物帶來(lái)熱應(yīng)激損傷[7],但這些方法也存在引起動(dòng)物不良反應(yīng)的問(wèn)題;通過(guò)添加植物源性物質(zhì)如槲皮素[8]、當(dāng)歸粉[9]和紅參[10]等,可以有效改善夏季高溫帶來(lái)的負(fù)面影響且滿足動(dòng)物福利要求。硒是動(dòng)物必需的微量元素,是抗氧化酶系統(tǒng)中不可或缺的輔助因子。高溫季節(jié)日糧添加有機(jī)硒能通過(guò)富含硒代半胱氨酸的硒蛋白發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激作用,保護(hù)動(dòng)物的肝臟[11]、腎臟[12]和睪丸[13]等器官,繼而改善熱應(yīng)激造成的生產(chǎn)、繁殖性能低下。有學(xué)者基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),日糧添加有機(jī)硒后綿羊的血液基因表達(dá)發(fā)生變化,共檢測(cè)出1 186個(gè)差異基因[14]。熱應(yīng)激對(duì)哺乳動(dòng)物的精子產(chǎn)生不利影響,甚至可能導(dǎo)致子代不育[15]。然而,針對(duì)有機(jī)硒緩解熱應(yīng)激對(duì)綿羊睪丸損傷的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究還未見報(bào)道。本試驗(yàn)以4月齡雄性湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象,通過(guò)在夏季日糧添加酵母硒,研究其對(duì)湖羊血液指標(biāo)和睪丸發(fā)育的影響,對(duì)睪丸組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,探討夏季日糧添加酵母硒影響湖羊睪丸發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)變化規(guī)律,從分子水平為酵母硒應(yīng)用于夏季湖羊生產(chǎn)中提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

選取體況健康、體重相近的4月齡雄性湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象,在啟東瑞鵬牧業(yè)有限公司進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)?shù)?—8月份的日平均溫度為(36±3)℃,日平均濕度為(75±10)%,羊舍內(nèi)每天的平均溫度為(34±2)℃,平均濕度為(75±10)%。酵母硒購(gòu)于南京嘉吉飼料有限公司,硒含量為3 g·kg-1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

96只試驗(yàn)羊(平均體重約25 kg)隨機(jī)分為對(duì)照組(Con,基礎(chǔ)日糧)和酵母硒組(Se,基礎(chǔ)日糧+酵母硒),每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)16只羊。試驗(yàn)飼養(yǎng)周期為5周(其中預(yù)飼期1周),基礎(chǔ)日糧組成見表1。采用精粗分飼的方式,分別于每日07:00和17:00飼喂。酵母硒添加量按干物質(zhì)采食量(dry matter intake,DMI)0.4 g·kg-1計(jì)算拌于精料內(nèi)。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)于次日晨飼前進(jìn)行稱重,每個(gè)重復(fù)選4只羊進(jìn)行頸靜脈采血,制備血清和血漿,-20 ℃保存。每個(gè)重復(fù)選2只羊采集睪丸,稱重并測(cè)量大小,然后取部分組織用多聚甲醛固定,部分組織于-80 ℃保存。

1.3 血液生化指標(biāo)與免疫指標(biāo)

血清葡萄糖(Glu)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)濃度測(cè)定按照試劑盒(南京建成生物科技有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行。血漿免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和M(IgM)濃度測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法,根據(jù)試劑盒(上海信帆生物科技有限公司)說(shuō)明書操作。

1.4 血液與睪丸組織的抗氧化指標(biāo)

血清和睪丸組織中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活性測(cè)定按照試劑盒(南京建成生物科技有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 睪丸組織硒濃度及組織形態(tài)學(xué)分析

按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中硒的測(cè)定:GB 5009.93—2017》的操作方法,將保存在-80 ℃的睪丸樣品(約0.3 g)解凍后與硝酸(10 mL)混勻,使用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(賽默飛iCAP 7400,美國(guó))測(cè)定湖羊睪丸組織中的硒濃度。每個(gè)樣品取3個(gè)平行樣,取實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)的均值。睪丸組織形態(tài)學(xué)操作步驟參照Pang等[16]方法,將固定的睪丸組織進(jìn)行石蠟包埋,制作連續(xù)切片(厚5 μm),蘇木精和伊紅(HE)染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察,測(cè)量曲精細(xì)管外徑、內(nèi)徑,計(jì)算生精上皮的厚度。

表1 湖羊基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)組成(以干物質(zhì)為基礎(chǔ))Table 1 Formula and nutritional composition of the basal diet in Hu sheep(based on dried matter) %

1.6 睪丸組織轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序分析

1.6.1 文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序采用Trizol法提取湖羊睪丸組織總RNA,通過(guò)Agilent 2100 Bioanalyzer(RNA Nano 6000 Assay Kit,Agilent Technologies,USA)檢測(cè)RNA完整性。每只個(gè)體的總RNA單獨(dú)建庫(kù),文庫(kù)檢測(cè)合格后,按照有效濃度及目標(biāo)下機(jī)數(shù)據(jù)量的需求,對(duì)不同文庫(kù)使用Illumina NovaSeq 6000平臺(tái)Iillumina,USA)測(cè)序。

1.6.2 數(shù)據(jù)質(zhì)控與序列對(duì)比測(cè)序獲得的原始數(shù)據(jù)去除帶接頭、含N和低質(zhì)量reads后,對(duì)clean data進(jìn)行Q20、Q30和GC含量等計(jì)算及后續(xù)分析。從基因組網(wǎng)站(http://ftp.ensembl.org/pub/release-99/fasta/ovis_aries/)下載綿羊參考基因組和基因模型注釋文件(http://ftp.ensembl.org/pub/release-99/gtf/ovis_aries/)。使用HISAT2 v2.0.5構(gòu)建參考基因組的索引,并將配對(duì)末端clean reads與參照基因組比對(duì)。

1.6.3 基因表達(dá)水平定量根據(jù)基因的長(zhǎng)度計(jì)算每個(gè)基因的FPKM(每百萬(wàn)堿基對(duì)測(cè)序的轉(zhuǎn)錄本序列片段的每千堿基片段的預(yù)期數(shù)量)并計(jì)算映射到該基因的讀數(shù)。

1.6.4 差異表達(dá)分析使用DESeq2軟件(1.20.0)進(jìn)行2個(gè)比較組合基因之間的差異表達(dá)分析。使用Benjamini & Hochberg方法調(diào)整P值以控制錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率,差異表達(dá)分析使用edgeR(3.22.5)軟件包進(jìn)行。將校正后的P值以及差異表達(dá)倍數(shù)(fold change)作為顯著差異表達(dá)的閾值。

1.6.5 差異基因的富集分析修正了基因長(zhǎng)度偏差后,通過(guò)clusterProfiler 3.4.4軟件實(shí)現(xiàn)差異表達(dá)基因的GO富集分析和KEGG通路富集分析。

1.7 差異基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)驗(yàn)證

選取的差異基因根據(jù)序列特異性設(shè)計(jì)引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。睪丸組織總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和qPCR按Vazyme Biotechw 公司的試劑盒說(shuō)明書和儀器說(shuō)明進(jìn)行操作。qPCR所用引物見表2。以β-actin為內(nèi)參,采用2-ΔΔCT法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.8 數(shù)據(jù)分析

表2 RT-qPCR所用引物Table 2 Primers used for real time quantitative PCR analysis

2 結(jié)果與分析

2.1 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊血液指標(biāo)的影響

如表3所示:Se組游離脂肪酸的濃度顯著高于對(duì)照(Con)組(P<0.05);而2組間的葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白濃度無(wú)顯著差異(P>0.05)。Se組血清GSH-Px活性極顯著高于Con組(P<0.01),而SOD活性在2組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。Se組血漿中IgA、IgG和IgM水平極顯著高于Con組(P<0.01)。

表3 酵母硒對(duì)湖羊血液生化、抗氧化和免疫指標(biāo)的影響Table 3 Effect of selenium yeast on blood biochemical,antioxidant and immune indexes in Hu sheep

圖1 酵母硒對(duì)湖羊睪丸組織硒濃度(A)和抗氧化酶活性(B)的影響Fig.1 Effect of selenium yeast on selenium concentration(A)and antioxidant enzyme activity(B)in Hu sheep testis 不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01),不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。Different capital letters mean extremely significant differences(P<0.01),different lowercase letters mean significant difference(P<0.05).

2.2 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊睪丸硒濃度、抗氧化活性和睪丸發(fā)育的影響

如圖1所示:Se組睪丸組織硒濃度極顯著高于Con組(P<0.01),睪丸組織GSH-Px活性顯著高于Con組(P<0.05),但SOD在2組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。由表4可知:Se組湖羊平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05),但2組睪丸大小、質(zhì)量及睪丸系數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05)。Se組的生精上皮厚度極顯著大于Con組(P<0.01),曲精細(xì)管內(nèi)徑有小于Con組的趨勢(shì)(P=0.073),而2組間外徑無(wú)顯著差異(P>0.05)。睪丸組織形態(tài)學(xué)(圖2)結(jié)果顯示:2組曲精細(xì)管內(nèi)都有精子,Se組睪丸組織曲細(xì)精管內(nèi)的空腔狀有所緩解,生精細(xì)胞增多,排列更加密集有序,且曲精細(xì)管間的間質(zhì)細(xì)胞也明顯多于對(duì)照組。

表4 酵母硒對(duì)湖羊體重、睪丸及曲精細(xì)管的影響Table 4 Effect of yeast selenium on body weight,testicular parameters and seminiferous tubule in Hu sheep

圖2 酵母硒對(duì)湖羊睪丸組織形態(tài)學(xué)的影響Fig.2 Effect of selenium yeast on the morphology in Hu sheep testis

2.3 差異表達(dá)基因分析

測(cè)序數(shù)據(jù)用測(cè)序錯(cuò)誤率分布檢查和GC含量指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)控。結(jié)果表明測(cè)序比對(duì)結(jié)果良好,可用于進(jìn)一步的差異表達(dá)基因分析。計(jì)算各樣本所有基因的表達(dá)值(FPKM)后,通過(guò)盒形圖展示不同樣本基因表達(dá)水平的分布情況(圖3-a)。本研究使用的差異閾值為padj≤0.05且|log2[Fold change]|≥1。通過(guò)篩選,2組之間鑒定到2 321個(gè)差異轉(zhuǎn)錄本。其中,與Con組比較,Se組表達(dá)上調(diào)的差異轉(zhuǎn)錄本有671個(gè),表達(dá)下調(diào)的差異轉(zhuǎn)錄本有1 650個(gè)(圖3-b)。聚類分析后發(fā)現(xiàn),2組間出現(xiàn)分離,同組的不同生物學(xué)重復(fù)聚集在一起,表明組內(nèi)的相關(guān)性良好(圖3-c)。

圖3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及差異基因分析Fig.3 Transcriptome sequencing data statistics and differential gene analysis a. 樣本基因表達(dá)量分布盒形圖;b. 差異基因火山圖;c. 差異表達(dá)基因聚類熱圖。a. Box plot of sample gene expression distribution;b. Volcano plot of differential genes;c. Heatmap plot of differential genes.

GO(gene ontology)是描述基因功能的綜合性數(shù)據(jù)庫(kù),可分為生物過(guò)程、細(xì)胞組成和分子功能3個(gè)部分。GO功能富集以padj<0.01作為顯著性富集的閾值,富集結(jié)果如圖4-a所示。其中生物過(guò)程中顯著性富集的功能類只有電子轉(zhuǎn)移鏈;細(xì)胞組成中基因功能富集極顯著前10位的主要有呼吸鏈復(fù)合體、呼吸鏈、線粒體膜部分等;分子功能中極顯著性富集的功能類有NADH脫氫酶(泛醌)活性和NADH脫氫酶(醌)活性。

2.4 差異表達(dá)基因富集的KEGG通路

從KEGG富集結(jié)果中,選取最顯著的20個(gè)KEGG通路繪制氣泡圖(圖4-b)。選取padj<0.01作為顯著性富集的閾值時(shí),包括帕金森綜合征、朊病毒病、氧化磷酸化、亨廷頓舞蹈病、產(chǎn)熱等11條功能通路。

圖4 差異表達(dá)基因GO富集分析柱狀圖(a)和KEGG富集氣泡圖(b)Fig.4 Differentially expressed gene GO enrichment analysis histogram(a)and KEGG enrichment bubble chart(b)

2.5 差異表達(dá)基因的RT-qPCR驗(yàn)證

為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性,隨機(jī)挑選6個(gè)差異基因,3個(gè)基因上調(diào),分別是BIRC3、SLC16A9和LBR;3個(gè)下調(diào)基因,分別是EMD、HSPB1和PFDN6。qPCR分析結(jié)果表明,6個(gè)基因在2組個(gè)體間表達(dá)變化規(guī)律與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果基本一致(圖5),表明本試驗(yàn)利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的結(jié)果是可信的。

圖5 差異表達(dá)基因的測(cè)序分析(a)與RT-qPCR驗(yàn)證(b)Fig.5 Sequencing analysis of differentially expressed genes(a)and RT-qPCR verification(b) *表示與Con組差異顯著(P<0.05);**表示與Con組差異極顯著(P<0.01)。*means significant difference compared with the Con group(P<0.05);**means extremely significant differences compared with the Con group(P<0.01).

3 討論

3.1 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊血液指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物的代謝狀態(tài)。研究表明,夏季熱應(yīng)激降低羔羊血清葡萄糖、膽固醇和甘油三酯含量[17]及綿羊血漿不飽和脂肪酸的濃度[18]。熱應(yīng)激升高肉鴨低密度脂蛋白的濃度,降低高密度脂蛋白的濃度[19]。日糧添加硒可以緩解動(dòng)物的熱應(yīng)激。日糧添加1.2 mg·kg-1納米硒能降低熱應(yīng)激下肉仔雞總膽固醇和低密度脂蛋白濃度,增加高密度脂蛋白濃度[20],但用5 mg·mL-1硒注射1 mL治療熱應(yīng)激時(shí),對(duì)綿羊血清葡萄糖濃度、膽固醇和不飽和脂肪酸無(wú)影響[21]。熱應(yīng)激下綿羊日糧添加酵母硒且其硒濃度為0.8 mg·kg-1時(shí),可增加葡萄糖濃度,但對(duì)不飽和脂肪酸無(wú)影響[22]。本研究中日糧添加0.4 mg·kg-1的酵母硒(硒濃度為1.2 mg·kg-1)提高了湖羊血清中不飽和脂肪酸的含量,對(duì)葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白沒(méi)有影響,提示酵母硒可以促進(jìn)湖羊脂肪的動(dòng)員,且不同動(dòng)物種類、溫度條件和硒的添加量與形式的處理效果不同。

3.2 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊抗氧化及免疫功能的影響

熱應(yīng)激能通過(guò)過(guò)量的活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生來(lái)降低抗氧化防御能力而加劇氧化應(yīng)激[23]。SOD和GSH-Px是清除ROS的抗氧化參數(shù),通常用它們的活性來(lái)評(píng)估機(jī)體的抗氧化能力。本試驗(yàn)中,湖羊血液和睪丸中GSH-Px活性的變化趨勢(shì)一致,添加酵母硒后GSH-Px活性升高,SOD無(wú)顯著變化,提示酵母硒可能通過(guò)增加湖羊體內(nèi)的GSH-Px活性而非SOD活性來(lái)增強(qiáng)抗氧化狀態(tài)。研究表明,在受氧化應(yīng)激的綿羊日糧中添加酵母硒會(huì)顯著增加血液GSH-Px的活性,而SOD活性無(wú)顯著變化[24],這與本研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中Se組湖羊睪丸中硒的沉積增加,說(shuō)明酵母硒對(duì)湖羊夏季高溫的保護(hù)作用能夠到達(dá)睪丸組織,也驗(yàn)證了血液和睪丸中抗氧化酶活性變化一致的結(jié)果。IgA、IgG和IgM是血清免疫球蛋白中含量最多且最為重要的3類,其中IgM是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中最早合成和分泌的免疫球蛋白,IgA與IgG主要通過(guò)早期免疫球蛋白(IgM和IgD)轉(zhuǎn)換,參與體液免疫應(yīng)答。熱應(yīng)激通過(guò)降低動(dòng)物機(jī)體的IgA、IgG和IgM水平來(lái)抑制其免疫功能[25],而補(bǔ)充硒可顯著提高山羊血清IgA、IgG和IgM水平[26]。本試驗(yàn)結(jié)果與之一致,酵母硒可改善湖羊因夏季高溫而降低的免疫反應(yīng),進(jìn)而提高生產(chǎn)性能。

3.3 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊睪丸發(fā)育的影響

動(dòng)物睪丸的質(zhì)量、大小以及組織形態(tài)學(xué)反映睪丸發(fā)育的情況。大量研究表明熱應(yīng)激會(huì)引起小鼠精子密度和質(zhì)量損傷[9]以及生精過(guò)程受損,包括缺少初級(jí)精母細(xì)胞和成熟精子[27],而熱應(yīng)激日糧添加硒可以緩解因環(huán)境溫度升高對(duì)兔精子質(zhì)量和繁殖力的負(fù)面影響,且添加硒會(huì)使生精小管充滿精子細(xì)胞[13],增加大鼠精子數(shù)量和生精上皮厚度[28]。本研究中酵母硒組生精上皮厚度的增加與前人對(duì)大鼠的研究結(jié)果一致,提示日糧添加酵母硒可能通過(guò)促進(jìn)睪丸生精上皮的發(fā)育來(lái)緩解夏季高溫對(duì)湖羊繁殖機(jī)能的負(fù)面影響。

3.4 夏季日糧添加酵母硒對(duì)湖羊睪丸組織差異基因表達(dá)的影響

本研究構(gòu)建了夏季日糧添加Se組和Con組睪丸組織的轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)8個(gè),獲得了48.88 Gb的過(guò)濾數(shù)據(jù),分析發(fā)現(xiàn)2組差異表達(dá)基因2 321個(gè),qPCR分析驗(yàn)證了測(cè)序的準(zhǔn)確性。Se組上調(diào)的671個(gè)基因中,差異顯著的前20個(gè)有注釋的基因包括谷氨酸脫羧酶樣蛋白1(GADL1)、下丘腦受體2(HCRTR2)、肌球蛋白輕鏈激酶3(MYLK3)、類固醇羥化酶(CYP7B1)等基因。類固醇羥化酶(CYP7B1)屬于細(xì)胞色素P450(CYP)家族,定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的跨膜蛋白上,主要功能是催化膽固醇骨架7位的羥化反應(yīng),能產(chǎn)生許多重要的甾類分子,調(diào)控生殖發(fā)育過(guò)程[29-30],CYP7B1形成的類固醇代謝物可能不僅對(duì)雌激素信號(hào)很重要,而且對(duì)雄激素也很重要[31]。下調(diào)的1 650個(gè)基因中,差異顯著的前20個(gè)有注釋的基因包括前折疊蛋白亞基6(PFDN6)、NADH脫氫酶亞基1(ND1)、細(xì)胞色素C氧化酶亞基3(COX3)、熱休克蛋白B1(HSPB1)等基因。HSPB1是熱休克蛋白家族的一員,主要作為ATP依賴的分子伴侶,具有抗凋亡和抗氧化應(yīng)激的作用[32-33],當(dāng)細(xì)胞暴露于熱休克時(shí),其表達(dá)水平會(huì)上調(diào)[34]。本試驗(yàn)中差異基因CYP7B1在處理組上調(diào),說(shuō)明酵母硒能夠緩解熱應(yīng)激給機(jī)體睪丸帶來(lái)的損傷,改變類固醇合成相關(guān)基因的表達(dá);差異基因HSPB1在Se組下調(diào),提示夏季日糧添加酵母硒降低了機(jī)體的熱應(yīng)激水平,可能保護(hù)睪丸的發(fā)育。除此之外,Se組抗氧化相關(guān)基因谷胱甘肽過(guò)氧化物酶3(GPX3)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶8(GPX8)也分別上調(diào)約1.9倍和1.6倍,這與血液、睪丸組織抗氧化結(jié)果一致。

差異顯著基因的GO功能富集篩選到氧化還原酶復(fù)合物、NADH脫氫酶復(fù)合物、NADH脫氫酶(泛醌)活性和NADH脫氫酶(醌)活性等與氧化應(yīng)激有關(guān)的生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞組分和分子結(jié)構(gòu)。其中主要包括NADH脫氫酶1α復(fù)合體亞基3(NDUFA3)、NADH脫氫酶1α復(fù)合體亞基8(NDUFA8)、NADH脫氫酶(輔酶Q)Fe-S蛋白5(NDUFS5)、NADH脫氫酶亞基3(ND3)等與生成ROS相關(guān)的基因[35-36],且這些基因表達(dá)均下調(diào),說(shuō)明夏季日糧添加酵母硒能降低機(jī)體氧化應(yīng)激水平,減輕熱應(yīng)激引起的睪丸損傷。在進(jìn)一步的KEGG通路富集分析中,篩選出11個(gè)差異極顯著通路,其中產(chǎn)熱通路與本試驗(yàn)相關(guān),該通路富集了40個(gè)差異基因,表明夏季日糧添加酵母硒能夠影響湖羊睪丸產(chǎn)熱相關(guān)基因的表達(dá)。

綜上,夏季日糧添加酵母硒增加了湖羊血清NEFA濃度,提高了血清和睪丸組織中GSH-Px活性以及血漿免疫球蛋白的濃度,提示酵母硒可以促進(jìn)湖羊的脂質(zhì)代謝,改善其抗氧化能力和免疫功能。睪丸轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析篩選了夏季高溫下酵母硒影響湖羊睪丸發(fā)育的相關(guān)基因,為進(jìn)一步闡明酵母硒緩解夏季高溫影響湖羊繁殖性能的分子機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。