缺血性腦損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備及評(píng)價(jià)

張 雯，杜立達(dá)，宋俊科，杜冠華

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，藥物靶點(diǎn)研究與新藥篩選北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

腦卒中是人類(lèi)致死和致殘的主要病因之一，《美國(guó)心臟學(xué)會(huì)2020年心臟病和卒中統(tǒng)計(jì)報(bào)告》顯示，由于人口老齡化和風(fēng)險(xiǎn)因素的積累，卒中平均終生風(fēng)險(xiǎn)由1990年的22.8%增加至2016年的24.9%[1]?！吨袊?guó)心血管健康與疾病報(bào)告2020概要》推算我國(guó)腦卒中患病人數(shù)為1 300萬(wàn)，遠(yuǎn)高于冠心病和心力衰竭[2]。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型是研究人類(lèi)疾病病理機(jī)制、治療方法、藥物療效和藥理作用的重要條件，建立能夠反映人類(lèi)生理、病理和藥理特點(diǎn)，且重復(fù)性良好，指標(biāo)嚴(yán)格可控的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，對(duì)腦血管疾病的研究意義重大。在實(shí)際科研工作中，針對(duì)不同的研究?jī)?nèi)容，選擇合適的動(dòng)物模型，是實(shí)現(xiàn)研究目標(biāo)的重要保障。

1 常用腦缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型主要類(lèi)型

目前在臨床前實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的腦缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型種類(lèi)很多，根據(jù)不同的分類(lèi)方法，主要分為以下類(lèi)型。

1.1 根據(jù)缺血程度分類(lèi)根據(jù)腦缺血程度不同，可以分為急性腦缺血、慢性腦缺血、完全性腦缺血、局灶性腦缺血、低灌注性腦缺血、缺血/再灌注等。不同的模型可以反映人類(lèi)腦缺血的不同疾病特點(diǎn)，可以用于不同機(jī)制研究。一般對(duì)于卒中的研究，常用急性局灶性腦缺血或急性局灶性腦缺血/再灌注模型。

1.2 根據(jù)缺血部位分類(lèi)目前常用的腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ透鶕?jù)發(fā)生部位不同，可分為全腦缺血、彌散性腦缺血和局灶性腦缺血。全腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭饕糜诼匀毖芯浚毙匀X缺血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢杂糜趽p傷和保護(hù)機(jī)制的研究。局灶性缺血是研究腦卒中的主要模型，也是近年來(lái)研究最多的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，在缺血性腦卒中的臨床前研究中應(yīng)用廣泛。彌散性腦缺血主要用于慢性腔隙性腦缺血的研究，但制備方法仍有一定局限性。

2 腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷闹苽浞椒ê吞攸c(diǎn)

腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ头N類(lèi)很多，制備方法各有不同，有些模型制備簡(jiǎn)單，成功率高。有些模型制作過(guò)程復(fù)雜，操作要求高，影響因素多，本文將詳細(xì)說(shuō)明制備方法。

通過(guò)不同方式制備腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，達(dá)到腦部血流減少或中止的目的，常用方法可以分為血管阻斷法，如腦動(dòng)脈的結(jié)扎、夾閉或熔斷等；血管堵塞法，如人工血栓法、自體血栓法、物理栓塞法、電凝法等。由于具體模型與研究?jī)?nèi)容有關(guān)，制備方法也有明顯不同，主要根據(jù)研究目的進(jìn)行動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)，選擇適宜的模型制備方法。

2.1 全腦缺血全腦缺血可以分為急性全腦缺血和慢性全腦缺血(Tab 1)。

Tab 1 Methods and characteristics of wildly used animal models of cerebral ischemia

急性全腦缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型主要有小鼠斷頭處死法，小鼠窒息致死法，大鼠窒息致死法等，還有二血管、三血管和四血管閉塞法，這些腦缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型能夠模擬全腦急性腦缺血特點(diǎn)，但與臨床常見(jiàn)腦梗死(多為單一血管閉塞)病因和表現(xiàn)有較大差距，主要用于缺血病理機(jī)制研究和藥物作用研究。

慢性全腦缺血的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型包括頸總動(dòng)脈部分結(jié)扎制備的全腦低灌注模型，放血降低血容和灌注壓制備的全腦缺血模型等，在藥物作用機(jī)制研究方面有重要價(jià)值。

2.2 局灶性缺血局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ褪桥c人類(lèi)卒中的發(fā)生最為接近的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，包括永久性和短暫性?xún)煞N，后者模擬腦缺血/再灌注損傷。局灶性腦缺血模型常用于研究腦缺血損傷后的病理生理變化以及藥物作用機(jī)制，后文將全面介紹該模型。局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭饕ㄩ_(kāi)顱電凝法、光化學(xué)誘導(dǎo)法、微栓子阻斷法、電凝法、線(xiàn)栓法。

2.2.1開(kāi)顱電凝法 1981年，Tamura和Bederson采用開(kāi)顱法，手術(shù)暴露大腦中動(dòng)脈并阻斷中動(dòng)脈血流，在基底核和皮質(zhì)區(qū)形成恒定梗死灶[12-13]。該模型是在可視條件下對(duì)大腦中動(dòng)脈(MCA)進(jìn)行閉塞，缺血效果可靠，可導(dǎo)致皮質(zhì)與尾殼核同時(shí)栓塞。但開(kāi)顱創(chuàng)傷大，操作技術(shù)要求高，且難以實(shí)現(xiàn)再灌注，應(yīng)用較少。

2.2.2光化學(xué)和化學(xué)誘導(dǎo)法 Coyle在1982年及Waston在1985年均成功建立光化學(xué)法誘導(dǎo)腦皮質(zhì)梗死動(dòng)物模型[14-15]。光波照射光敏物質(zhì)，在血管內(nèi)引起光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血小板黏附聚集，進(jìn)而形成血栓。該模型與臨床腦血栓形成過(guò)程具有相似性，但毛細(xì)血管損傷所形成的血栓和人類(lèi)腦血栓的發(fā)生仍存在一定差異，且造成終末動(dòng)脈永久性閉塞，無(wú)法實(shí)現(xiàn)再灌注，影響觀(guān)察擴(kuò)血管藥療效。

2.2.3微栓子阻斷法 將同源血凝塊制備成微栓子懸液，經(jīng)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)進(jìn)入MCA，致同側(cè)腦區(qū)梗死。該方法創(chuàng)傷小，且類(lèi)似于人類(lèi)血栓的形成過(guò)程。但由于血凝塊栓子具有一定隨機(jī)性，腦組織缺血程度不一，梗死部位及梗死體積無(wú)法預(yù)測(cè)[16-17]。

2.2.4自體血栓血管內(nèi)形成法 分離大鼠CCA、ICA和頸外動(dòng)脈(ECA)，同時(shí)夾閉ECA，電擊CCA形成血管內(nèi)血栓。然后利用自身血流從頸總動(dòng)脈將血栓沖入頸內(nèi)動(dòng)脈。該模型利用動(dòng)物自身血液凝聚后形成的血栓造成局灶性腦缺血，更好地模擬了臨床上由于血小板聚集血栓形成阻斷腦血流導(dǎo)致腦缺血的發(fā)病過(guò)程，更適用于研究溶栓藥物和復(fù)雜機(jī)制治療局灶性腦缺血的藥物。動(dòng)物死亡率和腦缺血損傷嚴(yán)重程度與電凝時(shí)間和血栓夾碎程度密切相關(guān)[18-19]。

2.2.5線(xiàn)栓法 Koizumi和Zea-Longa等[20-21]用頂端燙成球形的尼龍線(xiàn)經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈插入，成功制成大腦中動(dòng)脈閉塞。該方法在不開(kāi)顱的情況下，將尼龍線(xiàn)自頸外動(dòng)脈導(dǎo)入直進(jìn)至頸內(nèi)動(dòng)脈的顱內(nèi)段MCA起始部，阻斷MCA血流，造成MCA供血區(qū)缺血，通過(guò)抽出尼龍線(xiàn)進(jìn)行再灌注。MCA閉塞效果較理想，缺血與再灌注時(shí)間亦能準(zhǔn)確控制。但是大鼠個(gè)體差異、線(xiàn)栓插入深度均會(huì)明顯影響模型的成功率。

2.3 多發(fā)性腦梗死和腔隙性腦梗死血管內(nèi)栓塞的塞子可以是空氣、浮石、血凝塊、玻璃球、石蠟、鐵粉、絲線(xiàn)、硅橡膠、尼龍線(xiàn)等，目前常用血凝塊和石蠟栓塞等。取無(wú)菌且自然干燥的同種大鼠血凝塊研碎過(guò)篩，制成混懸液，推注栓子鹽水混懸液，造成多灶性腦梗死模型[22-23]。腔隙性腦梗死由腦部深穿動(dòng)脈及其分支的特殊病變所致，Toshima等[24]通過(guò)在大鼠頸內(nèi)動(dòng)脈注入月桂酸鈉，制備腔隙性腦梗死模型。

3 腦缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的檢測(cè)指標(biāo)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備的目的是進(jìn)行科學(xué)研究，選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)指標(biāo)，可以評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的病理狀態(tài)，能夠通過(guò)模型觀(guān)察藥物作用和治療效果。因此，選擇合適的檢測(cè)指標(biāo)是實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡年P(guān)鍵。

3.1 自主運(yùn)動(dòng)行為評(píng)價(jià)采用計(jì)算機(jī)采集、記錄并分析動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)，分析動(dòng)物在各區(qū)域活動(dòng)軌跡、路程、時(shí)間等，用于定量評(píng)價(jià)腦缺血后功能損傷。神經(jīng)功能缺損評(píng)分，目前普遍使用的主要是Zea-Longa評(píng)分法和Bederson分級(jí)法[13，20]。

3.2 運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)，最早由Dunham和Miya建立[25]。用動(dòng)物在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間，衡量其運(yùn)動(dòng)功能，評(píng)估平衡和協(xié)調(diào)能力。平衡木實(shí)驗(yàn)，F(xiàn)eeney等[26]將走橫木實(shí)驗(yàn)作為判斷腦缺血?jiǎng)游镞\(yùn)動(dòng)整合性和協(xié)調(diào)性的指標(biāo)。伸爪試驗(yàn)，1986年Whishaw等[27]建立評(píng)價(jià)大鼠肢體運(yùn)動(dòng)功能的方法，通過(guò)分析動(dòng)物攝食過(guò)程，辨別肢體損傷與修復(fù)的差別。圓筒實(shí)驗(yàn)，將動(dòng)物置于透明圓筒中記錄其活動(dòng)，通過(guò)對(duì)探索過(guò)程中受重情況的分析評(píng)價(jià)前肢不對(duì)稱(chēng)性[28]。

3.3 學(xué)習(xí)記憶功能評(píng)價(jià)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的海馬神經(jīng)元對(duì)缺血缺氧損傷較敏感，且與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)，人類(lèi)腦卒中導(dǎo)致的海馬神經(jīng)元損傷會(huì)伴隨著認(rèn)知與記憶功能障礙，在腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭幸残枰疾靹?dòng)物的認(rèn)知、記憶功能。

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)訓(xùn)練后的動(dòng)物，利用空間記憶和視覺(jué)線(xiàn)索尋找水下平臺(tái)，全程記錄并分析動(dòng)物到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間、軌跡和路程。旋臂迷宮實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物依靠其空間感，以期耗費(fèi)最少精力，使用最短時(shí)間，最大限度獲得食物與水。被動(dòng)和主動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)，根據(jù)動(dòng)物進(jìn)入暗室錯(cuò)誤次數(shù)和避暗潛伏期，判斷其學(xué)習(xí)記憶能力。

缺血性腦損傷通常與運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)和認(rèn)知功能障礙有關(guān)，單一行為學(xué)測(cè)試不能充分反映神經(jīng)功能，常采用多種行為學(xué)測(cè)試，綜合評(píng)估動(dòng)物的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能、認(rèn)知和探索行為。

3.4 腦組織形態(tài)和功能的檢測(cè)腦梗死體積測(cè)定，腦梗死體積是反映抗腦缺血損傷藥物藥效最直接的指標(biāo)，梗死體積的大小，代表缺血的嚴(yán)重程度。病理檢測(cè)常用蘇木精-伊紅染色法全面觀(guān)察正常和病變組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。腦水腫百分比測(cè)定，評(píng)價(jià)腦缺血損傷后膠原組織的水腫程度。腦電圖分析，反映MCA供血區(qū)和非供血區(qū)的腦電圖變化，評(píng)估腦缺血的范圍和腦梗死的程度。局部腦血流量測(cè)定，測(cè)定MCA供血中心區(qū)缺血后各時(shí)間點(diǎn)腦血流變化。軟腦膜微循環(huán)觀(guān)察，通過(guò)測(cè)量微血管的管徑及血流速度，考察軟腦膜微循環(huán)血液的灌流狀況。

3.5 其他檢測(cè)指標(biāo)根據(jù)模型特點(diǎn)和研究目的，設(shè)計(jì)合適的檢測(cè)指標(biāo)，包括生理指標(biāo)、病理指標(biāo)、組織形態(tài)、分子生物學(xué)變化等。不同模型的特點(diǎn)及適宜的檢測(cè)指標(biāo)見(jiàn)Tab 2。

4 局灶性腦缺血的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和用途

4.1 常用制備方法2015年，本實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了自體血栓中動(dòng)脈阻塞法，仰臥位固定大鼠，鈍性分離血管組織和血管，分離CCA并置入血栓生成儀的血管電擊夾溝槽中，電流強(qiáng)度為1.00 mA，持續(xù)刺激225 s后將所形成的血栓用鈍性且表面光滑的鑷子夾碎后，利用自身血流，將血栓從CCA沖入ICA，沖入后立即用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈近心端15 min，然后打開(kāi)所有動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流。利用動(dòng)物自身血液凝聚后形成的血栓造成局灶性腦缺血，更好地模擬了臨床上由于血小板聚集血栓形成阻斷腦血流導(dǎo)致腦缺血的發(fā)病過(guò)程[18-19]。

線(xiàn)栓法，用頂端燙成球形的尼龍線(xiàn)經(jīng)ICA插入，制成MCA閉塞。仰臥位固定大鼠，頸正中線(xiàn)切口約2 cm，鈍性分離組織與血管，將尼龍線(xiàn)由ECA插入后導(dǎo)入ICA，松開(kāi)ICA夾，繼續(xù)將尼龍線(xiàn)插入至其顱內(nèi)段，自CCA分叉處插入的尼龍線(xiàn)長(zhǎng)約20 mm，阻斷MCA。再灌注時(shí)將線(xiàn)栓抽出，結(jié)扎ECA殘端，松開(kāi)CCA。本方法在不開(kāi)顱的情況下，將尼龍線(xiàn)自ECA導(dǎo)入進(jìn)至ICA的顱內(nèi)段MCA起始處，阻斷MCA血流，造成MCA供血區(qū)缺血，通過(guò)抽出尼龍線(xiàn)實(shí)現(xiàn)再灌注。

4.2 模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

4.2.1神經(jīng)功能缺損評(píng)分 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)反映了模型病理生理發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。腦缺血損傷發(fā)生后缺血半暗帶的病理發(fā)展在有限時(shí)間內(nèi)是可逆的，隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)，缺血中心區(qū)擴(kuò)大到半暗帶，病理?yè)p傷不可逆發(fā)展。目前，應(yīng)用最普遍的神經(jīng)癥狀評(píng)分方法是Zea-Longa評(píng)分法和Bederson分級(jí)法[13，20]。

對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，排除無(wú)癥狀及不能自發(fā)行走的動(dòng)物后，隨機(jī)分組，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。然而，Zausinger等[29]發(fā)現(xiàn)，大鼠腦缺血90 min后再灌注，48 h皮層梗死體積與分級(jí)評(píng)分存在相關(guān)性，72 h全腦梗死體積與分級(jí)評(píng)分存在相關(guān)性。因此，現(xiàn)有的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分尚不能全面反映腦缺血的生理病理狀態(tài)，不同種屬大鼠在相同損傷程度下其神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)也可能存在差異。

一般在線(xiàn)栓法制備局灶性腦缺血模型中，模型組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著升高，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)選取Longa評(píng)分達(dá)到2分或3分的動(dòng)物參加實(shí)驗(yàn)，剔除意識(shí)不清與無(wú)癥狀動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

4.2.2腦梗死體積 腦梗死體積是反映抗腦缺血損傷藥物藥效最直接的指標(biāo)，梗死體積的大小，代表缺血嚴(yán)重程度。在線(xiàn)栓法制備局灶性腦缺血模型中，模型組大鼠腦梗死體積顯著升高，缺血90 min再灌注24 h大鼠缺血腦半球出現(xiàn)梗死，梗死體積由27.39%變化到45.09%，低于20%說(shuō)明模型可能沒(méi)有成功，F(xiàn)ig 1。

Fig 1 Cerebral infarct after ischemia 90 min/reperfusion 24 h

經(jīng)過(guò)對(duì)近年來(lái)發(fā)表的帶有TTC染色的92篇文章的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，文獻(xiàn)中腦梗死體積差異很大。缺血/再灌注時(shí)間主要集中于缺血60、90、120 min，再灌注24 h,Fig 2。

采用相同的實(shí)驗(yàn)方法，得到梗死體積最高達(dá)73%，最低為19%。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中許多因素直接影響著實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果，包括大鼠個(gè)體差異、線(xiàn)栓插入深度均會(huì)明顯影響模型的成功率及梗死體積。除此之外，所用統(tǒng)計(jì)方法、切片厚度與統(tǒng)計(jì)片數(shù)、計(jì)算公式、是否校正水腫等均可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，甚至導(dǎo)致偏差。

在我們所統(tǒng)計(jì)的92篇文章中，所使用的統(tǒng)計(jì)軟件主要包括：Image-Pro Plus 6.0，ImageJ，Motic Med 6.0，NIH Image Analyzer，AutoCAD，PhotoShop CS4，Motic Med 6.0。文章展示的切片數(shù)從1～8片不等。所使用的計(jì)算方法包括：① 梗死體積/同側(cè)半球總體積。② 梗死體積/對(duì)側(cè)半球總體積。③ 梗死體積/全腦總體積。④ [對(duì)側(cè)半球總體積-(同側(cè)半球總體積-梗死體積)]/對(duì)側(cè)半球總體積。⑤ [梗死體積-(同側(cè)半球總體積-對(duì)側(cè)半球總體積)]/對(duì)側(cè)半球總體積。⑥ 測(cè)量的梗塞面積×(1-[(同側(cè)半球面積-對(duì)側(cè)半球面積)/對(duì)側(cè)半球面積])。⑦ E=(ΣVR-ΣVL)/(ΣVL+ΣVR)×100%計(jì)算水腫率(E)。ΣVR和ΣVL分別是右側(cè)(缺血)和左側(cè)(非缺血)半球的體積。使用以下等式計(jì)算背景：B=ΣVS/ΣVT×100%，其中ΣVS是假手術(shù)組中未染色的白質(zhì)的體積，ΣVT是總腦容量?？紤]到水腫和背景的影響，使用以下等式間接確定梗塞體積并表示為整個(gè)腦的百分比：I=[ΣVI×(1-E)/ΣVT×(1-B)]×100%，其中ΣVI是未用TTC染色的組織的體積，F(xiàn)ig 3。

Fig 2 Infarct volume distribution for ischemia 60，90，120 min/reperfusion 24 h

Fig 3 Cerebral blood flow changes

4.2.3腦水腫百分比 每只動(dòng)物的大腦在切片前稱(chēng)取濕重，染色后收集切片，于95 ℃干燥24 h至恒重，稱(chēng)取每只動(dòng)物大腦干重，比較各組動(dòng)物的腦含水量。在線(xiàn)栓法制備局灶性腦缺血模型中，模型組大鼠腦含水量升高，缺血90 min再灌注24 h缺血半球水腫程度增加21.6%到30.4%。

5.2.4測(cè)定大腦皮質(zhì)局部腦血流量(rCBF) 研究表明腦血流量隨缺血時(shí)間進(jìn)行性降低，各時(shí)間點(diǎn)差異有顯著性，回歸分析示rCBF與時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。在線(xiàn)栓法制備局灶性腦缺血模型中，插入線(xiàn)栓后腦血流顯著降低，與自身術(shù)前腦血流相比，降低60%到80%則認(rèn)為模型成功。

5 總結(jié)

近幾十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)腦缺血模型從動(dòng)物的選擇、模型的分類(lèi)及方法制備等方面進(jìn)行有益探索和不斷完善，明顯提高了模型的成功率和腦梗死灶的穩(wěn)定性，使得腦缺血模型制備日趨完善。在今后的研究中，不僅應(yīng)重視缺血損傷的可控性和重復(fù)性，嚴(yán)格控制各種干擾因素，減少其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，還應(yīng)從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、模型選擇、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)流程、評(píng)價(jià)指標(biāo)與測(cè)試等方面構(gòu)建一系列統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)體系，使得實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)流程等方面進(jìn)一步科學(xué)化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。

模擬人類(lèi)腦血管疾病的發(fā)病進(jìn)程，建立穩(wěn)定易重復(fù)，生理指標(biāo)嚴(yán)格可控的動(dòng)物模型，對(duì)腦血管病的研究具有重要意義，恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)指標(biāo)是研究過(guò)程的重要環(huán)節(jié)。目前仍存在一些問(wèn)題：①對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血不同階段未進(jìn)行深入研究，缺血后不同階段，由于損傷可逆、自我修復(fù)以及正常代償?shù)拇嬖冢绻捎幂^單一的神經(jīng)行為學(xué)缺損評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)，容易誤導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的產(chǎn)生。因此，腦缺血不同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)分別采用何種評(píng)價(jià)方式是亟須解決的問(wèn)題。②感覺(jué)運(yùn)動(dòng)評(píng)估方式對(duì)實(shí)驗(yàn)員的主觀(guān)能動(dòng)性，動(dòng)物自身的飲食和活潑度均有一定的要求。因此，如何更客觀(guān)、量化且操作性及重復(fù)性強(qiáng)的進(jìn)行評(píng)估，同樣有待解決。

腦缺血損傷后的評(píng)價(jià)體系正在逐步成熟，不同的評(píng)價(jià)方法以不同程度和形式考察大鼠腦缺血后多種類(lèi)型的行為改變，將行為學(xué)評(píng)分、學(xué)習(xí)記憶與腦梗死體積、病理學(xué)檢測(cè)進(jìn)行有效、合理地組合，不僅利于實(shí)驗(yàn)者的分析比較，更易于展現(xiàn)治療因素的優(yōu)勢(shì)。建立標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的動(dòng)物模型，以及信度、效度、反應(yīng)度和可行性較好的評(píng)價(jià)指標(biāo)令人期待。