大口黑鱸攝食含小肽飼料后的胃排空特征和消化酶活性變化

叢湘明 李 向 華雪銘* 宓水潮 杭 瑩 易婉婷

(1.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境生態(tài)與魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)研究中心，上海 201306；2.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水生遺傳資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306；3.上海海洋大學(xué)，國(guó)家水產(chǎn)科學(xué)實(shí)驗(yàn)教育示范中心，上海 201306；4.常州亞源生化科技有限公司，常州 213111)

魚(yú)類的胃排空率(gastric evacuation rate，GER)指攝食后食物從胃排至腸道的速率[1]，是建立魚(yú)類攝食和生長(zhǎng)模型的重要組成部分[2-3]。在野生魚(yú)類資源調(diào)查中常將測(cè)定的胃排空率與相應(yīng)種群在自然環(huán)境中的胃內(nèi)容物相結(jié)合，用來(lái)研究魚(yú)類在自然狀態(tài)下的日攝食量[4]、攝食周期以及生態(tài)轉(zhuǎn)換效率等一系列生態(tài)學(xué)相關(guān)的問(wèn)題[5-6]。在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，胃排空率常被用于人工配合飼料開(kāi)發(fā)[7]、餌料轉(zhuǎn)換率評(píng)估[3]以及投喂策略優(yōu)化[8-10]等研究。20世紀(jì)末以來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者陸續(xù)對(duì)鲇魚(yú)(SilurusasotusLinnaeus)[11]、斑點(diǎn)叉尾(Ietaluruspunetaus)[12]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[13]等養(yǎng)殖魚(yú)類的胃排空率進(jìn)行了系統(tǒng)研究，并通過(guò)多種數(shù)學(xué)模型對(duì)胃內(nèi)容物重量進(jìn)行擬合，為科學(xué)制定養(yǎng)殖魚(yú)類投喂頻率提供重要參數(shù)。

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，隸屬鱸形目(Perciformes)，黑鱸屬(Micropterus)，是具有適應(yīng)性強(qiáng)、生長(zhǎng)快等優(yōu)點(diǎn)的肉食性溫水魚(yú)類，且可以全程使用人工配合飼料養(yǎng)殖，目前已成為我國(guó)淡水魚(yú)養(yǎng)殖的主要品種之一。但近幾年陸續(xù)報(bào)道在全程使用配合飼料飼養(yǎng)后期會(huì)出現(xiàn)肌肉品質(zhì)下降[14]、肝臟病變等狀況[15]，這說(shuō)明大口黑鱸相關(guān)飼料產(chǎn)品還有很大的提升空間。小肽又稱寡肽，是一類由蛋白質(zhì)水解形成，以2～10個(gè)氨基酸組成的易消化吸收且兼顧多種生物功能的小分子物質(zhì)[16]。在本實(shí)驗(yàn)室前期研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加2%小肽可以提高消化酶活性，促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)[17]，但是否需要同時(shí)改變投喂策略更有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收還未可知。

因此，本研究在前期研究[17]基礎(chǔ)上，考察攝食含小肽飼料后的大口黑鱸胃排空率及胃排空過(guò)程中消化酶活性變化，使用數(shù)學(xué)模型對(duì)胃排空率進(jìn)行擬合，計(jì)算其排空時(shí)間，旨在了解添加小肽后對(duì)大口黑鱸消化吸收進(jìn)程的影響，為養(yǎng)殖中投喂頻率和飼料配方的優(yōu)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)所用小肽由常州某生化科技有限公司提供，通過(guò)復(fù)合水解法以玉米蛋白作為底物，經(jīng)過(guò)浸泡、酸化、酶解、濃縮、均質(zhì)、噴霧干燥、半成品物理冷卻、粉體包衣等多道工藝精制而成。其蛋白質(zhì)水平為46%，其中小肽平均分子質(zhì)量為1 003 Da，分子質(zhì)量為1 000 Da的小分子蛋白質(zhì)占總蛋白質(zhì)的25%～30%。

根據(jù)大口黑鱸的營(yíng)養(yǎng)需求并結(jié)合養(yǎng)殖生產(chǎn)中常用的商品飼料設(shè)計(jì)本試驗(yàn)所用飼料配方，以魚(yú)粉、豆粕、玉米蛋白粉等原料為蛋白質(zhì)源，魚(yú)油、菜籽油和大豆磷脂為脂肪源，配制3種飼料：D0+飼料滿足大口黑鱸的營(yíng)養(yǎng)需求(正對(duì)照組)，D0-飼料在D0+飼料基礎(chǔ)上降低3%蛋白質(zhì)水平(飼料中魚(yú)粉、血粉、豆粕、玉米蛋白粉等比例減少)(負(fù)對(duì)照組)，D2飼料則在D0-飼料基礎(chǔ)上添加2%小肽。

將飼料原料粉碎后過(guò)60目篩，按照配方比例充分混勻后，再加入油脂使用混合機(jī)混合均勻，隨后加入所配飼料質(zhì)量15%～20%的水后再次混勻，經(jīng)制粒機(jī)制成直徑為2 mm的顆粒飼料，待50 ℃烘干至水分含量低于10%后，密封儲(chǔ)存于-20 ℃冰箱中備用。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items飼料 DietsD0+D0-D2酵母膏 Yeast extract1.001.001.00氯化膽堿 Choline chloride0.500.500.50磷酸二氫鈣 Ca(H2PO4)2 1.001.001.00?；撬?Taurine 0.300.300.30微晶纖維素 Microcrystalline cellulose2.002.002.00沸石粉 Zeolite4.706.724.72合計(jì) Total100.00100.00100.00營(yíng)養(yǎng)水平 Nutrient levels3)粗蛋白質(zhì)Crude protein46.6443.7044.64粗脂肪 Crude lipid12.0711.7811.82總能 Gross energy/(MJ/kg)18.9418.8418.81

1.2 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在上海海洋大學(xué)濱海養(yǎng)殖基地進(jìn)行。提前將購(gòu)買(mǎi)于浙江省湖州市池塘養(yǎng)殖的魚(yú)苗進(jìn)行暫養(yǎng)與馴化，選取規(guī)格均勻、健康的大口黑鱸540尾[初始體重(21.27±0.17) g]，隨機(jī)分配至12個(gè)網(wǎng)箱中，每個(gè)網(wǎng)箱(200 cm×120 cm×100 cm)45尾魚(yú)，每組4個(gè)網(wǎng)箱即4個(gè)重復(fù)，養(yǎng)殖周期為60 d，每天表觀飽食投喂2次(08:30和16:30)，日投喂量為體重的2%～3%，采用自然光照，水體溫度(27±5) ℃；定期吸污換水，24 h連續(xù)充氣；溶解氧濃度不低于5 mg/L，氨氮濃度不高于0.3 mg/L。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

D0+組、D0-組和D2組分別從飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后的4個(gè)網(wǎng)箱中挑選規(guī)格相同、體重為(85.58±1.81) g的大口黑鱸80尾，將挑選出的大口黑鱸放置在每組相應(yīng)的小網(wǎng)箱(80 cm×30 cm×50 cm)中，每組8個(gè)網(wǎng)箱，每個(gè)網(wǎng)箱10尾。正式試驗(yàn)開(kāi)始前，通過(guò)解剖法確定取樣時(shí)間間隔，為保證試驗(yàn)采樣操作方便，所有正式試驗(yàn)用魚(yú)饑餓處理48 h，確保其消化道徹底排空。隨后，所有網(wǎng)箱的魚(yú)投喂與養(yǎng)殖試驗(yàn)對(duì)應(yīng)的飼料，表觀飽食投喂1次，投喂持續(xù)時(shí)間30 min，分別在投喂結(jié)束后的0、3、6、9、12、18、24、30 h隨機(jī)對(duì)各組8個(gè)網(wǎng)箱中的1個(gè)網(wǎng)箱取樣。胃排空試驗(yàn)時(shí)水質(zhì)和管理?xiàng)l件與前期養(yǎng)殖試驗(yàn)相同。

1.4 樣品采集與測(cè)定

將網(wǎng)箱中10尾大口黑鱸全部撈出，使用丁香酚迅速將魚(yú)麻醉。沿著大口黑鱸腹部，從肛門(mén)剪至下頜部，暴露內(nèi)臟。分離出胃和消化道，用鑷子分別夾緊胃賁門(mén)部和幽門(mén)部，將賁門(mén)朝向預(yù)先干燥稱重的離心管，完全擠出胃內(nèi)容物，對(duì)離心管稱重，所得重量即為胃內(nèi)容物濕重；將胃內(nèi)容物置于烘箱中按GB/T 6435—2006測(cè)定水分含量，然后記錄所得干重。

將去除內(nèi)容物的胃和腸道置于-20 ℃保存，用于消化酶活性的測(cè)定。淀粉酶、脂肪酶活性均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒進(jìn)行測(cè)定；胃蛋白酶活性采用GB/T 23527—2009中酸性蛋白酶活性測(cè)定方法測(cè)定，腸道蛋白酶活性采用GB/T 23527—2009中中性蛋白酶活性測(cè)定方法測(cè)定，組織勻漿液的蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍(lán)染色法進(jìn)行測(cè)定。

1.5 指標(biāo)計(jì)算與數(shù)學(xué)模型

SR(%)=100×Nt/N0；
WGR(%)=100×(Wt-W0)/W0；
FCR=Wf/(WT-WO)；
SGR(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t。

式中：SR為存活率；Nt為終末尾數(shù)；N0為初始尾數(shù)；WGR為增重率；Wt為終末體重；W0為初始體重；FCR為飼料系數(shù)；Wf為攝入飼料量；WT為試驗(yàn)?zāi)┛傊?；WO為試驗(yàn)初總重；SGR為特定生長(zhǎng)率。

參照文獻(xiàn)[10]用線性、指數(shù)和平方根模型分別擬合胃內(nèi)容物剩余重量百分比：

線性模型:Y=A-Bt；
指數(shù)模型:Y=Ae-Bt；
平方根模型:Y0.5=A-Bt。

式中：Y為任一取樣時(shí)間胃內(nèi)容物重量占總攝食量的百分比，即胃內(nèi)容物剩余重量百分比(%)=(任一取樣時(shí)間時(shí)胃內(nèi)容物重量/總攝食量)×100；B為瞬時(shí)胃排空率(%/h)；t為攝食后的時(shí)間(h)；A為常數(shù)。通過(guò)比較各擬合模型的相關(guān)系數(shù)(R2)、殘差平方和(RSS)、殘差的標(biāo)準(zhǔn)差(SDR)來(lái)選擇大口黑鱸的最佳排空模型。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 25.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若發(fā)現(xiàn)各時(shí)間點(diǎn)存在顯著差異則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。3種數(shù)學(xué)模型的參數(shù)A、B均由統(tǒng)計(jì)軟件Origin 2018進(jìn)行曲線擬合得到。所有統(tǒng)計(jì)值均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，顯著水平定為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 大口黑鱸攝食不同飼料后生長(zhǎng)性能的變化

從表2可以看出，D0+組終末體重與增重率最高，D2組終末體重與增重率略高于D0-組，但差異不顯著(P>0.05)。3組間飼料系數(shù)、特定生長(zhǎng)率與存活率也都差異不顯著(P>0.05)。

表2 各組大口黑鱸攝食不同飼料的生長(zhǎng)性能

2.2 大口黑鱸攝食不同飼料后胃內(nèi)容物水分含量的變化

由于30 h時(shí)大口黑鱸胃內(nèi)容物已排空未采集到內(nèi)容物，因此攝食后各組胃內(nèi)容物水分含量變化為24 h內(nèi)，結(jié)果如圖1所示。3組大口黑鱸胃內(nèi)容物水分含量均在攝食后0～6 h顯著上升(P<0.05)，均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。D0+組、D0-組和D2組胃內(nèi)容物水分含量分別在18、12和18 h最高。D0-組和D2組胃內(nèi)容物水分含量在3～24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.3 大口黑鱸攝食不同飼料后胃排空模型的選擇與胃排空時(shí)間

分別使用線性、平方根及指數(shù)模型對(duì)3組大口黑鱸胃排空數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。結(jié)果顯示(表3，圖2)，3組胃內(nèi)容物的干重和濕重?cái)?shù)據(jù)能較好地與3種模型進(jìn)行擬合。比較各組各模型的R2，采用濕重?cái)M合結(jié)果中只有D2組線性模型R2高于0.900。綜合R2、RSS以及SDR可知，使用胃內(nèi)容物干重?cái)M合結(jié)果相對(duì)要優(yōu)于濕重?cái)M合結(jié)果。在本試驗(yàn)條件下，D0+組胃排空規(guī)律的最佳模型是使用干重?cái)M合的指數(shù)模型，D0-組和D2組的最佳模型是使用干重?cái)M合的平方根模型。

將圖2中最佳模型與表4結(jié)合來(lái)看，D0+、D0-和D2組的胃內(nèi)容物完全排空均為30 h，但3組的變化趨勢(shì)不盡相同。D0+組中在0～9 h，胃內(nèi)容物剩余重量百分比在9 h時(shí)急劇下降，胃內(nèi)容物剩余重量百分比降至42%左右，隨后緩慢下降至24 h時(shí)，胃內(nèi)容物已排空85%左右; 在30 h時(shí)，胃內(nèi)容物已基本排空。D0-組中在0～9 h，胃內(nèi)容物剩余重量百分比保持著相對(duì)勻速下降趨勢(shì)，9～18 h時(shí)胃內(nèi)容物剩余重量百分比急劇降至23%左右，隨后緩慢下降至24 h時(shí)，胃內(nèi)容物已排空80%左右；在30 h時(shí)，胃內(nèi)容物已基本排空。D2組在整個(gè)排空過(guò)程中，胃內(nèi)容物剩余重量百分比也呈現(xiàn)先慢后快再慢的特點(diǎn)，但保持著相對(duì)勻速下降趨勢(shì)，12 h時(shí)胃內(nèi)容物剩余重量百分降至42%左右，在24 h時(shí)，胃內(nèi)容物已排空85%左右；在30 h時(shí)，胃內(nèi)容物已基本排空。因此，根據(jù)各組最佳模型擬合得到的方程式Y(jié)=99.080e-0.084t、Y0.5=9.972-0.257t和Y0.5=9.868 9-0.274t，計(jì)算可知50%和80%胃排空的理論時(shí)間，D0+組分別為8.14和19.04 h，D0-組分別為11.28和21.4 h，D2組分別為10.21和19.67 h。

不同小寫(xiě)字母表示不同取樣時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)之間差異顯著(P<0.05)。下圖同。

表3 各組大口黑鱸攝食不同飼料的胃排空曲線的3種數(shù)學(xué)模型擬合

續(xù)表3項(xiàng)目 Items組別 Groups模型 Models公式 EquationsR2RSS SDR濕重Wet weightD0+線性模型 Y=98.554-3.187t0.86511 991.96312.320平方根模型Y0.5=10.171-0.222t0.85413 191.93212.917指數(shù)模型Y=106.638e-0.058t0.82415 661.11414.056D0-線性模型 Y=106.890-3.588t0.8837 052.9979.449平方根模型 Y0.5=10.605-0.245t0.86215 322.74113.913指數(shù)模型Y=114.725e-0.060t0.81720 328.52015.985D2線性模型 Y=107.133-3.638t0.90710 266.07511.400平方根模型 Y0.5=10.623-0.250t0.88812 601.46412.614指數(shù)模型Y=115.145e-0.061t0.84017 867.01114.971

表4 各組大口黑鱸攝食不同飼料的體重與胃內(nèi)容物重量(干重)

2.4 各組胃排空過(guò)程中消化酶活性的變化

由圖3至圖5可知，各組胃腸道中的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均呈先升高后降低的趨勢(shì)，D0+組攝食后9 h時(shí)胃腸道中的淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性達(dá)到最高值，而D0-組和D2組則在攝食后9 h時(shí)胃蛋白酶活性達(dá)到最高值，顯著高于同組其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)，12 h時(shí)胃腸道中的淀粉酶、脂肪酶及腸道蛋白酶活性達(dá)到最高值，顯著高于同組其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)。

通過(guò)比較各組各時(shí)間點(diǎn)3種消化酶活性(圖6)可知，剛攝食后，D0-組胃淀粉酶和胃蛋白酶活性顯著高于D0+組和D2組(P<0.05)，而D0+組腸道淀粉酶活性顯著高于其余2組(P<0.05)，腸道蛋白酶活性顯著低于D0-組和D2組(P<0.05)；3組胃脂肪酶活性除6 h外其余時(shí)間點(diǎn)差異不顯著(P>0.05)。隨著時(shí)間的推移，胃腸道3種消化酶的活性也發(fā)生了變化，在攝食后6 h時(shí)D0+組胃蛋白酶、淀粉酶以及腸道脂肪酶活性顯著高于其余2組(P<0.05)，攝食12 h后D0+組胃腸道的淀粉酶和胃蛋白酶活性顯著低于其余2組(P<0.05)。

圖2 3種數(shù)學(xué)模型對(duì)各組大口黑鱸胃內(nèi)容物剩余重量百分比變化的擬合結(jié)果

圖3 各組大口黑鱸攝食不同飼料30 h內(nèi)胃腸道淀粉酶活性變化

圖4 各組大口黑鱸攝食不同飼料30 h內(nèi)胃腸道蛋白酶活性變化

圖5 各組大口黑鱸攝食不同飼料30 h內(nèi)胃腸道脂肪酶活性變化

3 討 論

3.1 不同飼料對(duì)大口黑鱸魚(yú)胃排空特征的影響

雖然魚(yú)類種屬繁多，有著不同的生活習(xí)性與攝食習(xí)慣，但主要胃排空類型分為3種：第1種類型為先快后慢型，當(dāng)食物到達(dá)魚(yú)類胃部后，先經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的快速排空，隨后隨著時(shí)間的增加胃排空速率逐漸減慢，如攝食浮游生物的鳀魚(yú)(Engraulis)[18]和玉筋魚(yú)(Ammodytespersonatus)[5]，投喂飼料的斑點(diǎn)叉尾[12]和瓦氏黃顙魚(yú)(Pelteobagrusvachelli)[19]；第2種類型為直線下降型，魚(yú)類攝食后其胃內(nèi)容物重量隨時(shí)間的推移呈線性下降趨勢(shì)，如許氏平鲉(Sebastesschlegelii)[20]、黑鯛(Sparusmacrocephalus)[21]等肉食性魚(yú)類；第3種類型為先慢后快再慢型，魚(yú)類攝食后其初始胃排空速率較低，隨后排空速率開(kāi)始加快，最后又降低排空速率直至胃內(nèi)容物排空，如厚頜魴幼魚(yú)(Megalobramapellegrini)[22]、云龍石斑魚(yú)(E.moara♀×E.lanceolatus)[23]和虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[24]等。本研究發(fā)現(xiàn)，攝食不同飼料后的大口黑鱸胃排空特征不盡相同，但都呈現(xiàn)出先慢后快再慢的特點(diǎn)，D0+組和D0-組尤為明顯，胃內(nèi)容物剩余重量百分比分別于9和18 h明顯下降。這說(shuō)明不同飼料對(duì)于大口黑鱸胃排空的總體趨勢(shì)影響不大，在使用不同品質(zhì)魚(yú)粉制作的飼料投喂歐白鮭(Coregonusalbula)[25]及不同蛋白質(zhì)水平的飼料投喂虹鱒[24]時(shí)也得到了類似的結(jié)果。

圖6 各時(shí)間點(diǎn)內(nèi)3組大口黑鱸攝食不同飼料的胃腸道消化酶活性的比較

3.2 不同飼料對(duì)大口黑鱸最優(yōu)模型的影響

在本試驗(yàn)中，3組大口黑鱸胃內(nèi)容物水分含量均在攝食3 h后上升，自6 h開(kāi)始基本保持不變，這種現(xiàn)象是魚(yú)類消化飼料的主要步驟之一[12]。研究表明，魚(yú)類胃內(nèi)容物中的水分含量對(duì)胃排空模型的建立有一定的影響[26]，用濕重來(lái)模擬魚(yú)類胃排空有可能高估胃內(nèi)容物的實(shí)際含量。本研究中，各組胃內(nèi)容物剩余濕重百分比在0～6 h會(huì)有個(gè)別取樣點(diǎn)超過(guò)100%的現(xiàn)象，在虹鱒[13]和南方鲇幼魚(yú)[27]等試驗(yàn)中均出現(xiàn)此現(xiàn)象，這種現(xiàn)象會(huì)導(dǎo)致擬合模型的可靠性降低。從本試驗(yàn)濕重?cái)M合結(jié)果來(lái)看確實(shí)如此，各組各模型的R2只有D2組的線性模型高于0.900。因此，本試驗(yàn)采用胃內(nèi)容物干重來(lái)模擬評(píng)估大口黑鱸胃排空模型。

由于魚(yú)類胃排空機(jī)制復(fù)雜多樣，因此很難用統(tǒng)一的模型表現(xiàn)不同魚(yú)類胃排空方式。文獻(xiàn)報(bào)道的擬合模型就有10余種，如平方根模型、指數(shù)模型、線性模型、冪函數(shù)模型、邏輯斯蒂克模型、Gompertz模型、倒數(shù)模型等[1]。其中最為常用的擬合模型是線性模型、指數(shù)模型以及平方根模型[28]。目前研究表明，眼斑擬石首魚(yú)(Sciaenopsocellatus)[29]、許氏平鲉[20]、大眼梭鱸(Stizostedionvitreumvitreum)[30]等魚(yú)類的胃排空方式適用線性模型擬合，而俄羅斯鱘(Acipensergueldenstaedtii)幼魚(yú)[31]、厚頜魴幼魚(yú)[22]、鲇魚(yú)[11]等魚(yú)類的胃排空方式適用平方根模型擬合；斑點(diǎn)叉尾[12]、瓦氏黃顙魚(yú)[19]和銀大麻哈魚(yú)(Oncorhynchuskisutch)[32]等魚(yú)類的胃排空方式適用指數(shù)模型擬合。在本試驗(yàn)中，3組數(shù)據(jù)能較好地用3種模型進(jìn)行擬合，由結(jié)果可以看出經(jīng)D0+組指數(shù)模型和平方根模型的R2、RSS以及SDR差異不大，綜合比較后，D0+組胃排空規(guī)律的最佳模型是指數(shù)模型，D0-組和D2組的最佳模型是平方根模型，其方程式分別為Y=99.080e-0.084t、Y0.5=9.972-0.257t和Y0.5=9.868 9-0.274t，通過(guò)計(jì)算可知50%和80%胃排空的理論時(shí)間，D0+組分別為8.14和19.04 h，D0-組分別為11.28和21.40 h，D2組分別為10.21和19.67 h。3組50%和80%胃排空時(shí)間有一定差異，D0+組最短，可能是因?yàn)镈0+組飼料中蛋白質(zhì)水平高于其他2組，尤其是魚(yú)粉中存在“未知生長(zhǎng)因子”，使得飼料更容易被機(jī)體消化分解；D2組胃排空后期時(shí)間縮短，可能與小肽促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收功能有關(guān)。

有研究表明，當(dāng)魚(yú)類胃內(nèi)容物排出超過(guò)50%后，其食欲的恢復(fù)也超過(guò)50%[33]，當(dāng)排空超過(guò)80%時(shí)，其食欲完全恢復(fù)[34]。在理想情況下，當(dāng)魚(yú)類的食欲恢復(fù)時(shí)，立即獲得飼料，才能保證良好的生長(zhǎng)，并避免過(guò)度投喂所造成的養(yǎng)殖水體污染。但張鵬飛等[35]認(rèn)為胃排空率達(dá)到80%作為投喂最佳時(shí)間間隔的判定指標(biāo)并不充分，還要考慮到魚(yú)類的攝食節(jié)律，郭浩宇等[20]在許氏平鲉幼魚(yú)的研究中認(rèn)為，投喂間隔時(shí)間應(yīng)結(jié)合養(yǎng)殖過(guò)程中的實(shí)際觀察；朱云海等[36]在日本黃姑魚(yú)(Nibeajaponica)的研究中認(rèn)為，投喂間隔時(shí)間應(yīng)該在食欲開(kāi)始恢復(fù)和完全恢復(fù)之間。因此，綜合3組擬合結(jié)果大口黑鱸投喂間隔時(shí)間應(yīng)為8～21 h，此時(shí)食欲已得到較大程度的恢復(fù), 能取得較好的投喂效果。謝蘇明等[37]研究大口黑鱸投飼頻率后發(fā)現(xiàn)，分別于每天06:00和18:00各投喂1次的生長(zhǎng)率、抗氧化能力優(yōu)于其他組，間隔時(shí)間為12 h，與本試驗(yàn)結(jié)論基本吻合。

3.3 胃排空過(guò)程中消化酶活性的變化

消化酶在魚(yú)類生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有著極其重要的作用，根據(jù)消化對(duì)象的不同，大致可分為蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶等幾種[38]。魚(yú)類在攝食消化過(guò)程中，隨著時(shí)間的推移，消化酶的活性也發(fā)生相應(yīng)的變化，消化道中酶的數(shù)量經(jīng)過(guò)一段時(shí)間達(dá)到峰值，之后便會(huì)隨著飼料的減少而減少，消化道排空時(shí)最少[39]。

在本試驗(yàn)中，3組大口黑鱸胃腸道中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性隨著時(shí)間的推移都呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律性時(shí)序變化和組織差異性，這與在斑點(diǎn)叉尾[12]、云龍石斑魚(yú)[23]、全雄黃顙魚(yú)(all-malePelteobagrusfulvidraco)[40]和羅非魚(yú)(Oreochromismossambicus)[41]的研究結(jié)果一致。D0+組飼料蛋白質(zhì)水平及魚(yú)粉用量高于其他2組，機(jī)體更容易獲取所需要的營(yíng)養(yǎng)，因此，胃腸道的淀粉酶和蛋白酶活性變化速率要快于其余2組，這與D0+組胃排空變化速率快于其余2組的結(jié)果相吻合；而D0-組和D2組為了獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)，機(jī)體通過(guò)增強(qiáng)胃腸道消化酶活性的方式來(lái)強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，因此消化酶活性在前期達(dá)到峰值要慢于D0+組。本研究中，D2組大口黑鱸6～9 h胃內(nèi)容物排空速度高于D0-組，其9 h胃蛋白酶活性也顯著高于D0-組，9～30 h腸道的蛋白酶活性都顯著高于D0+組和D0-組，可能因?yàn)轱暳现刑砑拥男‰脑谖覆拷?jīng)過(guò)胃蛋白酶-鹽酸系統(tǒng)的分泌和消化作用釋放到達(dá)腸道，經(jīng)腸道中PepT1跨膜運(yùn)輸進(jìn)行完整的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收[42]，在此過(guò)程中通過(guò)激活細(xì)胞膜上的受體或與細(xì)胞內(nèi)受體結(jié)合等方式，引起細(xì)胞信號(hào)傳遞，誘導(dǎo)胃腸道內(nèi)分泌細(xì)胞分泌多種激素[16]，進(jìn)而提高胃腸道內(nèi)消化酶的活性[43]，增強(qiáng)腸道對(duì)蛋白質(zhì)的吸收利用。

但是從生長(zhǎng)結(jié)果來(lái)看，3組之間差異不顯著，這與我們前期在(11.04±0.05) g的大口黑鱸魚(yú)研究[17]中得出來(lái)的結(jié)果基本一致。目前，尚未見(jiàn)到關(guān)于胃排空特征和消化酶活性與生長(zhǎng)性能差異的報(bào)道，基于本試驗(yàn)現(xiàn)有結(jié)果，推測(cè)飼料蛋白質(zhì)水平的變化以及小肽的添加均能引起消化酶活性改變，以保持胃排空時(shí)間的相對(duì)恒定，進(jìn)而保證了各組大口黑鱸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用相對(duì)穩(wěn)定，從而導(dǎo)致了各組生長(zhǎng)性能差異不顯著。

4 結(jié) 論

綜上所述，改變飼料蛋白質(zhì)水平(3%以內(nèi))或在飼料中添加2%小肽對(duì)大口黑鱸總體胃排空時(shí)間及胃排空變化趨勢(shì)影響不顯著，胃排空方式為先慢后快再慢型，以平方根方模型為最優(yōu)；攝食不同飼料后的大口黑鱸胃腸道消化酶活性均呈各自的規(guī)律性變化，以維持胃排空時(shí)間的相對(duì)恒定，因此不需要改變投喂頻率。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐，建議大口黑鱸投喂間隔時(shí)間為8～21 h，每日投喂2次。