長鏈非編碼RNA HAGLR與微RNA-19a-3p對股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的影響

馬力,汪盛玉,韓軍燁,付豪

(松滋市人民醫(yī)院,湖北 松滋 434200)

股骨頸骨折是常見的髖部骨折,由于股骨頸的血運較差,內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的風(fēng)險較高。有研究[1-2]發(fā)現(xiàn),股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的發(fā)生率為10%～30%,而導(dǎo)致骨折不愈合的危險因素為高齡、骨折移位及高能量損傷。股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合者,多需進行植骨或關(guān)節(jié)置換等手術(shù)治療,容易加重患者負擔(dān),因此早期干預(yù)十分重要。目前,臨床尚無用于預(yù)測股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的生物標(biāo)志物。成骨細胞具有促進骨折愈合的作用,而長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HAGLR與微RNA(microRNA,miRNA)-19a-3p在成骨細胞的分化和增殖過程中發(fā)揮重要作用[3-6]。為了探討lncRNA HAGLR與miRNA-19a-3p對股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的影響,我們進行了該項研究,現(xiàn)報告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料選取2017年3月至2020年3月在松滋市人民醫(yī)院接受切開復(fù)位AO中空加壓螺釘內(nèi)固定治療的股骨頸骨折患者的病例資料進行研究。試驗方案經(jīng)松滋市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查通過,倫理批件號:KY201700101。

1.2 納入標(biāo)準①符合創(chuàng)傷性股骨頸骨折的診斷標(biāo)準[7];②采用切開復(fù)位AO中空加壓螺釘內(nèi)固定治療;③復(fù)位后骨折移位距離<2 mm,正位X線片上骨折達到解剖復(fù)位或外展<15°,側(cè)位X線片上骨折達到解剖復(fù)位或成角<10°;④留有圍手術(shù)期的外周靜脈血標(biāo)本;⑤病例資料完整。

1.3 排除標(biāo)準①合并陳舊性骨折者;②合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病者;③病例資料存在常識或邏輯錯誤者。

2 方 法

2.1 數(shù)據(jù)收集方法從病歷系統(tǒng)中收集患者的病例資料,包括性別、年齡、基礎(chǔ)疾病(高血壓、糖尿病、冠心病)、損傷類型、骨折類型、骨折愈合情況。采用實時定量PCR檢測法檢測圍手術(shù)期采集的外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量。骨折愈合情況的判定標(biāo)準[2]:骨折愈合,X線檢查顯示骨折端骨折線模糊、有連續(xù)性骨痂通過骨折線、股骨頸短縮<2 mm、無髖內(nèi)外翻畸形;骨折不愈合,術(shù)后9個月X線檢查顯示骨折端無骨痂生長,且已經(jīng)連續(xù)3個月骨折端無愈合跡象。

2.2 分組方法根據(jù)術(shù)后骨折愈合情況分組,骨折愈合者納入愈合組、骨折不愈合者納入不愈合組。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法采用SPSS22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。先對2組患者的相關(guān)信息進行單因素分析,然后對組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素進行Logistic回歸分析,最后采用受試者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線分析評價外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量對骨折不愈合的預(yù)測價值。2組患者年齡的組間比較采用t檢驗,性別、基礎(chǔ)疾病、損傷類型、骨折類型的組間比較均采用χ2檢驗,手術(shù)前后不同時間點外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量的比較均采用重復(fù)測量資料的方差分析。檢驗水準α=0.05。

3 結(jié) 果

3.1 股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合影響因素的單因素分析結(jié)果

3.1.1一般結(jié)果 共納入141例患者,男73例、女68例。愈合組120例,不愈合組21例。2組患者性別、基礎(chǔ)疾病的比較,組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;2組患者年齡、損傷類型、骨折類型的比較,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

表1 股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合影響因素的單因素分析結(jié)果

3.1.2外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量 時間因素和分組因素存在交互效應(yīng)。2組患者外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量總體比較,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即存在分組效應(yīng)。手術(shù)前后不同時間點外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即存在時間效應(yīng)。2組患者外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量隨時間變化均呈先降低后增高趨勢,但2組的趨勢不完全一致。術(shù)前、術(shù)后1 d、術(shù)后1周,2組患者外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量的組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周、8周、12周,愈合組外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量均高于不愈合組。見表2。

表2 2組股骨頸骨折患者內(nèi)固定手術(shù)前后外周血液中長鏈非編碼RNA HAGLR表達量

3.1.3外周血液中miRNA-19a-3p表達量 時間因素和分組因素存在交互效應(yīng)。2組患者外周血液中miRNA-19a-3p表達量總體比較,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即存在分組效應(yīng)。手術(shù)前后不同時間點外周血液中miRNA-19a-3p表達量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即存在時間效應(yīng)。2組患者外周血液中miRNA-19a-3p表達量隨時間變化均呈先增高后降低趨勢,但2組的趨勢不完全一致。術(shù)前、術(shù)后1 d、術(shù)后1周,2組患者外周血液中miRNA-19a-3p表達量的組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周、8周、12周,愈合組外周血液中miRNA-19a-3p表達量均低于不愈合組。見表3。

表3 2組股骨頸骨折患者內(nèi)固定手術(shù)前后外周血液中微RNA-19a-3p表達量

3.2 股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合影響因素的多因素分析結(jié)果將損傷類型、骨折類型以及術(shù)后4周外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量作為自變量,將骨折是否愈合作為因變量,進行Logistic回歸分析,相關(guān)因素賦值方案見表4。Logistic回歸分析結(jié)果顯示,高能量損傷、骨折有移位、術(shù)后4周外周血液中miRNA-19a-3p表達量是股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的危險因素,術(shù)后4周外周血液中LncRNA HAGLR表達量是股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的保護因素。見表5。

表4 股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合影響因素的Logistic回歸分析變量賦值方案

表5 股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合影響因素的Logistic回歸分析結(jié)果

3.3 lncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量對股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后不愈合的預(yù)測結(jié)果ROC曲線分析結(jié)果顯示,采用術(shù)后4周外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量預(yù)測骨折不愈合的靈敏度分別為61.67%、81.67%,特異度分別為80.95%、47.62%,曲線下面積分別為0.710(P=0.002)、0.673(P=0.012)。

3.4 典型病例X線片典型病例X線片見圖1、圖2。

圖1 股骨頸骨折切開復(fù)位AO中空加壓螺釘內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合患者手術(shù)前后X線片

4 討 論

骨折不愈合是股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后的嚴重并發(fā)癥之一,多數(shù)患者需要進行二次手術(shù),容易增加其經(jīng)濟負擔(dān)[8-9]。股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的影響因素大致分為醫(yī)源性因素和非醫(yī)源性因素:醫(yī)源性因素主要包括骨折復(fù)位質(zhì)量、內(nèi)固定物選擇等,這些因素可以通過提高術(shù)者的醫(yī)療技術(shù)、改良內(nèi)固定材料等得到控制[10-12];非醫(yī)源性因素主要包括患者的年齡、損傷類型、骨折移位情況等,這些因素?zé)o法通過施以相應(yīng)干預(yù)措施而得以消除[13-14]。目前,股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的發(fā)生機制尚未完全明確,也無早期評估骨折不愈合風(fēng)險的生物標(biāo)志物。

有研究[15-19]發(fā)現(xiàn),成骨細胞介導(dǎo)的骨形成過程對骨折愈合有重要作用。lncRNA是一種長度大于200個核苷酸的非編碼RNA,可以通過“分子海綿”的作用吸附miRNA,并調(diào)節(jié)下游靶基因的表達,進而參與多種生物學(xué)過程的調(diào)控。有研究[5,20-23]發(fā)現(xiàn),在成骨細胞的分化及增殖過程中,lncRNA HAGLR、lncRNA H19 等可通過靶向miRNA-19a-3p等發(fā)揮調(diào)控作用,這提示lncRNA HAGLR與miRNA-19a-3p可能參與股骨頸骨折的愈合過程。

本研究發(fā)現(xiàn),在股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)的圍手術(shù)期,外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR的表達量呈先降低后增高的趨勢、miRNA-19a-3p的表達量呈先增高后降低的趨勢,這與文獻[23]的研究結(jié)果類似。本研究還發(fā)現(xiàn),術(shù)后4周時骨折不愈合患者的外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量低于骨折愈合的患者、miRNA-19a-3p表達量高于骨折愈合的患者,這提示lncRNA HAGLR表達的過度下調(diào)和miRNA-19a-3p表達的過度上調(diào)與骨折不愈合的發(fā)生有關(guān),與之相關(guān)的分子機制可能是低表達的lncRNA HAGLR通過上調(diào)miRNA-19a-3p的表達而抑制成骨細胞的分化及增殖,進而造成骨折不愈合。在骨折不愈合的諸多影響因素中,除了年齡,本研究還發(fā)現(xiàn)損傷類型和骨折類型也是骨折不愈合的影響因素,這與其他學(xué)者[24-25]的研究結(jié)果類似。此外,本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后4周時外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR和miRNA-19a-3p表達量對骨折不愈合具有預(yù)測價值,由此認為這兩項指標(biāo)可用于評估股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的風(fēng)險。

本研究結(jié)果顯示,股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后4周時外周血液中l(wèi)ncRNA HAGLR表達量下降、miRNA-19a-3p表達量升高提示骨折不愈合風(fēng)險增加,這兩項指標(biāo)可用作預(yù)測股骨頸骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折不愈合的生物標(biāo)志物。