棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽生長、性腺發(fā)育及營養(yǎng)組成的影響

唐 璐 賀邱雨晴 遲曉萬 張 峰 寧延昶 丁 君 常亞青 左然濤

(大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，大連 116023)

中間球海膽(Strongylocentrotusintermedius)又稱蝦夷馬糞海膽，屬棘皮動物門(Echinodermata)，游走亞門(Eleutherozea)，海膽綱(Echinoidea)[1],原產(chǎn)于日本北海道和俄羅斯遠東沿海地區(qū)，因其性腺色澤好、味道鮮美、營養(yǎng)豐富而廣受消費者喜愛。1989年，大連水產(chǎn)學(xué)院(現(xiàn)為大連海洋大學(xué))將其引入中國[2]，并相繼攻克了中間球海膽的人工育苗、增養(yǎng)殖和病害防控等技術(shù)環(huán)節(jié)，現(xiàn)已成為我國北方沿海特別是遼寧和山東沿海地區(qū)重要的海水經(jīng)濟養(yǎng)殖品種[3]。海帶、裙帶菜、石莼是海膽?zhàn)B殖過程中重要的天然餌料來源，但是，海帶等鮮活藻類供應(yīng)期主要集中于每年的1～7月和12月，夏秋兩季由于缺乏優(yōu)質(zhì)餌料，海膽體質(zhì)虛弱，加之高溫應(yīng)激，致使海膽大面積死亡的事件時有發(fā)生[4-5]。此外，天然餌料也存在著一些弊端，例如來源不穩(wěn)定、供應(yīng)不及時、營養(yǎng)不全面、質(zhì)量良莠不齊，這極大限制了海膽的生長速度和性腺品質(zhì)，不利于海膽產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展[6]。近年來，本研究團隊圍繞中間球海膽營養(yǎng)生理和人工配合飼料的開發(fā)進行了相關(guān)研究，確定了包括蛋白質(zhì)、脂肪、脂肪酸等主要營養(yǎng)素的需求量，確定了幼膽和成膽飼料中最適脂肪源及其對海膽生長和性腺發(fā)育的影響，初步探明了必需脂肪酸合成的路徑和營養(yǎng)調(diào)控機制[7-11]。

磷脂是一種分子中含有磷酸基團的極性脂，是細胞膜的重要組成部分，能夠維持細胞膜的流動性[12-13]。此外，磷脂sn-2位含有豐富的長鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)，如花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，在促進動物生長、免疫、性腺發(fā)育和繁殖性能中發(fā)揮著重要作用[14-16]。磷脂通常用作配方飼料中的添加劑，以提高飼料的適口性，促進脂質(zhì)的乳化、消化、吸收以及運輸和動員[17]。根據(jù)來源不同，磷脂主要分為動物磷脂和植物磷脂[18]。研究表明，不同來源的磷脂其脂肪酸組成和功效也存在差異，從而對水產(chǎn)動物發(fā)揮不同的生理功能[19-20]。大豆卵磷脂是飼料中主要的磷脂類型，除具有上述磷脂的功能外，大豆卵磷脂還能增強甲殼動物對滲透脅迫的抵抗力[17]，并能提高脂質(zhì)從肝胰腺轉(zhuǎn)運到卵巢的效率，促進紅螯光殼螯蝦(Cheraxquadricarinatus)的性腺發(fā)育，進而提高其繁殖能力[21]。此外，在三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)的研究中發(fā)現(xiàn)，適宜水平的大豆卵磷脂可通過調(diào)節(jié)肝胰腺、血清、卵巢中類固醇激素的合成進而調(diào)節(jié)未成熟期個體的卵黃發(fā)生[22]。Cuesta-Gomez等[23]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加大豆卵磷脂和魚油對紫海膽(Strongylocentrotuspurpuratus)性腺發(fā)育有促進作用。磷蝦油是一種從南極磷蝦(Euphausiasuperba)中提取出來的動物磷脂，富含大量的n-3LC-PUFA[24]。Lin等[25-26]研究發(fā)現(xiàn)，磷蝦油較其他磷脂源顯著提高了中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)可食用部位(卵巢、肝胰腺和肌肉)的n-3LC-PUFA沉積，這可能是由于磷蝦油更有利于極低密度脂蛋白(VLDL)的合成，從而促進肝臟脂質(zhì)的運輸。

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，魚油短缺問題日益突出，植物油因其產(chǎn)量穩(wěn)定、價格低廉成為潛在的替代脂肪源。棕櫚油是目前產(chǎn)量最大的植物油，其有益效果已在多種水產(chǎn)動物中得到驗證[27-28]。近期研究發(fā)現(xiàn)，與魚油組相比，棕櫚油組海膽性腺發(fā)育和配子發(fā)生明顯滯后[10]。這一方面可能是由于棕櫚油中缺乏磷脂，另一方面可能是不同來源的磷脂其營養(yǎng)組成和生理功能也存在差異[26]。目前，大豆卵磷脂對海膽生長性能、性腺營養(yǎng)組成和品質(zhì)影響的研究已在多個海膽種類，如光棘球海膽(Strongylocentrotusnudus)[29]、北方球海膽(Strongylocentrotusdroebachiensis)[30]、綠海膽(Lytechinusvariegatus)[31]、紫海膽[23]中有所報道。但是，有關(guān)不同類型磷脂對海膽生長和性腺發(fā)育的影響尚不明確，特別是在棕櫚油飼料中添加不同類型磷脂效果的比較研究更是未見報道。因此，本研究旨在探究棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽生長、性腺發(fā)育及營養(yǎng)組成的影響，以期為海膽性腺促熟期間飼料中適宜磷脂源的選擇提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗所用中間球海膽購自大連龍王塘一養(yǎng)殖場。試驗前，將海膽在水槽(300 L)中暫養(yǎng)2周，暫養(yǎng)期間每天投喂足量的新鮮海帶，每3 d換水、吸底1次。

1.2 試驗設(shè)計和試驗飼料

試驗以酪蛋白、豆粕為主要蛋白質(zhì)源，在魚油飼料中添加大豆卵磷脂作為對照組飼料，在棕櫚油飼料中分別添加大豆卵磷脂(PO+SL組)和磷蝦油(PO+KO組)作為試驗組飼料。試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗飼料脂肪酸組成及含量見表2。飼料配制之前，將所有粉狀原料粉碎過80目篩，并按照配比將飼料干粉原料充分混合，再將油脂均勻搓至上述干粉原料中。隨后，加入30%的水再次混勻，搓好的飼料用雙螺旋制粒機(DES-TS1280，濟南鼎潤機械設(shè)備有限公司)壓制成直徑為1.5 mm的飼料。制作好的飼料于烘箱(55 ℃)中烘干，冷卻后用雙層塑料袋包裝，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 飼養(yǎng)管理

攝食生長試驗在農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室中進行。暫養(yǎng)結(jié)束后，隨機選取大小相似，健康無病的海膽[初始體重(18.86±0.55) g，殼徑(36.21±0.34) mm，殼高(18.66±0.55) mm)]放進已消毒的45個網(wǎng)籠(15 cm×15 cm×35 cm)中，每個網(wǎng)籠放養(yǎng)1只海膽。網(wǎng)籠中放入1個培養(yǎng)皿，防止飼料掉入水底。每種飼料隨機投喂15只海膽，每天2次(09:00和17:00)投喂飼料，次日將水槽底部的糞便和殘餌吸出，日均換水量為水槽體積的30%。試驗期42 d。試驗期間水體溫度為9～15 ℃，溶氧含量>7 mg/L，鹽度30‰。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 試驗飼料脂肪酸組成及含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2項目Items組別 Groups對照 ControlPO+SLPO+KOC18∶10.901.931.74C20∶10.110.020.03MUFA2.062.082.62C18∶2n-615.4918.3613.46C20∶4n-6(ARA)0.21n-6PUFA15.4918.3613.67C18∶3n-31.23C20∶5n-3(EPA)1.401.70C22∶6n-3(DHA)1.401.70n-3PUFA2.811.233.40n-3PUFA/n-6PUFA0.180.070.25

1.4 樣品采集

由于無法根據(jù)海膽外觀判斷性別，所以每個組喂養(yǎng)的海膽性別比例是無法確定的。根據(jù)以往經(jīng)驗，將所有海膽性腺取一部分分別浸泡在多聚甲醛固定液中，利用組織學(xué)分析辨別雌雄。

試驗結(jié)束前24 h停止投喂，根據(jù)組織學(xué)分析結(jié)果隨機選取雌雄各5只海膽，記錄生長數(shù)據(jù)。每組另取雌雄各2只海膽，計算性腺指數(shù)，將性腺收集，一部分用于顏色測定，剩余部分液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱，用于營養(yǎng)組成分析。

1.5 常規(guī)營養(yǎng)成分

采用AOAC(1995)[32]的方法分析測定飼料和海膽性腺的營養(yǎng)成分，具體為：水分含量的測定采用失重法，105 ℃烘干至恒重；粗蛋白質(zhì)含量的測定采用凱氏定氮法，將氮含量乘以6.25；粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法，抽提劑為乙醚。

1.6 石蠟組織切片

采用劉權(quán)迪等[33]的方法，將性腺樣品在多聚甲醛固定液中浸泡24 h，用手術(shù)刀切割成合適大小，利用自動脫水機(RM2016，Leica公司，德國)進行脫水，將組織嵌入石蠟中，利用旋轉(zhuǎn)組織切片機進行切片，切片厚度調(diào)成4 μm，然后對切片進行蘇木精-伊紅(HE)染色，封片。制作好的組織切片可在智能顯微鏡(Leica公司，德國)下進行性腺成熟度和性別的觀察。

1.7 脂肪酸含量測定

脂肪酸含量測定采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Trace 1310 IS，ThermoFisher公司，美國)，色譜柱為TG-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。加入2 mL 5%鹽酸甲醇溶液，3 mL氯仿-甲醇溶液(體積比1∶1)，100 μL十九烷酸甲酯內(nèi)標。于85 ℃水浴鍋中水浴1 h。水浴完成后，降至室溫，在離心管中加入1 mL正己烷，振蕩萃取2 min后，靜置1 h。取上層清液100 μL，用正己烷定容到1 mL，用0.45 μm濾膜過濾后上機測試。色譜柱升溫程序為80 ℃保持1 min，以10 ℃/min的速率升溫至200 ℃，繼續(xù)以5 ℃/min的速率升溫至250 ℃，最后以2 ℃/min的速率升到270 ℃，保持3 min。脂肪酸含量表示為g/kg的形式。

1.8 氨基酸含量測定

將樣品進行冷凍干燥，稱取30 mg樣品放入20 mL水解管中，加入10 mL 6 mol/L鹽酸，將吹氮儀的吹氮口插入裝有樣品的水解管中，吹氮氣15 min，立即在火焰酒精燈下封口。在110 ℃下消解22～24 h，冷卻后移出，用0.22 μm有機濾膜過濾0.1 mL于氣相瓶中，于60 ℃用氮氣吹干溶液中的鹽酸和水，加入1 mL 0.02 mol/L鹽酸，搖勻，利用氨基酸分析儀(L-8900，Hitachi公司，日本)進行測定，通過計算每個氨基酸的峰值面積，并將其與標準校準曲線進行比對。氨基酸含量表示為g/kg的形式。

1.9 性腺顏色測定

取海膽性腺樣品，仔細修剪成規(guī)格一致的小塊，利用色差儀(CM-A145，KonicaMinolta公司，日本)測量亮度(L*)、紅度(a*)和黃度(b*)值。根據(jù)Mcbride等[34]的方法，利用標準淺橙黃色(L*=68.9、a*=28.7、b*=60.4)和標準淺黃色(L*=74.6、a*=28.7、b*=66.1)進行計算單個性腺顏色和標準顏色之間的總色差(ΔE)。

1.10 計算公式和統(tǒng)計分析

利用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，在采用單因素方差分析(one-way ANOVA)法進行顯著性檢驗的基礎(chǔ)上，采用Duncan氏多重比較法對組間差異顯著性進行檢驗。試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準誤(mean±SE)表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽存活、生長和性腺指數(shù)的影響

由表3可見，各組存活率均為100%。各組之間終末體重、增重率和性腺濕重無顯著差異(P>0.05)。PO+SL組的性腺指數(shù)最低，顯著低于對照組(P<0.05)，但與PO+KO組差異不顯著(P>0.05)。PO+KO組的性腺指數(shù)雖低于對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

表3 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽存活、生長和性腺指數(shù)的影響

2.2 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

由表4可知，PO+SL組的性腺水分含量顯著高于PO+KO組和對照組(P<0.05)。PO+SL組的性腺粗蛋白質(zhì)含量略低于PO+KO組(P>0.05)，顯著低于對照組(P<0.05)。各組之間性腺粗脂肪含量無顯著差異(P>0.05)。此外，PO+KO組和對照組之間性腺水分、粗脂肪和粗蛋白質(zhì)均差異不顯著(P>0.05)。

2.3 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺顏色的影響

由表5可知，PO+SL組的性腺L*值最高，對照組的性腺a*值最高，但各組之間性腺L*和a*無顯著差異(P>0.05)。PO+SL組的性腺b*值顯著低于PO+KO組和對照組(P<0.05)，但PO+KO組和對照組之間無顯著差異(P>0.05)。PO+KO組和對照組的性腺ΔE1和ΔE2值無顯著差異(P>0.05)，且均顯著低于PO+SL組(P<0.05)。

表4 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺常規(guī)營養(yǎng)成分的影響(濕物質(zhì)基礎(chǔ))

2.4 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺發(fā)育的影響

如圖1所示，PO+SL組的性腺發(fā)育速度較其他各組遲緩，雄性和雌性個體僅發(fā)育到Ⅱ期。PO+KO組和對照組的性腺發(fā)育速度相當，但雄性和雌性個體之間性腺發(fā)育不同步，雄性個體性腺均發(fā)育到Ⅲ期，而雌性個體性腺僅發(fā)育到Ⅱ期。

2.5 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺氨基酸組成的影響

由表6可知，PO+SL組的性腺總氨基酸(TAA)含量顯著高于PO+KO組和對照組(P<0.05)，但PO+KO組和對照組之間無顯著差異(P>0.05)。PO+SL組的性腺必需氨基酸(EAA)含量顯著高于PO+KO組和對照組(P<0.05)，且PO+KO組顯著低于對照組(P<0.05)。性腺甜味氨基酸和鮮味氨基酸含量依次為PO+SL組>PO+KO組>對照組，且各組之間均存在顯著差異(P<0.05)。PO+SL組的性腺苦味氨基酸含量顯著高于PO+KO組和對照組(P<0.05)，但PO+KO組和對照組之間無顯著差異(P>0.05)。

A：對照組() control group ()；B：對照組(♀) control group (♀)；C：PO+SL組() PO+SL group ()；D：PO+SL組(♀) PO+SL group (♀)；E：PO+KO組() PO+KO group ()；F：PO+KO組(♀) PO+KO group (♀)。NP：營養(yǎng)吞噬細胞 nutritive phagocyte；SP：精母細胞 spermatocyte；S：精子 spermatozoa；EV：早期卵黃形成卵母細胞 early vitellogenic oocyte。

表6 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺氨基酸組成的影響(濕物質(zhì)基礎(chǔ))

2.6 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺脂肪酸組成的影響

由表7可知，PO+SL組的性腺EPA和DHA含量最低，顯著低于PO+KO組和對照組(P<0.05)；PO+KO組的性腺EPA和DHA含量也顯著低于對照組(P<0.05)。PO+SL組的性腺ARA含量與PO+KO組差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于對照組(P<0.05)。PO+SL組的性腺n-6多不飽和脂肪酸(n-6PUFA)含量顯著高于PO+KO組(P<0.05)，且顯著低于對照組(P<0.05)。PO+KO組的性腺n-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)含量顯著高于PO+SL組(P<0.05)，且顯著低于對照組(P<0.05)。PO+KO組的性腺n-3PUFA/n-6PUFA顯著高于對照組和PO+SL組(P<0.05)，且對照組顯著高于PO+SL組(P<0.05)。

表7 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺脂肪酸組成的影響(濕物質(zhì)基礎(chǔ))

3 討 論

3.1 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽生長和性腺指數(shù)的影響

有研究表明，不同來源的磷脂其脂肪酸組成存在差異，因而其生理功能也有所不同，從而對水產(chǎn)動物生長性能的影響也不同[19-20]。本研究中，PO+SL組中間球海膽的增重率和性腺指數(shù)較低，這與Lin等[26]和Ning等[10]的研究結(jié)果相似，可能是由于大豆卵磷脂中含有大量亞油酸(LA，18∶2n-6)，LA具有致炎作用，并且影響類固醇激素的合成，從而導(dǎo)致水生動物生長緩慢，性腺發(fā)育遲緩[35-36]。此外，在北方球海膽[37]和中間球海膽[9]的研究中已經(jīng)證實大量的LA會造成ARA的沉積，過多攝入ARA會對水產(chǎn)動物的生長和性腺發(fā)育產(chǎn)生負面影響，這在牙鲆(Paralichthysolivaceus)[38]、夏威夷帽貝 (Cellanasandwicensis)[39]、黑海膽(Diademasetosum)[40]和雌性半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)[41]等水產(chǎn)動物中已得到證實。

3.2 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺發(fā)育的影響

性腺不僅是產(chǎn)生配子的生殖器官，還是儲存能量和營養(yǎng)物質(zhì)的器官[42-44]。因此希望海膽性腺發(fā)育同步，以確保能夠持續(xù)生產(chǎn)，滿足市場需求[45]。大量研究表明，在促進甲殼動物發(fā)育和繁殖過程中，磷脂發(fā)揮著重要作用，如磷脂作為底物參與卵黃發(fā)生的合成，以促進卵黃蛋白的生成、促進脂質(zhì)積累及促進卵巢的發(fā)育等[21-22,46]。在本研究中，PO+SL組海膽性腺發(fā)育速度較其他各組相對較慢，雌性和雄性個體均停留在Ⅱ期；而PO+KO組和對照組雄性個體發(fā)育較快，均進入Ⅲ期，而雌性個體仍停留在Ⅱ期，這說明富含n-3LC-PUFA的磷蝦油和魚油加快了雄性海膽的性腺發(fā)育。有關(guān)n-3LC-PUFA影響海膽雌性和雄性個體性腺發(fā)育差異的機制尚不完全清楚，但在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[47]的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中高水平的n-3高度不飽和脂肪酸(n-3HUFA)可以提高親魚的產(chǎn)卵量，所產(chǎn)卵子卵徑大，孵化率高，仔稚魚的存活率強。因此，在本研究中，棕櫚油與磷蝦油的聯(lián)合投喂有利于性腺發(fā)育和配子發(fā)生，從而有助于提高繁殖期海膽的成熟度。但是，海膽性腺是唯一可食用部分，從食用角度來看，Ⅱ期末Ⅲ期初的性腺最佳，因為此時性腺中營養(yǎng)吞噬細胞達到最大且配子還未分化或剛剛開始分化，大量營養(yǎng)物質(zhì)如卵黃蛋白和脂類儲存在營養(yǎng)吞噬細胞內(nèi)[48]。隨著配子發(fā)生，營養(yǎng)吞噬細胞內(nèi)儲存的營養(yǎng)物質(zhì)逐漸被消耗，導(dǎo)致海膽性腺味道變酸，質(zhì)地變軟[49]。

3.3 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺顏色的影響

海膽性腺顏色是市場售賣時最重要的指標，其不受歡迎和不穩(wěn)定的顏色都會導(dǎo)致海膽經(jīng)濟價值大大下降[50]。海膽性腺是唯一可食用的部分，亮黃色、亮橙色、芒果黃的性腺是消費者喜愛的顏色[51]。先前的研究表明，性腺的顏色會受到飼料種類和營養(yǎng)成分的影響[52]。在本研究中，a*值在22～24，b*值在40～51，PO+SL組和PO+KO組的性腺L*值處于60左右，高于其他種類的海膽性腺L*值[53-56]。

關(guān)于顏色的差異，△E越低，就越接近標準顏色[55]。海膽性腺的顏色取決于體內(nèi)黃色和橙色類胡蘿卜素的沉積[57]，磷脂可能通過改變細胞膜的通透性來提高細胞吸收效率，從而提高類胡蘿卜素的生物利用度[58-59]。本研究中，PO+KO組的性腺△E1和△E2低于PO+SL組，可能因為磷蝦油中含有大量蝦青素，蝦青素是一種類胡蘿卜素，具有強抗氧化活性和顯著的著色能力[60]，這使得PO+KO組海膽性腺更接近標準顏色。Cuesta-Gomez等[23]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中同時含有魚油和大豆卵磷脂，△E較低，與標準顏色相近，這與本研究結(jié)果相似。

3.4 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺氨基酸組成的影響

氨基酸的組成和含量是評價食物營養(yǎng)價值重要的指標之一[61]。人們根據(jù)氨基酸在口腔中的感受將其分為甜味氨基酸、鮮味氨基酸、苦味氨基酸三大類。其中，蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸屬于甜味氨基酸；天冬氨酸、谷氨酸屬于鮮味氨基酸；蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸屬于苦味氨基酸[23]。有研究表明，飼料中添加魚油或者魚粉會對海膽性腺味道產(chǎn)生負面影響[62-63]。在本研究中，對照組的性腺甜味氨基酸和鮮味氨基酸含量最少，但在促進生長、性腺發(fā)育方面優(yōu)于其他各組；對照組的性腺纈氨酸和蛋氨酸的含量顯著高于PO+KO組。在苦味氨基酸中，纈氨酸和蛋氨酸等氨基酸顯著降低性腺風(fēng)味，已被報道為其他海膽性腺苦味的促進劑，使其更苦更酸[64-65]。

本研究中，PO+SL組的性腺TAA含量高于PO+KO組和對照組，這可能與不同飼料組n-3PUFA含量差異有關(guān)，PO+KO組和對照組的性腺n-3PUFA含量高于PO+SL組。已有研究表明，飼料中n-3LC-PUFA能顯著促進海膽性腺發(fā)育和配子發(fā)生，在配子發(fā)生過程中，累積在營養(yǎng)吞噬細胞中的氨基酸會被大量消耗[11,49]。此外，n-3LC-PUFA主要用于構(gòu)建體內(nèi)生物膜，而較少用于氧化供能，為了滿足能量需要，機體將氨基酸用于供能的比例可能會增加，從而導(dǎo)致TAA含量降低[66-67]。PO+KO組EAA含量低于PO+SL組，這可能是由于磷蝦油的添加提高了海膽性腺發(fā)育速度，致使較多必需氨基酸用于配子發(fā)生。EAA/TAA值也是評價水產(chǎn)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值的重要參考指標，一般認為，EAA/TAA值理想狀態(tài)為0.4，可代表高質(zhì)量蛋白質(zhì)[68]。本研究中，PO+SL組的EAA/TAA值為0.35，對照組EAA/TAA值為0.39，這表明PO+SL組和對照組的蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值要優(yōu)于PO+KO組。

3.5 棕櫚油飼料中添加2種磷脂對中間球海膽性腺脂肪酸組成的影響

眾所周知，脂肪酸在天然餌料或配方飼料中的含量會影響特定組織的生存、生長、發(fā)育以及生殖性能[69]。有研究表明，n-3LC-PUFA有益于人類，如促進大腦和神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，一定程度上降低冠心病和某種癌癥的發(fā)病率，增加免疫力，促進人類持續(xù)健康[70-76]。由于磷蝦油和魚油中富含n-3LC-PUFA，因此PO+KO組和對照組的性腺n-3PUFA含量，尤其是EPA和DHA含量較高，而PO+SL組由于缺乏n-3LC-PUFA致使性腺中這些脂肪酸沉積量較少，從而大大降低了海膽性腺的脂肪酸營養(yǎng)價值，這與三疣梭子蟹的研究結(jié)果[68]相似。在人類飲食結(jié)構(gòu)中，相比較n-3PUFA，大量攝入n-6PUFA被證實會增加一些疾病的可能性[77]。某些n-6PUFA，如LA，可能代謝轉(zhuǎn)化為ARA，導(dǎo)致低密度脂蛋白(LDL)氧化和促炎癥介質(zhì)生成增加，這可能對動物健康產(chǎn)生不良影響[78]。在本研究中，PO+SL組的性腺n-6PUFA含量高于PO+KO組。n-3PUFA/n-6PUFA值被認為是評價海洋生物相對營養(yǎng)價值的重要指標，較高的n-3PUFA/n-6PUFA值對預(yù)防心血管疾病、肥胖癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有重要意義[77,79]。本研究中，PO+KO組的性腺n-3PUFA/n-6PUFA值最高，這與Lin等[26]的研究結(jié)果一致。

對野生海膽性腺脂肪酸組成分析發(fā)現(xiàn)，LC-PUFA以ARA和EPA為主，而DHA含量較低[80-82]。在本研究中，PO+KO組的性腺EPA和DHA含量顯著高于PO+SL組，主要是因為磷蝦油的添加，磷蝦油中富含n-3LC-PUFA[24]。值得一提的是，在飼料脂肪酸組成中，PO+SL組飼料中沒有檢測到ARA、EPA和DHA，但在PO+SL組海膽性腺中發(fā)現(xiàn)是有一定量的ARA、EPA和DHA，這表明中間球海膽性腺可能在試驗前就具有一定量的ARA、EPA和DHA。此外，海膽可能具有合成LC-PUFA的能力[9,83]。同時，也具有沉積在消化道中的LC-PUFA，通過磷脂重塑，即在磷脂酶A2(PLA2)和溶血磷脂酰膽堿酰基轉(zhuǎn)移酶(LPCAT)的作用下，在磷脂sn-2位脫下不合適的脂肪酸，結(jié)合消化道中的LC-PUFA，并且轉(zhuǎn)運到性腺進行性腺發(fā)育的可能性。在美國龍蝦(Homarusamericanus)中，已表明磷脂可能促進血淋巴中膽固醇的吸收和轉(zhuǎn)運過程[84]。此外，日本對蝦(Penaeusjaponicus)的研究中進一步發(fā)現(xiàn)，磷脂在一定程度上能夠促進脂質(zhì)從腸道向其他組織轉(zhuǎn)運，推測磷脂是參與轉(zhuǎn)運過程的脂蛋白結(jié)構(gòu)中的重要物質(zhì)，為脂蛋白的形成提供主要的極性脂來源[85]。綜合考慮原料成本和性腺脂肪酸營養(yǎng)價值，本研究認為可以考慮先投喂PO+SL組飼料，上市之前投喂PO+KO組飼料進行強化，這樣不僅能降低原料成本，而且能夠提高中間球海膽性腺脂肪酸營養(yǎng)。

4 結(jié) 論

棕櫚油飼料中添加大豆卵磷脂或磷蝦油并未顯著影響中間球海膽的增重率，磷蝦油較大豆卵磷脂能顯著提高中間球海膽性腺指數(shù)、發(fā)育速度及性腺必需脂肪酸含量。