馬齒莧多不飽和脂肪酸成分分析及對HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響

李冠文，王輝敏，楊金梅，陳 超，張娜郡，秦 楠，劉 星

（山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥與食品工程學(xué)院，山西榆次 030619）

非過量飲酒以及其他損害肝臟因素造成肝細(xì)胞脂肪沉積變性等特征的綜合病癥被稱之為非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）[1]。全球肥胖的流行顯著增加了NAFLD 的患病率，使NAFLD 成為西方國家最常見的慢性肝病病因，據(jù)統(tǒng)計(jì)肥胖成年人病發(fā)率已達(dá)到50.7%[2?3]，長此以往NAFLD 將會與糖尿病、高胰島素血癥、高血壓等病癥結(jié)合逐漸演變?yōu)橹拘愿窝祝瑥亩黾痈斡不?、門靜脈高壓癥以及肝癌等疾病高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[4?6]。近年來國內(nèi)外對NAFLD 的治療方式逐漸從對藥物的全部依賴轉(zhuǎn)變?yōu)檎{(diào)整飲食習(xí)慣[7?10]，有利于功能食品以及藥食同源中藥材的長遠(yuǎn)發(fā)展。

脂肪酸（fatty acid，F(xiàn)A）是具有長的碳?xì)滏満? 個羧基末端的有機(jī)化合物的總稱。自然界中約有70 多種不同種類的脂肪酸，其碳鏈長度范圍為C12～C18。按照脂肪酸碳鏈結(jié)構(gòu)中雙鍵數(shù)的多少可將其劃分為飽和脂肪酸（saturated fatty acid，SFA）、單不飽和脂肪酸（monounsaturated fatty acid，MUFA）和多不飽和脂肪酸PUFAs。近年來研究發(fā)現(xiàn)，PUFAs在抗炎、抗氧化、抗癌、調(diào)節(jié)血脂、增強(qiáng)免疫、改善記憶力以及促進(jìn)生長發(fā)育等方面具有顯著的效果[11?14]。石計(jì)朋[15]通過實(shí)驗(yàn)研究推測ω-3 系列PUFAs 可以通過激活PI3K/AKT/β-catenin 信號軸間接促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的增殖和遷移、抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，從而發(fā)揮對受損腦組織和神經(jīng)細(xì)胞的治療作用。PUFAs 同時具有抗炎和炎癥消退作用，陳英杰等[16?17]通過酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清中腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-6 等指標(biāo)判斷PUFAs 是否對重型顱腦損傷患者炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)細(xì)胞有影響，結(jié)果表明ω-3 系列PUFAs 可以減輕傷后發(fā)生炎癥反應(yīng)，減少神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元細(xì)胞損害，從而起到抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。Ayumi 等[18]研究認(rèn)為PUFAs具有抗癌、抗腫瘤作用是由于腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）中的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-9 在體內(nèi)外均會受到ω-3 系列PUFAs 的抑制造成的。胡慧蕓[19]認(rèn)為PUFAs 具有顯著的降血脂功效，并將實(shí)驗(yàn)室制備的PUFAs 軟膠囊通過動物試驗(yàn)研究進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)了PUFAs 可以顯著降低混合型高脂血癥大鼠的血脂水平、明顯減輕混合型高脂血癥大鼠的炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能分別與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因HMGR、PPARα、SREBP-1c 的表達(dá)有關(guān)、與調(diào)節(jié)驗(yàn)證信號通路AMPK/SIRT1/NF-κB 及VCAM-1 的表達(dá)有關(guān)。而馬齒莧作為藥食同源植物資源之一，性味酸寒，具有清熱解毒，涼血止血等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)作用研究也表明馬齒莧在抗炎、抗氧化、抗腫瘤等方面有顯著效果[20]，由于近年來國內(nèi)外學(xué)者對藥食同源馬齒莧中藥材中的脂肪酸成分研究較少以及國內(nèi)對PUFAs作用逐步重視，因此本試驗(yàn)基于國內(nèi)外各學(xué)者以及本實(shí)驗(yàn)室人員前期試驗(yàn)基礎(chǔ)對馬齒莧脂肪酸成分進(jìn)行深入創(chuàng)新研究。

本試驗(yàn)通過對比馬齒莧全草油和純化油脂肪酸成分相對含量，明確純化油的純化程度，并將純化油作用于油酸誘導(dǎo)成功的脂質(zhì)堆積肝癌細(xì)胞模型，在檢測血脂指標(biāo)HDL-C、LDL-C、TC、TG 水平變化后明確馬齒莧純化油對脂質(zhì)沉積的影響，進(jìn)而初探馬齒莧純化油中PUFAs 的降脂能力。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮馬齒莧全草 山東濱州種植基地；人肝癌細(xì)胞HepG2 上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司；MTT、HDLC、LDL-C、TC、TG 試劑盒 南京建成生物科技有限公司；石油醚、尿素、無水乙醇、異丙醇、鹽酸、無水硫酸鈉、正己烷、濃硫酸（以上試劑均為分析純）、甲醇（色譜純） 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；胰酶、優(yōu)級胎牛血清、DMED 高糖培養(yǎng)基、牛血清白蛋白（不含脂肪酸）、多聚甲醛固定液 北京索萊寶科技有限公司；蘇丹紅、油酸（分析純） 上海麥克林生化科技有限公司。

YM-828H 多功能加熱破壁料理機(jī) 中山市優(yōu)盟電器有限公司；SB25-120 超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；SY-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；GZX-9140MBE 電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；AR223CN 電子天平 奧豪斯儀器有限公司；Agilent Technologies 7890B/5977B 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀鄭州澤銘科技有限公司；BDS400 倒置生物顯微鏡重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司；SPECTRA MAX190酶標(biāo)儀 北京生原誠業(yè)科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 馬齒莧全草油的制備 將山東濱州種植基地的新鮮馬齒莧全草洗凈、破壁后適當(dāng)瀝干。準(zhǔn)確稱取10.00 g 左右瀝干物于平底燒瓶中，按照料液比1:22（m:V）加入60～90 ℃石油醚220 mL，并于超聲溫度70 ℃、超聲時間61 min、超聲功率500 W條件下進(jìn)行提取，提取液濃縮（比例為49:1，V:V）干燥恒重后即得馬齒莧全草油樣品[21]。

1.2.2 馬齒莧純化油的制備 準(zhǔn)確稱取12.00 g 尿素于60 ℃水浴條件下溶于120 mL 95%乙醇溶液中，即得樣液A。將樣液A 趁熱迅速置于1.00 g 馬齒莧全草油樣品中使樣品溶解，在60 ℃水浴條件下持續(xù)攪拌10 min 后冷卻至室溫，置于?20 ℃條件下進(jìn)行下一步結(jié)晶，6 h 后取出迅速抽濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后恒重，即得浸膏物。將浸膏物中加入5 mL 蒸餾水，用HCl 調(diào)節(jié)pH 至5～6 后加10 mL 石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗滌石油醚層直至尿素試紙檢測無尿素即可停止，無水硫酸鈉干燥4 h 后，即可得到馬齒莧純化油[21]。

1.2.3 馬齒莧脂肪酸純化前后組成分析

1.2.3.1 馬齒莧全草油、純化油樣品的甲酯化 稱量馬齒莧全草油、純化油樣品各100 mg，向其中各依次加入3 mL 正己烷和2 mL 5% H2SO4-甲醇溶液，搖勻3 min 后置于60 ℃條件下水浴30 min，再次各加入3 mL 蒸餾水，搖勻2 min，等分層清晰后取上清液，經(jīng)0.45 μm 有機(jī)濾膜過濾后備用。

1.2.3.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測條件 GC 條件：PEG-20M 彈性石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 m×0.25 μm，載氣為N2，載氣流速為0.8 mL·min?1，程序升溫從180 ℃開始（保持2 min），以3 ℃·min?1升溫到230 ℃，保持10 min，進(jìn)樣口溫度250 ℃，出樣口溫度200 ℃，檢測電壓350 V，不分流進(jìn)樣。

MS 條件：EI 離子源，電子能量70 eV，發(fā)射電流200 μA，掃描范圍20～550 amu，全離子掃描。

1.2.4 馬齒莧純化油對HepG2 細(xì)胞增殖和脂質(zhì)堆積的影響

1.2.4.1 不同馬齒莧純化油濃度對HepG2 細(xì)胞存活率的影響 將培養(yǎng)的HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于96 孔板中，使每孔細(xì)胞數(shù)量大致為1×104個后，置于CO2培養(yǎng)箱貼壁培養(yǎng)24 h，各個孔分別加入100 μL 用5% BSA 配制的濃度分別為0、10、20、40、60、80、100、200、400、800、1600 μg/mL 的馬齒莧純化油，最后用完全培養(yǎng)基補(bǔ)足體積，使得每孔總體積為200 μL，各給藥濃度設(shè)置5 個重復(fù)。置于CO2培養(yǎng)箱中作用24 h 后，參照MTT 試劑盒用法測定不同馬齒莧純化油濃度所對應(yīng)的細(xì)胞存活率。

1.2.4.2 油紅O 染色法觀察油酸誘導(dǎo)的HepG2 細(xì)胞內(nèi)脂滴形成情況 將正常培養(yǎng)的HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于6 孔板中，加入培養(yǎng)基正常培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)液并用PBS 清洗。將6 孔板分為兩組：0.5%不含脂肪酸的牛血清白蛋白（fatty acid-free bovine serum albumin，BSA）組和0.5 mmol/L 油酸（使用0.5% BSA 配制而成）組，各設(shè)置3 個復(fù)孔。各孔板中加入對應(yīng)組別溶液3 mL，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。取出6 孔板棄去培養(yǎng)液，用PBS 清洗2 遍后每孔加入2 mL 4%多聚甲醛細(xì)胞固定液固定30 min。固定結(jié)束后棄去固定液，用PBS 清洗2 遍，靜置30 s，再向每孔加入2 mL 現(xiàn)配的60%異丙醇滴洗20～30 s，棄去異丙醇后靜置1 min。之后每孔加入油紅O 染色液（油紅原液:蒸餾水=3:2，V:V）2 mL，密閉染色20 min 后將染色液棄去，加入2 mL 60%異丙醇分化10 s，靜置1 min，再加入PBS 清洗2 遍，各孔再加入3 mL PBS 即可置于倒置顯微鏡下觀察。

1.2.4.3 造模后不同組別細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo)水平變化情況 將正常培養(yǎng)的HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于96 孔板中，置于CO2培養(yǎng)箱貼壁培養(yǎng)24 h，并將接種細(xì)胞的孔分為5 組（每組設(shè)置5 個重復(fù)）：對照組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組。造模：對照組中加入0.5% BSA 溶液200 μL，其余組別各加入200 μL 0.5 mmol/L 的油酸進(jìn)行誘導(dǎo)造模，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。給藥：取出細(xì)胞后棄去溶液并用PBS 清洗，在對照組和模型組中各加入0.5%BSA 溶液200 μL，低、中、高劑量組分別加入60、80、100 μg/mL 的馬齒莧純化油各200 μL，置于CO2培養(yǎng)箱中作用24 h 后取出，并參照HDL-C、LDL-C、TC、TG 各試劑盒說明書進(jìn)行濃度測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

各組數(shù)據(jù)均采用Graphpad Prism V6.01 軟件進(jìn)行分析并通過t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬齒莧脂肪酸純化前后成分對比

對馬齒莧脂肪酸成分進(jìn)行分析有利于掌握每種成分的相對含量，且可以明確富集純化的程度，從而得到馬齒莧脂肪酸富集前后PUFAs 的純度變化。由表1 脂肪酸成分分析表可以得知，馬齒莧全草油中含有的PUFAs 相對含量為27.6104%，PUFAs 種類主要為亞油酸和α-亞麻酸。除PUFAs 之外還有SFA：月桂酸、肉豆蔻酸、十五碳酸、棕櫚酸、花生酸、十七碳酸、硬脂酸、二十二碳酸、二十三碳酸和二十四碳酸共10 種，相對含量總和為67.1861%；MUFA：棕櫚油酸和油酸共兩種，相對含量總和為5.2035%。而馬齒莧純化油中的PUFAs 相對含量高達(dá)73.9015%，其中的PUFAs 種類除亞油酸和α-亞麻酸外還增添了γ-亞麻酸，在全草油中未檢測出此物質(zhì)的原因可能是全草油中γ-亞麻酸含量低于儀器檢測下限，而純化后馬齒莧純化油中的γ-亞麻酸濃度明顯升高，高于檢測下限使得此物質(zhì)被檢出。而且馬齒莧純化油中SFA 相對含量總和為18.7997%，MUFA 相對含量總和為7.2988%，與馬齒莧全草油相比，除MUFA 中的油酸外，馬齒莧純化油中各SFA以及MUFA 相對含量均有不同程度降低，且馬齒莧純化油中已經(jīng)無二十三碳酸出現(xiàn)。因此，由表1 可以得出結(jié)論：馬齒莧純化油PUFAs 純度（73.9015%）高于全草油PUFAs 純度（27.6104%），且高出46.2911%，純化后純度基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期設(shè)想，因此可以純化油進(jìn)行后續(xù)PUFAs 的體外降脂作用研究。

表1 馬齒莧脂肪酸成分含量分析Table 1 Analysis of fatty acid composition in Portulaca oleracea

2.2 不同馬齒莧純化油濃度對細(xì)胞存活率的影響

不同給藥濃度對人肝癌HepG2 細(xì)胞有一定的影響，在一定程度上可能對細(xì)胞造成毒性作用，因此本試驗(yàn)將采用MTT 法考察不同馬齒莧純化油濃度對細(xì)胞存活率的影響，從而確定適宜細(xì)胞生長的純化油濃度，避免在后續(xù)試驗(yàn)過程中濃度太高對細(xì)胞造成毒性作用。如圖1 所示，不同濃度組別與對照組相比細(xì)胞存活率均極顯著降低，當(dāng)馬齒莧純化油濃度為0～10 μg/mL 時，細(xì)胞存活率由100%±1.61%緩慢下降為88.57%±2.88%，濃度在20～100 μg/mL 內(nèi)時，存活率由86.11%±7.65%緩慢下降為78.89%±3.93%，而當(dāng)純化油濃度處于200～1600 μg/mL 時，細(xì)胞存活率急劇下降，由63.50%±1.72%下降至最低點(diǎn)20.90%±4.87%。結(jié)果表明，不同濃度馬齒莧純化油對細(xì)胞存活率影響不同，10～60 μg/mL 純化油濃度范圍內(nèi)雖然細(xì)胞存活率較高，但是此范圍內(nèi)細(xì)胞存活率波動幅度不如60～100 μg/mL 濃度范圍內(nèi)波動幅度穩(wěn)定，為排除其他因素干擾試驗(yàn)最終結(jié)果且綜合考慮細(xì)胞存活率在80%左右以及細(xì)胞存活率穩(wěn)定性較好等情況，本試驗(yàn)選用純化油濃度在60～100 μg/mL左右范圍進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖1 不同馬齒莧純化油濃度對細(xì)胞存活率的影響Fig.1 Effect of different Portulaca oleracea purified oil concentration on cell viability

2.3 油紅O 染色法觀察油酸誘導(dǎo)的HepG2 細(xì)胞內(nèi)脂滴形成結(jié)果

油紅O 為脂溶性染料，在脂肪中溶解性較強(qiáng)，可特異性與細(xì)胞以及動物組織內(nèi)TG 等中性脂肪著色，因此本試驗(yàn)采用油紅O 染色法來判斷細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型的建立情況。本試驗(yàn)參照張蕾等[22]的方法采用0.5 mmol/L 油酸誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞脂肪變性模型。由圖2 可知，經(jīng)過油紅O 染色后對照組的HepG2 細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則形狀且細(xì)胞邊緣出現(xiàn)鮮少的粉色脂滴。與對照組相比，模型組細(xì)胞在視野范圍內(nèi)可大致觀察到細(xì)胞的形態(tài)基本保持正常，并且在細(xì)胞外側(cè)呈現(xiàn)大量紅色粒狀脂滴。表明使用0.5 mmol/L油酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性造模成功，可以采用此油酸濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖2 對照組和模型組細(xì)胞油紅 O 染色情況（40×）Fig.2 Oil red O staining of control group and model group cells (40×)

2.4 造模后不同組別細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo)水平變化結(jié)果

脂肪是構(gòu)成身體細(xì)胞的重要成分之一，在人體腦神經(jīng)、肝臟、腎臟等重要器官中含有很多脂肪。本試驗(yàn)選用HepG2 肝癌細(xì)胞進(jìn)行脂質(zhì)堆積模型的建造而非選用其他脂肪細(xì)胞的原因如下：肝臟為HDLC、LDL-C、TC、TG 合成的重要器官；建造脂肪變性細(xì)胞模型時大部分學(xué)者均以HepG2 肝癌細(xì)胞作為對象[22?23]。

本試驗(yàn)為了解不同濃度的馬齒莧純化油對HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積的影響，在明確純化油濃度范圍為60～100 μg/mL 后，將馬齒莧純化油濃度劃分為低、中、高劑量（即60、80、100 μg/mL）進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo)HDL-C、LDL-C、TC 以及TG 濃度的測定。

HDL-C 為強(qiáng)大的血管擴(kuò)張劑，人體內(nèi)此濃度的升高有利于預(yù)防冠心病等發(fā)生，對心血管具有保護(hù)作用[24]。由表2 可知，與對照組相比，模型組HDLC 濃度由0.2330 mmol/L 急劇降為0.0100 mmol/L（P<0.01），而LDL-C、TC、TG 濃度均有極顯著提高（P<0.01），再次證實(shí)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型被成功建立。同時隨著給藥濃度的升高，實(shí)驗(yàn)組HDLC 濃度由0.0100 mmol/L 逐漸升高到0.1754 mmol/L（低劑量組）、0.2178 mmol/L（中劑量組）以及0.4325 mmol/L（高劑量組），且均具有極顯著差異（P<0.01），初步表明了馬齒莧純化油中的PUFAs 可以促進(jìn)HDL-C 合成，此結(jié)果與Xie 等[25]學(xué)者所得結(jié)論“PUFAs 可通過調(diào)節(jié)參與肝HDL-C 合成的關(guān)鍵基因、蛋白和mRNA 表達(dá)促進(jìn)HDL-C 合成”相一致。

表2 HepG2 細(xì)胞內(nèi)HDL-C、LDL-C、TC、TG 濃度結(jié)果Table 2 Results of HDL-C,LDL-C,TC and TG in HepG2 cells

LDL-C 是一種運(yùn)送血液中脂類的一種脂蛋白顆粒，它可以將脂類物質(zhì)從肝臟運(yùn)送至血管內(nèi)皮細(xì)胞中從而有效減少臟器內(nèi)脂質(zhì)堆積，但是LDL-C 過高會導(dǎo)致過量脂類被運(yùn)送后沉積于血管內(nèi)皮細(xì)胞造成動脈粥樣硬化等疾病，因此適量的LDL-C 可以有效降低冠心病、血栓等心腦血管疾病發(fā)生率[24,26]。由表2結(jié)果可以得出：與模型組相比，高劑量組LDL-C 濃度極顯著降低（P<0.01），其余組別與模型組相比濃度無顯著性差異；而與對照組相比，中、高劑量組LDLC 濃度無顯著差異。結(jié)果表明高劑量馬齒莧純化油可以通過顯著降低LDL-C 濃度緩解細(xì)胞脂質(zhì)堆積作用，從而使細(xì)胞恢復(fù)正常生理活動。

TC 是人體血液中所有脂蛋白中所含膽固醇的總和，TC 與人類冠心病、腦卒中、動脈粥樣硬化等疾病息息相關(guān)，TC 濃度的減少表明人體內(nèi)膽固醇堆積較少，一定程度上此物質(zhì)的降低有利于減少脂質(zhì)堆積從而達(dá)到降血脂作用。由表2 可知，中、高劑量組馬齒莧純化油可通過極顯著降低模型組TC 濃度來緩解脂質(zhì)堆積作用（P<0.01），但中、高劑量組給藥后的TC 濃度極顯著高于對照組（P<0.01）。結(jié)果表明中、高劑量馬齒莧純化油給藥后雖可以緩解細(xì)胞脂質(zhì)堆積但卻無法達(dá)到HepG2 細(xì)胞正常TG 濃度水平，猜測可能是給藥時間太短造成的。

TG 為人體供能源之一，此物質(zhì)在肝臟代謝后可被人體吸收成為營養(yǎng)物質(zhì)，但過多的TG 在體內(nèi)聚集會造成高脂血癥、非酒精性脂肪肝等，因此適量的TG 可增加人體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，從而保障人體內(nèi)分泌平衡[27]。從表2 可以看出，低、中、高劑量組TG 濃度與模型組相比均呈現(xiàn)出極顯著降低現(xiàn)象（P<0.01）且高劑量組TC 濃度與對照組濃度相比無顯著變化，證實(shí)馬齒莧純化油中PUFAs 可以通過此條途徑緩解模型組脂質(zhì)堆積現(xiàn)象，且高劑量純化油給藥后可以使細(xì)胞恢復(fù)至原始TG 濃度水平。

綜上所述，高劑量組（100 μg/mL）馬齒莧純化油濃度對各項(xiàng)血脂指標(biāo)均有極顯著影響，且與對照組正常HepG2 細(xì)胞內(nèi)TG、LDL-C 濃度相比無顯著變化，因此可以認(rèn)為此濃度的馬齒莧純化油對肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積具有較好的緩解效果。

3 討論與結(jié)論

經(jīng)過本試驗(yàn)對馬齒莧全草油和純化油脂肪酸成分的對比，發(fā)現(xiàn)馬齒莧全草油中PUFAs 相對含量為27.6104%，經(jīng)富集純化后的馬齒莧純化油中的PUFAs含量高達(dá)73.9015%，表明尿素包合法富集純化馬齒莧全草油是有顯著效果的。而敬思群等[28]試驗(yàn)結(jié)果表明尿素包合法純化馬齒莧全草油后PUFAs 含量可由68.12%升高到91.35%，本試驗(yàn)結(jié)果PUFAs 含量73.9015% <91.35%，造成此現(xiàn)象的原因可能是本試驗(yàn)耗材選用新鮮馬齒莧而非馬齒莧干藥材；選用馬齒莧的產(chǎn)地不同[29]；提取馬齒莧全草中PUFAs 時所用溶劑、技術(shù)不同造成的[30?31]。將馬齒莧純化油應(yīng)用于HepG2 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)經(jīng)100 μg/mL 馬齒莧純化油干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)HDL-C、LDL-C、TC、TG 濃度與模型組相比均有顯著變化，其中HDL-C 濃度顯著升高，其余濃度顯著降低，初步表明馬齒莧純化油對脂質(zhì)堆積具有緩解作用，為下一步深入研究降脂機(jī)制等的試驗(yàn)安排奠定了較好的實(shí)踐基礎(chǔ)。