五味子藤總木脂素抗氧化活性研究

喬巍，郭娜，張穎智，崔玉海，魏淑梅，接偉光*

（1.黑龍江東方學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150066；2.哈爾濱首智生物技術(shù)有限公司，黑龍江哈爾濱 150016）

五味子（Schisandra chinensis）作為一味傳統(tǒng)中藥材，主要入藥部位是其成熟果實(shí)。木脂素是廣泛分布在植物中的小分子量次生代謝產(chǎn)物，是五味子主要的活性物質(zhì)，具有抗氧化、保肝、抗炎等作用。北五味子藤莖是五味子的干燥藤莖，經(jīng)證實(shí)，五味子藤莖中存在有效成分——木脂素，可發(fā)揮與其果實(shí)相似的藥理作用。

抗氧化功能評(píng)價(jià)主要包括體內(nèi)評(píng)價(jià)和體外評(píng)價(jià)。體外評(píng)價(jià)包括化學(xué)評(píng)價(jià)法和生物活性評(píng)價(jià)法，且已經(jīng)形成系統(tǒng)的體系?；瘜W(xué)評(píng)價(jià)法以其原理簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)廣泛應(yīng)用于抗氧化活性物質(zhì)的初篩階段，主要包括體外總抗氧化能力測(cè)定法（T-AOC）、清除各類活性氧自由基法（·OH、·O2-）、清除自由基法（DPPH法、ABTS法、ORAC法）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料及目的，本文選用化學(xué)評(píng)價(jià)法中具有代表性的總抗氧化能力試劑盒及對(duì)超氧陰離子自由基清除效果兩種方法評(píng)價(jià)五味子藤總木脂素抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 儀器

BS124S分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.1.2 試劑與材料

95%乙醇，分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒，鄭州和成新材料科技有限公司；VC對(duì)照品（批號(hào)：O19EB100374）、焦性沒(méi)食子酸（批號(hào)：C14A9C58726），上海源葉生物科技有限公司；三羥甲基氨基甲烷（批號(hào)：2020/11），北京博奧拓達(dá)科技有限公司。

五味子藤總木脂素固形物：原料為五味子藤，以95%乙醇為提取溶劑，通過(guò)加熱回流法在料液比1∶10、提取次數(shù)3次、提取時(shí)間5 h條件下提取制得粗提液，再經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂在上樣濃度1.5 mg/mL、吸附速率2 BV/h、上樣量6 BV、95%濃度乙醇洗脫、洗脫速率2 BV/h、洗脫劑用量8 BV條件下純化后干燥制得（BV為樹(shù)脂床體積）。

1.2 方法

1.2.1 原理

（1）總抗氧化能力

Fe3+可以被樣品中的抗氧化物質(zhì)還原成Fe2+，F(xiàn)e2+可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡(luò)合物，通過(guò)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定[1-2]。

（2）超氧陰離子自由基清除力

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化反應(yīng)，能產(chǎn)生穩(wěn)定濃度的·O2-和有色中間產(chǎn)物。由于自氧化的速率與·O2-的濃度相關(guān)，消除·O2-則抑制自氧化反應(yīng)，阻止氧化產(chǎn)物的積累，因此可以通過(guò)測(cè)定某一波長(zhǎng)吸光度值的線性積累評(píng)價(jià)受試樣品清除·O2-的能力[2-5]。

1.2.2 T-AOC測(cè)定

將總木脂素固形物配制成濃度為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，取上清液0.1 mL作為供試品溶液。配制濃度0.2 mg/mL的VC溶液作為對(duì)照品溶液。

按照T-AOC試劑盒（比色法）操作步驟，采用紫外分光光度法，在520 nm處測(cè)定各溶液吸光度值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。以總抗氧化能力單位（U）為指標(biāo)計(jì)算各濃度供試品溶液和對(duì)照品溶液的總抗氧化能力，如公式（1）。

式中，ODt和ODc分別為試劑盒中測(cè)定管和對(duì)照管吸光度；V1和V2分別為配置溶液總量和取樣量，mL；f為稀釋倍數(shù)；TA為總抗氧化能力，U/mg。

1.2.3 超氧陰離子自由基清除力測(cè)定

（1）分別標(biāo)記空白管、對(duì)照管、VC對(duì)照管和0.05 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL的3個(gè)濃度樣品管。空白管和對(duì)照管中加入4 mL蒸餾水，VC對(duì)照管加入0.2 mg/mL的VC對(duì)照品4 mL，樣品組各加入對(duì)應(yīng)濃度的4 mL樣品溶液。（2）向（1）中各管加入0.1 mol/L的Tris-HCl緩沖溶液（pH=8.2）4.5 mL，25 ℃水浴20 min。（3）空白管加入0.5 mL蒸餾水，其余各管加入3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.5 mL，充分振搖后立即測(cè)定320 nm處吸光度值，以空白管調(diào)零。每30 s測(cè)量1次，共10次，記錄時(shí)間和對(duì)應(yīng)的吸光度值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。（4）以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)繪制曲線，得回歸方程，直線斜率V為吸收速率。抑制率IC的計(jì)算方法如公式（2）所示。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行分析處理，P＜0.05為差異顯著，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 五味子藤總木脂素總抗氧化能力

五味子藤總木脂素總抗氧化能力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，總抗氧化活性呈升高趨勢(shì)，各濃度的抗氧化活性具有顯著差異；與VC比較，五味子藤木脂素的抗氧化值約是同等濃度VC的1/5。

表1 五味子藤木脂素總抗氧化能力測(cè)試結(jié)果

2.2 五味子藤總木脂素對(duì)超氧陰離子自由基清除作用

五味子藤總木脂素對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用見(jiàn)表2。由表2可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，對(duì)鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子自由基的抑制作用呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，各濃度間抑制率具有顯著差異；同等濃度下，五味子藤木脂素固形物對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力約是VC的1/4。

表2 超氧陰離子自由基清除效果匯總

3 結(jié)論

按照總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒（比色法）測(cè)定，五味子藤總木脂素固形物總抗氧化值約是同等濃度下VC的1/5；對(duì)超氧陰離子自由基的抑制作用約是同等濃度下VC的1/4，五味子藤總木脂素固形物具有一定的抗氧化活性。