12種中草藥提取物對(duì)殺鮭氣單胞菌的抑制效果

張振國，尤宏?duì)?，?爽，羅 璋，錢 紅，馮守明

( 1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300400；2.天津市水產(chǎn)研究所，天津 300221)

虹鱒魚細(xì)菌病主要有弧菌病、細(xì)菌性腸炎、癤瘡病、柱狀病以及細(xì)菌性腎病。癤瘡病的病原是殺鮭氣單胞菌，其宿主較為廣泛，鮭科魚類是癤瘡病的易感魚類，感染后一周左右發(fā)病，病原經(jīng)皮膚入侵，在軀干內(nèi)形成小的感染病灶，肌肉組織壞死，出血、漿液滲出，患部皮膚軟化，形成癤瘡，也可經(jīng)過鰓和口感染，進(jìn)而侵入內(nèi)臟，形成病灶。目前，治療癤瘡病主要以使用抗生素為主，長期使用抗生素會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性、環(huán)境污染等問題，不適宜目前的綠色健康養(yǎng)殖的理念。中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病預(yù)防和治療中得到廣泛應(yīng)用，如預(yù)防水霉病、維氏氣單胞菌、鏈球菌有較好的效果。

1 材料與方法

1.1 菌株及藥品

殺鮭氣單胞菌()分離于發(fā)病虹鱒魚體內(nèi)，黃柏、黃芩、金銀花、板藍(lán)根、苦參、大黃、魚腥草、穿心蓮、黃芪、大青葉、黃柏、連翹購自同仁堂藥店。

1.2 方法

稱取10 g所選藥物, 加入超純水100 mL浸泡0.5 h, 煎煮0.5 h, 不時(shí)進(jìn)行攪拌, 藥液用紗布過濾, 濾渣再次煎煮、過濾, 合并藥液后,水浴濃縮至50 mL,藥液濃度即為200 mg/mL, 5 000 r/min離心，取上清，0.22 μm濾膜過濾除菌。配制好的藥物分裝于1.5 mL滅菌離心管中, -20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 藥物的初篩

采用紙片擴(kuò)散法，殺鮭氣單胞菌(1.0×10CFU/mL)均勻涂布于腦心浸液培養(yǎng)基平板上, 將空白藥敏紙片平貼于平板上(4片/平板),每個(gè)空白紙滴加5 μL藥液， 28 ℃培養(yǎng)24 h,用精度1 mm尺子測量抑菌環(huán)的直徑, 并記錄結(jié)果。

1.4 最小抑菌濃度測定

根據(jù)初篩結(jié)果，選取抑菌效果較好的藥物進(jìn)行最小抑菌濃度測定。在1.5 mL離心管進(jìn)行，第1管中加入900 μL液體培養(yǎng)基，第2管至第12管分別加入500 μL培養(yǎng)基，第1管加入100 μL藥液，混勻后吸出500 μL加入第2管，依次2倍稀釋，直至最后1管。每個(gè)管加入10 μL菌液，28 ℃振蕩培養(yǎng)24 h，觀察有無細(xì)菌生長。另外，做1個(gè)陽性對(duì)照(加菌不加藥)和1個(gè)陰性對(duì)照(不加藥不加菌)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 初篩藥敏結(jié)果

用12種中草藥藥液對(duì)殺鮭氣單胞菌進(jìn)行藥物敏感性測試，參照常用抗生素藥物敏感性試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)分析,殺鮭氣單胞菌對(duì)黃芩和連翹2種藥物敏感，其余藥物不敏感(見表1)。

表1 12種中草藥對(duì)殺鮭氣單胞菌的抑菌效果

2.2 最小抑菌濃度

依據(jù)2.1藥敏初步篩選試驗(yàn)結(jié)果，按照1.4中的方法測定黃芩和連翹對(duì)殺鮭氣單胞菌的最小抑菌濃度，結(jié)果顯示黃芩的最小抑菌濃度為10 mg/mL，連翹的最小抑菌濃度為20 mg/mL。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)選取了黃柏、黃芩、金銀花、板藍(lán)根、苦參、大黃、魚腥草、穿心蓮、黃芪、大青葉、黃柏、連翹12種常見中草藥對(duì)殺鮭氣單胞進(jìn)行了體外抑制試驗(yàn)，結(jié)果顯示10種中草藥無任何效果，黃芩和連翹抑菌效果較好，可以在試劑生產(chǎn)中應(yīng)用，而且黃芩和連翹市場價(jià)格便宜，可操作性強(qiáng)，具有一定的實(shí)用價(jià)值。