嶺南排石口服液研制與刺桐堿含量測(cè)定的研究

劉群娣，萬 頌，蘇馨科，歐陽霄妮，黃俊明，李冬利，鄭小吉

（1. 廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院南藥學(xué)院，廣東 江門 529000 ；2. 廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州510800 ；3. 五邑大學(xué)生物科技與大健康學(xué)院，廣東 江門 529000）

嶺南排石口服液是以全國老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)繼承工作指導(dǎo)老師、廣東省第二批名中醫(yī)師承項(xiàng)目指導(dǎo)導(dǎo)師余伯亮主任中醫(yī)師家傳經(jīng)驗(yàn)方“嶺南排石湯”為原方，并由廣東首屆職教名師、廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院鄭小吉主任中藥師采用現(xiàn)代科學(xué)工藝研制而成，用于臨床多發(fā)結(jié)石癥的治療。嶺南排石口服液以牛大力、布渣葉、廣東土牛膝等為原料，其中牛大力為君藥。牛大力為豆科植物美麗崖豆藤M(fèi)illettia speciosa Champ. 的干燥根，是嶺南常用的“藥食同源”藥材，其味甘、性平，具有補(bǔ)虛潤肺、補(bǔ)骨、強(qiáng)筋活絡(luò)的功效。刺桐堿、高麗槐素是嶺南排石口服液中主要的藥效成分[1-2]，且常被用作評(píng)價(jià)牛大力質(zhì)量優(yōu)劣的指標(biāo)[3]。本文介紹了嶺南排石口服液的制備工藝，并以色譜圖中的主要色譜峰、牛大力的主要藥效成分刺桐堿為指標(biāo)性成分，建立嶺南排石口服液中刺桐堿含量測(cè)定的簡便方法，用以對(duì)嶺南排石口服液進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

ACQUITY UPLC H-Class PLUS 型高效液相色譜儀，配Empower 色譜工作站（購自上海Waters 科技有限公司）；ML204T 型電子分析天平（購自上海METTLER TOLEDO 儀器有限公司）。牛大力、布渣葉、廣東土牛膝等藥材均購自國藥控股國大藥房江門連鎖有限公司，并經(jīng)廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院鄭小吉教授鑒定為正品。嶺南排石口服液（批號(hào)：2021091701，2021091702，2021091703 ；規(guī)格：50 mL）；對(duì)照品刺桐堿（批號(hào)：P20A10U95634，含量：98%），購自上海源葉生物科技有限公司；甲酸為分析純，乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取干燥至恒重的刺桐堿對(duì)照品約1 mg，精密稱定后用50% 的甲醇溶解，制得質(zhì)量濃度為62.50 μg/mL 的對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液，用50% 的甲醇進(jìn)行逐級(jí)稀釋，即得到不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取嶺南排石口服液5 m L，置于50 mL 的容量瓶中，加50% 的甲醇定容至刻度，搖勻后經(jīng)微孔濾膜過濾，即制得供試品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：ACQUITYUPLCBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫；檢測(cè)波長：278nm；流速：0.300mL/min；進(jìn)樣體積：1μL；柱溫：30℃。梯度洗脫流動(dòng)相比例見表1。

表1 梯度洗脫流動(dòng)相比例

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液進(jìn)樣分析，以50%的甲醇溶液為陰性對(duì)照溶液，結(jié)果見圖1。供試品溶液（圖1-C）與對(duì)照品溶液（圖1-A）的色圖譜中保留時(shí)間為2.8min 處有相同色譜峰，且紫外吸收光譜圖一致，而陰性對(duì)照溶液（圖1-B）在此處無色譜峰。表明該檢測(cè)方法的專屬性好。

圖1 對(duì)照品溶液（A）、陰性對(duì)照溶液（B）及嶺南排石口服液供試品（C）的典型色譜圖

2.4 線性與范圍考察

取不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積。以峰面積積分值對(duì)對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：y= 4393x+3680.7（r=0.9999）。結(jié)果表明，刺桐堿的進(jìn)樣濃度在0.10 ～62.5 μg/mL 之間時(shí)，與峰面積的值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積。峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均為0.07%（n=6），均小于2%，表明該檢測(cè)方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，在室溫下分別放置0h、2h、4h、8h、12h、24h 后，進(jìn)樣分析，記錄峰面積。峰面積的RSD 為0.39%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批嶺南排石口服液（批號(hào)：2021091701），按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并平行分為6 份，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示RSD 為1.30%（n=6），表明該檢測(cè)方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的嶺南排石口服液（ 批號(hào)：2021091701）約0.05mL，平行分為6 份，分別加入上述對(duì)照品溶液適量，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示加樣回收率為1.86%。詳見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

2.9 樣品含量測(cè)定

取嶺南排石口服液3 批，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定，計(jì)算樣品中刺桐堿的含量。結(jié)果見表3。

表3 三批嶺南排石口服液中刺桐堿含量（μg/mL）

3 嶺南排石口服液的制備工藝

通過研究，確定嶺南排石口服液的現(xiàn)代科學(xué)制備工藝流程。按驗(yàn)方配比準(zhǔn)備藥材原材料，按液料比3:1的比例加水煎煮2 次，第1 次煎煮120 min，第2 次煎煮80 min。合并兩次煎煮濾液，濃縮至液料比為1:1的濃縮液體積，靜置離心后取上清液，補(bǔ)液至液料比為1:1，即得嶺南排石口服液。制備工藝經(jīng)藥廠試生產(chǎn)，通過樣品測(cè)定，發(fā)現(xiàn)以該工藝條件制備的成品穩(wěn)定性較好。

4 討論

4.1 指標(biāo)成分的選擇

根據(jù)處方組成及配伍原則，并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)嶺南排石口服液可能含有的有效成分進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，綜合考慮各組分在處方中的含量差異和出峰響應(yīng)差異，兼顧該制劑整體質(zhì)量評(píng)價(jià)操作的簡便性，確定以主要色譜峰——刺桐堿（牛大力）活性成分作為質(zhì)量控制的指標(biāo)。

4.2 色譜條件的考察

本研究考察了多種流動(dòng)相體系（包括乙腈- 水、甲醇- 水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液）。以甲醇- 水系統(tǒng)作為流動(dòng)相時(shí)，出峰時(shí)間推遲，峰變寬；以乙腈-水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)，出峰時(shí)間相當(dāng)，乙腈-0.1% 甲酸水溶液中各組分分離度及色譜峰峰形更好。故本研究選用乙腈-0.1% 甲酸水溶液作為流動(dòng)相。本研究采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)樣品中各主要組分進(jìn)行全波長掃描，刺桐堿的最大吸收波長為278nm，干擾成分在此波長也有吸收峰，故最終選擇將278nm 作為檢測(cè)波長。

圖2 刺桐堿紫外吸收光譜圖

5 小結(jié)

本研究建立了嶺南排石口服液的研制方法，并采用UPLC 法快速測(cè)定嶺南排石口服液中刺桐堿的含量，對(duì)3 個(gè)批次樣品進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果顯示刺桐堿的含量范圍為76.06 ～81.72 μg/mL，其含量范圍波動(dòng)較小，說明該生產(chǎn)工藝和樣品質(zhì)量均較為穩(wěn)定。采用UPLC 法測(cè)定嶺南排石口服液中刺桐堿的含量具有方便、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為建立嶺南排石口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。挖掘名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方是振興中醫(yī)藥的重要途徑，嶺南排石口服液的研制，為中醫(yī)藥治療臨床多發(fā)結(jié)石癥提供了一種效高價(jià)廉、服用方便、毒副作用小的中藥制劑，為發(fā)掘開發(fā)名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方開辟了新途徑。