不同添加劑對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能、免疫及腸道健康的影響

戴晉軍，廖燦青，2，覃先武，胡駿鵬，黃鑫，龔發(fā)源

（1.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 443003；2.長(zhǎng)江大學(xué)，湖北荊州 434023）

由于促生長(zhǎng)類(lèi)抗生素不規(guī)范和不科學(xué)使用，其所引起的抗生素殘留、細(xì)菌耐藥性等食品安全風(fēng)險(xiǎn)日益凸顯，2020 年7月，我國(guó)禁止在飼料中添加促生長(zhǎng)類(lèi)抗生素，因此，尋找“綠色、高效、無(wú)副作用” 的抗生素替代品成為畜牧行業(yè)的研究熱點(diǎn)。結(jié)合促生長(zhǎng)類(lèi)抗生素的作用機(jī)理，即預(yù)防疾病、提高飼料消化利用率和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，目前眾多研究開(kāi)始聚焦到通過(guò)調(diào)控動(dòng)物腸道健康以達(dá)到相應(yīng)的效果，在這方面益生菌、益生元及酶制劑類(lèi)等產(chǎn)品被廣泛關(guān)注。

益生菌作為活性微生物或培養(yǎng)物，能夠直接調(diào)控動(dòng)物腸道微生態(tài)菌群平衡，通過(guò)微生物本身或其代謝物達(dá)到預(yù)防腸道疾病、促進(jìn)消化和提高生長(zhǎng)性能等效果。目前在動(dòng)物養(yǎng)殖領(lǐng)域應(yīng)用較廣泛的益生菌主要包括：芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等。其中，丁酸梭菌（Clostridium butyricum），又名酪酸梭菌，屬于一種厭氧的革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，因其能形成內(nèi)生芽孢，具有較好的抗逆性，耐胃酸、耐膽鹽和耐高溫等優(yōu)勢(shì)成為目前首選的外源添加益生菌。

益生元包括多種物質(zhì)，如含氧多糖或寡糖、輔酶、某些氨基酸和維生素等，但現(xiàn)在研究和應(yīng)用較多的是寡糖類(lèi)物質(zhì)。其中釀酒酵母細(xì)胞壁多糖源于釀酒酵母，是釀酒酵母經(jīng)液體發(fā)酵后得到的菌體，再經(jīng)自溶或外源酶催化水解，分離獲得的產(chǎn)品，主要多糖成分為甘露聚糖、β-1，3/1，6-葡聚糖。研究發(fā)現(xiàn)釀酒酵母細(xì)胞壁可通過(guò)提升免疫、改善腸道菌群、吸附霉菌毒素或病原菌等強(qiáng)化動(dòng)物免疫功能。

酶制劑在畜牧養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用，主要是補(bǔ)充家禽、家畜體內(nèi)消化道酶的自身供應(yīng)不足，同時(shí)消除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)化率。隨著研究深入和認(rèn)知發(fā)展，關(guān)于飼用酶制劑的研究和應(yīng)用已經(jīng)由內(nèi)源酶延伸至外源酶。而葡萄糖氧化酶作為動(dòng)物體內(nèi)不能自主合成的外源酶，是目前市面上應(yīng)用比較廣泛且認(rèn)可度較高的酶制劑之一。葡萄糖氧化酶在體內(nèi)通過(guò)催化葡萄糖的氧化反應(yīng)，最終生成葡萄糖醛酸和過(guò)氧化氫，通過(guò)一系列的酶促反應(yīng)，起到保健腸道、抗氧化、減少霉菌毒素癥狀等作用，能夠達(dá)到減少和部分代替抗生素藥物的效果。

本研究旨在考察不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能、免疫及腸道微生物的影響，為科學(xué)、高效的抗生素替代方案及多種功能性添加劑組合在肉雞生產(chǎn)養(yǎng)殖中的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 釀酒酵母細(xì)胞壁（安琪酵母生產(chǎn)，粗蛋白質(zhì)22.5%，β-葡聚糖26.9%，甘露聚糖27.8%）。丁酸梭菌制劑（市場(chǎng)收集，丁酸梭菌含量≥10 億CFU/g）。葡萄糖氧化酶制劑（市場(chǎng)收集，葡萄糖氧化酶活力≥2000 U/g）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 選擇1 日齡科寶白羽肉雞480羽，隨機(jī)分為4 個(gè)處理組，每處理組6 重復(fù)，每重復(fù)20只，各組間試驗(yàn)雞的平均體重差異不顯著（P ＞0.05）。試驗(yàn)分組如表1，基礎(chǔ)日糧配方參考NY/T 33-2004，分為兩階段日糧，且不含任何促生長(zhǎng)抗生素類(lèi)飼料添加劑，具體飼料指標(biāo)如表2。試驗(yàn)時(shí)間2021 年5～6月，試驗(yàn)周期42 d。試驗(yàn)期間飼養(yǎng)管理按常規(guī)進(jìn)行，養(yǎng)殖條件為地面平養(yǎng)，飼料料型為商品料粉碎后的粉料。按照肉雞常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫和管理，自由采食和飲水，采用24 h 光照制。

表1 試驗(yàn)處理與設(shè)計(jì)

表2 白羽肉雞飼料的主要指標(biāo) %

1.3 考察指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo) 每個(gè)試驗(yàn)階段（21、42 d）結(jié)束前，禁食（自由飲水）12 h 后稱(chēng)重，計(jì)算1～21、22～ 42 d 的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）和成活率。

平均日增重（ADG）：以重復(fù)為單位，飼養(yǎng)試驗(yàn)開(kāi)始前和結(jié)束后分別稱(chēng)重，稱(chēng)重前禁食12 h，計(jì)算每個(gè)重復(fù)每只雞的平均日增重。平均日采食量（ADFI）：試驗(yàn)開(kāi)始后，記錄每天的投料量和每天的剩料量，死亡雞只，計(jì)算每個(gè)重復(fù)每只雞的平均日采食量。耗料增重比（F/G）：由每個(gè)重復(fù)的總耗料量和總增重計(jì)算得出每個(gè)重復(fù)的平均料重比。

1.3.2 免疫器官指標(biāo) 在21 d 和42 d 屠宰前禁食12 h，僅供飲水。以重復(fù)為單位稱(chēng)取各處理組體重，選取3 只與平均體重接近的試雞用于屠宰試驗(yàn)。取樣按照家禽屠宰測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，分離胸腺、脾臟、法氏囊稱(chēng)重與體重作比較。所得比值即為胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。

1.3.3 血清新城疫抗體指標(biāo) 42 d 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)處理每個(gè)重復(fù)3 只使用無(wú)抗凝劑采血管采血，4000 r/min 離心10 min 分離血清，用于檢測(cè)新城疫抗體滴度，禽流感抗體指標(biāo)采用高致病性禽流感診斷技術(shù)血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）（GB/T18936-2003）測(cè)定。

1.3.4 腸道微生物 42 d 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，屠宰過(guò)程中在潔凈條件下采集回腸和盲腸中食糜樣品用于測(cè)定腸道微生物菌群（常規(guī)培養(yǎng)法）。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行預(yù)處理，以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件中one-way ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan 氏多重比較法分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響 肉雞生長(zhǎng)性能數(shù)據(jù)如表3 所示，從42 日齡平均出欄重分析2 組＞1 組＞4 組＞3組，日糧中添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）對(duì)肉雞出欄重提升效果最佳，較對(duì)照組（1 組）提高7.0%。從全程1～ 42 d 的料肉比（F/G）分析4 組<3 組<2 組<1組，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）較空白對(duì)照組（1 組）降低0.6%，但差異不顯著。

表3 不同飼料添加劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同飼料添加劑對(duì)42 d 肉雞免疫指標(biāo)的影響 如表4 所示，各組42 d 肉雞免疫器官指數(shù)的差異并不顯著。各組血清抗體滴度水平差異不顯著，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）的血清新城疫抗體水平最高。

表4 不同飼料添加劑對(duì)42 d 肉雞免疫指標(biāo)的影響

2.3 不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞腸道微生物的影響 如表5 所示，各試驗(yàn)組腸道內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量均低于對(duì)照組，其中添加200 g/t 丁酸梭菌（3組）對(duì)于腸道大腸桿菌和沙門(mén)氏菌抑制作用最顯著，添加300 g/t 釀酒酵母細(xì)胞壁（2 組）效果次之。

表5 不同飼料添加劑對(duì)42 d 肉雞腸道微生物的影響 lg cfu/g

3 討論

3.1 不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響 平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F/G）能夠反映動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，飼料中添加功能性飼料添加劑的最主要目的之一就是提高其生長(zhǎng)性能。目前包括釀酒酵母細(xì)胞壁、丁酸梭菌、葡萄糖氧化酶在內(nèi)的飼料添加劑在提升肉雞生長(zhǎng)性能方面研究眾多。Pascual 等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加200～ 500 ppm 酵母細(xì)胞壁對(duì)育雛期的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著改善作用，但隨著養(yǎng)殖周期延長(zhǎng)，育成期肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和出欄重均顯著增加；管秀界等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.5～ 10 kg/t 酵母細(xì)胞壁對(duì)21 日齡肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但提高了42 日齡肉雞的平均體重。趙強(qiáng)等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加100～600 g/t 的丁酸梭菌，肉雞ADFI 和ADG 較對(duì)照組有一定提升，但是差異不顯著，且隨著丁酸梭菌添加量增加而呈下降趨勢(shì)，耗料增重比也有降低趨勢(shì)；鄭愛(ài)娟等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加丁酸梭菌未顯著影響肉雞21 日齡和42 日齡體重、1～ 21日齡平均日增重和料重比，與無(wú)抗對(duì)照組相比，飼糧添加丁酸梭菌極顯著降低了1～ 21 日齡肉雞平均日采食量；徐明霞（2021）研究表明飼糧中添加丁酸梭菌可極顯著提高肉雞平均日增重，其中日糧添加600 g/t 丁酸梭菌組與抗生素組相比差異顯著。崔細(xì)鵬等（2018）研究表明，在日糧中添加葡萄糖氧化酶能夠顯著的提高白羽肉仔雞全期日增重，降低料肉比；王洪軍（2019）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加1000 U/g 葡萄糖氧化酶，與抗生素組相比可顯著降低1～21、21～42 d 肉雞的料肉比；郭玉光等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，前期日糧（0～ 21 d）添加150 g/t 葡萄糖氧化酶，后期日糧（21～ 42 d）添加100 g/t 葡萄糖氧化酶能夠顯著提高肉雞階段體重和平均日增重，且提升效果優(yōu)于抗生素組。在本試驗(yàn)研究中，不同類(lèi)型的飼料添加劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能提升效果不同，與對(duì)照組相比，釀酒酵母細(xì)胞壁對(duì)肉雞的出欄重及飼料效率的作用最顯著，而丁酸梭菌和葡萄糖氧化酶的作用并不明顯，可能與益生菌和酶制劑產(chǎn)品本身的差異有關(guān)。

3.2 不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞免疫水平的影響 胸腺、脾臟和法氏囊作為家禽主要的免疫器官，是家禽免疫機(jī)能的重要指標(biāo)，可反映家禽的非特異性免疫水平。而實(shí)際肉雞生產(chǎn)過(guò)程中，會(huì)接受系列化的免疫程序管理，而針對(duì)特定病原菌的血清抗體水平則反映了家禽的特異性免疫水平。管秀界等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，使用0.5～ 10 kg/t 釀酒酵母細(xì)胞壁替代肉雞日糧中的金霉素，可提高新城疫抗體水平，同時(shí)刺激免疫系統(tǒng)發(fā)育；黃婧溪等（2018）對(duì)比兩種酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)肉雞免疫機(jī)能的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)高含量的甘露聚糖和β-葡聚糖有利于提高免疫器官指數(shù)，增強(qiáng)肉雞的細(xì)胞免疫水平。何菊等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加100～200 g/t 丁酸梭菌CB1 制劑與對(duì)照組和抗生素組相比，42 d 法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著提高；周奕含（2021）研究發(fā)現(xiàn)肉雞基礎(chǔ)日糧中添加2000 mg/kg 丁酸梭菌可顯著提高肉仔雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)。王洪軍（2019）研究發(fā)現(xiàn)添加4000 U/g 葡萄糖氧化酶可顯著提高21 d 肉雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，顯著增加42 d 肉雞血清新城疫抗體水平；高晶萍等（2022）研究表明，肉雞飲水添加0.1%葡萄糖氧化酶，對(duì)肉雞的免疫器官指數(shù)及血清新城疫抗體水平無(wú)顯著影響，但是與乳酸菌聯(lián)合使用會(huì)有正向效果。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組對(duì)于肉雞的免疫器官指數(shù)有一定影響，但是差異不顯著；對(duì)42 d 肉雞血清新城疫抗體水平而言，釀酒酵母細(xì)胞壁的作用效果最佳，這可能與釀酒酵母細(xì)胞壁中富含的β-1，3-1，6 葡聚糖能夠通過(guò)免疫信號(hào)通路激活宿主特異性和非特異性免疫反應(yīng)有關(guān)。

3.3 不同飼料添加劑對(duì)白羽肉雞腸道微生物的影響 家禽腸道具有雙重功能，既是作為消化和吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的重要器官，又是保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的第一道先天屏障。而腸道里存在豐富的微生物菌群，對(duì)腸道發(fā)揮生理功效具有重要意義。腸道微生物菌群的穩(wěn)定一定程度的決定了機(jī)體腸道的健康水平，比如像大腸桿菌或沙門(mén)氏菌等致病菌大量繁殖而失衡，就會(huì)引發(fā)動(dòng)物機(jī)體損傷甚至死亡。因此，眾多飼料添加劑主要是在腸道中通過(guò)調(diào)節(jié)消化道菌群而發(fā)揮生理功能。釀酒酵母細(xì)胞壁作為一種特殊的真菌多糖，其特殊的空間結(jié)構(gòu)及功能位點(diǎn)在體外和體內(nèi)都具有吸附病原菌的作用（Liu等，2021），同時(shí)酵母細(xì)胞壁富含的甘露寡糖還可作為益生元在后腸促進(jìn)乳酸桿菌、雙歧桿菌等厭氧菌的增殖；夏林等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加750 g/t 的釀酒酵母細(xì)胞壁多糖，盲腸內(nèi)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量顯著降低，乳酸桿菌數(shù)量顯著增加；賀淼等（2015）研究顯示，在肉雞日糧中添加1 kg/t 釀酒酵母細(xì)胞壁，盲腸內(nèi)容物中大腸菌落總數(shù)降低44.39%。何菊等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧添加丁酸梭菌制劑對(duì)肉雞回腸、盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖有顯著促進(jìn)作用；李懷宇（2021）研究顯示，肉雞日糧添加125、250、500、1000 mg/kg 的丁酸梭菌可顯著降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，分別降低23.80%、21.25%、17.53%和14.20%；250 mg/kg 和1000 mg/kg 丁酸梭菌可顯著提高雙歧桿菌數(shù)量，分別提高20.09%和33.33%。郭玉光等（2019）研究發(fā)現(xiàn)肉雞日糧添加100 g/t 葡萄糖氧化酶能夠顯著降低22 d 和43 d盲腸大腸桿菌和沙門(mén)氏菌數(shù)量，顯著提高乳酸菌數(shù)量；高晶萍等（2022）研究發(fā)現(xiàn)肉雞飲水中添加0.1%葡萄糖氧化酶，在門(mén)水平上可顯著提高盲腸擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes），在屬水平上可顯著提高狄氏副擬桿菌（Parabacteroides）和長(zhǎng)棲糞桿菌（Faecalibacterium）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示釀酒酵母細(xì)胞壁和丁酸梭菌對(duì)42 d 肉雞盲腸的大腸桿菌和沙門(mén)氏菌數(shù)量影響顯著，丁酸梭菌的作用效果更佳，主要是丁酸梭菌在腸道定植能夠產(chǎn)生丁酸等短鏈脂肪酸，能降低腸道pH 直接抑制大腸桿菌等病原菌增殖，同時(shí)促進(jìn)乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，釀酒酵母細(xì)胞壁在提升生長(zhǎng)性能和免疫水平上效果最佳；丁酸梭菌對(duì)于肉雞腸道菌群的改善效果最佳。