中華鱉飼料復(fù)合植物蛋白替代魚粉的效果研究

朱站英，王剛，黃仲園，華雪銘，3，4

（1.湖州?；噬锟萍加邢薰?，浙江湖州 313105；2.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部魚類營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境生態(tài)研究中心，上海 201306；3.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306；4.上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306）

為降低中華鱉飼料生產(chǎn)成本，眾多學(xué)者對(duì)魚粉替代都做了大量研究。有研究表明，在飼料中使用國(guó)產(chǎn)魚粉不會(huì)降低石斑魚和黃顙魚的生長(zhǎng)性能，但國(guó)產(chǎn)魚粉因含有較高的組胺而影響其新鮮度，并因此降低虹鱒的攝食率（Cowey，1992）。鑒于此，魚粉和優(yōu)質(zhì)植物蛋白源的合理搭配成為實(shí)現(xiàn)飼料配方優(yōu)化的又一有效途徑。在優(yōu)質(zhì)蛋白源的研究中，將某些植物蛋白進(jìn)行發(fā)酵，降解為易于吸收的小分子蛋白和小肽，并降低其抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高蛋白的吸收利用率，已成為另外一個(gè)研究熱點(diǎn)。發(fā)酵豆粕是優(yōu)于去皮豆粕的魚粉替代物，已有研究表明，當(dāng)飼料中發(fā)酵豆粕的用量不超過10%時(shí)，并不會(huì)顯著性影響石斑魚、鰻魚、中華鱉和加州鱸的特定生長(zhǎng)率、飼料效率和蛋白質(zhì)效率（Zou等，2012）。

大米蛋白粉因其氨基酸平衡性與秘魯魚粉相似，已成為新型蛋白質(zhì)替代源。Palmegiano 等（2007）對(duì)黑鯛的研究發(fā)現(xiàn)，大米蛋白粉替代20%魚粉時(shí)取得了很好的效果，但當(dāng)替代量超過20%時(shí)，會(huì)顯著降低其生長(zhǎng)性能。復(fù)合蛋白質(zhì)替代源因其氨基酸互補(bǔ)效應(yīng)和經(jīng)濟(jì)效益顯著，往往是配方調(diào)整策略的首選。已有研究表明，含有大米蛋白粉的復(fù)合蛋白質(zhì)源最高可以替代80%的魚粉，而不顯著影響凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)、成活和飼料效率（劉堯等，2014）。本試驗(yàn)旨在豐富中華鱉飼料原料來源，調(diào)整配方結(jié)構(gòu)，通過改變大米蛋白粉、發(fā)酵豆粕和去皮豆粕的用量，探討復(fù)合植物蛋白源替代魚粉在中華鱉飼料上的可行性，為降低中華鱉飼料生產(chǎn)成本、找到一種性價(jià)比最優(yōu)的配方提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖試驗(yàn)

1.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)飼料配方中復(fù)合植物蛋白源與魚粉使用量比值（28%、28%、33%與41%）共設(shè)4組，分為對(duì)照組（生產(chǎn)配方P/F28C），試驗(yàn)組P/F28E、P/F33E 和P/F41E，在P/F28C 組的基礎(chǔ)上不使用進(jìn)口魚粉1，提高進(jìn)口魚粉2 和發(fā)酵豆粕的使用量，并輔以降低國(guó)產(chǎn)魚粉2 使用量得到試驗(yàn)組P/F28E 配方；同步提高進(jìn)口魚粉2、大米蛋白粉和發(fā)酵豆粕的使用量，并輔以進(jìn)一步降低國(guó)產(chǎn)魚粉2 的使用量來降低進(jìn)口魚粉1 的使用量，得試驗(yàn)組P/F33E 配方；在試驗(yàn)組P/F33E 的基礎(chǔ)上進(jìn)一步升高大米蛋白粉和進(jìn)口魚粉2 使用量來降低進(jìn)口魚粉1 的使用量，得試驗(yàn)組P/F41E 配方。配方設(shè)計(jì)的總體思路是在降低高蛋白含量進(jìn)口魚粉的同時(shí)，適當(dāng)增加低蛋白含量進(jìn)口魚粉和優(yōu)質(zhì)植物蛋白源（大米蛋白和發(fā)酵豆粕）的用量，同時(shí)降低低蛋白含量國(guó)產(chǎn)魚粉和去皮豆粕的用量。每組4 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)1000 只中華鱉（臺(tái)灣品系）。試驗(yàn)用中華鱉購(gòu)自浙江省杭州市蕭山區(qū)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)，鱉體重（6.93±0.28）g。飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

1.1.2 養(yǎng)殖條件及日常管理 養(yǎng)殖試驗(yàn)在杭州?；士萍脊煞萦邢薰镜酿B(yǎng)殖場(chǎng)溫棚中進(jìn)行。將體質(zhì)健壯的16000 只稚鱉隨機(jī)分到16 個(gè)水泥池，養(yǎng)殖池面積20 m2，水深50 cm，池中有增氧設(shè)備，棚中有加熱鍋爐，黑暗養(yǎng)殖。水溫保持在（31±1）℃。

對(duì)試驗(yàn)鱉進(jìn)行2 周馴化，用商品稚甲飼料飽食投喂，每天3次，時(shí)間為8:00、13:00、18:00，直至正常攝食。禁食24 h，擦干鱉體，稱重作為平均初始體重（W0）。試驗(yàn)期為49 d，于試驗(yàn)?zāi)┢趯?duì)中華鱉進(jìn)行一次抽樣稱重，記錄為平均終重（W1），并統(tǒng)計(jì)成活率。所用粉狀飼料在每餐投喂時(shí)加其重量2%的油脂和50%的地下水混合均勻，用軟顆粒機(jī)制成軟顆粒后供投喂使用，每天分別于8:00、13:00、18:00 飽食投喂，并記錄投喂量。

成活率（SR）/%=St/S0×100；

式中：St為生長(zhǎng)試驗(yàn)?zāi)┢谥腥A鱉成活數(shù)；S0為生長(zhǎng)試驗(yàn)開始時(shí)的中華鱉總數(shù)。

1.2 抗應(yīng)激試驗(yàn)（冬眠）繼生長(zhǎng)試驗(yàn)后（11 月份），拆除溫棚，于原水泥池進(jìn)行中華鱉有沙冬眠，期間停止增氧和喂食。以生長(zhǎng)試驗(yàn)?zāi)┢谧鳛槎叱跗?，記體重W1，之后，分別于次年2 月（冬眠中期）和4 月（冬眠末期）采樣，分別記體重W2、W3，試驗(yàn)為期6 個(gè)月。

相對(duì)增重率（WGR）/%=（Wt-Wt-1）/Wt-1×100；

式中：Wt為試驗(yàn)第t 期時(shí)中華鱉體重，t=1、2、3，分別對(duì)應(yīng)冬眠初期、中期和后期；Wt-1為試驗(yàn)第（t-1）期時(shí)中華鱉體重。

1.3 樣品分析

1.3.1 形體指數(shù) 在養(yǎng)殖末期（即冬眠初期）、冬眠中期和冬眠末期分別量取每組中華鱉的體長(zhǎng)，分別記為L(zhǎng)1、L2和L3；稱取每組中華鱉肝臟重量，分別記為WH1、WH2和WH3。

肥滿度/（g/cm3）=Wt/Lt3；

式中：Wt為試驗(yàn)第t 期時(shí)中華鱉體重，t=1、2、3；Lt為試驗(yàn)第t 期時(shí)中華鱉體長(zhǎng)，t=1、2、3。

肝體比/%=WHt/Wt×100；

式中：WHt為第t 期肝臟重量，t=1、2、3。

1.3.2 體成分測(cè)定 冬眠期間，分離中華鱉鱉體和內(nèi)臟，于60 ℃恒溫烘干，制得風(fēng)干樣，測(cè)定其粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分，測(cè)定方法分別參考凱氏定氮法（GB5009.5-2010）、索氏抽提法（GB/T5009.6-2003）和高溫灼燒法（GB5009.3-2010）。

1.3.3 血清非特異性免疫相關(guān)酶 冬眠期間，每組取10 只中華鱉，斷頭取血，離心得血清，于-20℃冷藏，以檢測(cè)血清中堿性磷酸酶、溶菌酶和TSOD，檢測(cè)方法參考自南京建成試劑盒說明書。

1.3.4 組織消化酶 冬眠期間，每組取3 只中華鱉，取出肝臟、腸道和胃于-20 ℃冷藏，以檢測(cè)組織中的淀粉酶和蛋白酶，淀粉酶檢測(cè)方法參考南京建成試劑盒說明書，蛋白質(zhì)酶檢測(cè)方法為福林酚法。

1.4 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析 結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，并用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（Anova）。當(dāng)差異顯著時(shí)（P <0.05），進(jìn)行Duncan's 多重比較。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能 由表2 可知，養(yǎng)殖末期各組中華鱉的相對(duì)增重率、肥滿度、肝體比、飼料系數(shù)和成活率均無顯著性差異（P ＞0.05），但P/F28E增重率稍顯弱勢(shì)。由表3 可知，在冬眠的抗應(yīng)激試驗(yàn)中，所有試驗(yàn)組的增重率均表現(xiàn)為先下降后上升，但試驗(yàn)組P/F33E 能在冬眠復(fù)蘇后快速適應(yīng)環(huán)境而增加體重，相對(duì)增重率較對(duì)照組提高1.04%（P ＞0.05），試驗(yàn)組P/F28E 和P/F41E相對(duì)增重率較對(duì)照組分別降低13.02% 和25.96%（P ＜0.05）。冬眠后中華鱉肥滿度為先下降后上升，肝體比則持續(xù)下降。

表2 不同配合飼料對(duì)中華鱉生長(zhǎng)和形體指數(shù)的影響

表3 不同配合飼料對(duì)冬眠期間中華鱉生長(zhǎng)和形體指數(shù)的影響

2.2 體成分分析

2.2.1 冬眠中華鱉全鱉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析 由圖1 可知，中華鱉全鱉粗蛋白質(zhì)含量隨冬眠時(shí)間的延長(zhǎng)顯著性上升（P ＜0.05），粗脂肪含量顯著性下降（P ＜0.05）（圖2）；P/F28C 中華鱉在冬眠末期時(shí)，較冬眠中期全鱉粗蛋白質(zhì)含量有所下降，粗脂肪含量有所上升，但均無顯著性差異（P ＞0.05）。試驗(yàn)各組粗灰分含量在冬眠期間均顯著性上升（P ＜0.05），且在冬眠初期各組之間無顯著性差異（P ＞0.05），冬眠中期P/F28E 組低于其他試驗(yàn)組，冬眠末期P/F41E 組顯著高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05）（圖3）。

圖1 中華鱉在冬眠不同時(shí)期全鱉粗蛋白質(zhì)含量比較

圖2 中華鱉在冬眠不同時(shí)期全鱉粗脂肪含量比較

圖3 中華鱉在冬眠不同時(shí)期全鱉粗灰分含量比較

2.2.2 冬眠中華鱉內(nèi)臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析 由圖4 可知，中華鱉內(nèi)臟粗蛋白質(zhì)含量隨冬眠時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸上升，P/F28E 上漲趨勢(shì)較小，粗脂肪含量逐漸下降，但P/F28C 在冬眠末期時(shí)，粗脂肪含量顯著性上升（P ＜0.05）（圖5），粗灰分含量整體趨勢(shì)為先下降，再上升（圖6），除P/F28E外，其他試驗(yàn)組均表現(xiàn)為冬眠末期時(shí)中華鱉內(nèi)臟灰分顯著性高于冬眠中期（P ＜0.05），低于冬眠初期（P ＜0.05）。

圖4 中華鱉在冬眠不同時(shí)期內(nèi)臟粗蛋白質(zhì)含量比較

圖5 中華鱉在冬眠不同時(shí)期內(nèi)臟粗脂肪含量比較

圖6 中華鱉在冬眠不同時(shí)期內(nèi)臟粗灰分含量比較

2.3 中華鱉肝臟、腸道和胃在冬眠不同時(shí)期的消化酶活性

2.3.1 蛋白質(zhì)酶活性 由表4 可知，冬眠期間，中華鱉肝臟、腸道和胃的蛋白質(zhì)酶活力整體表現(xiàn)為先下降后上升，冬眠初期，P/F28C 和P/F33E 組肝臟蛋白質(zhì)酶活顯著性高于其他兩組（P ＜0.05），P/F28E 組腸道蛋白質(zhì)酶活最低，顯著性低于對(duì)照組和P/F33E 組（P ＜0.05），P/F28E 組胃蛋白酶活性較對(duì)照組高2.07（P ＞0.05），P/F33E 和P/F41E 組較對(duì)照組分別低10.02 和14.03（P ＜0.05）；冬眠中期，P/F28E 和P/F41E 組肝臟蛋白酶活性較對(duì)照組分別高83.33 和77.28（P ＜0.05），P/F33E 組肝臟蛋白酶活性較對(duì)照組低17.73（P ＞0.05）；冬眠末期，P/F41E 和P/F28E 兩組肝臟、腸道和胃蛋白質(zhì)酶活均顯著性低于對(duì)照組（P ＜0.05），P/F33E組肝臟蛋白質(zhì)酶活較對(duì)照組低37.42（P ＜0.05），但腸道和胃蛋白質(zhì)酶活較P/F28C 組無顯著性差異（P ＞0.05），較P/F41E 和P/F28E 兩組肝臟、腸道和胃蛋白質(zhì)酶活顯著性升高（P ＜0.05）。P/F41E組肝臟、腸道和胃蛋白質(zhì)酶活最低（P ＜0.05）。

表4 不同配合飼料對(duì)冬眠期間中華鱉肝臟、腸道和胃蛋白質(zhì)酶的影響U/g·pro

2.3.2 淀粉酶活性 由表5 可知，冬眠期間中華鱉肝臟、腸道和胃的淀粉酶活整體表現(xiàn)為先上升后下降，均表現(xiàn)為冬眠中期淀粉酶活性顯著性高于冬眠初期和末期。P/F33E 組肝臟淀粉酶活在冬眠前、中、后期均顯著性高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05），P/F41E 組腸道淀粉酶活性在冬眠期間均顯著性高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05），P/F28E 組在冬眠初期胃淀粉酶活性顯著性高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05），P/F28E 和P/F41E 組在冬眠中期胃淀粉酶活性顯著性低于其他兩組（P ＜0.05），P/F33E 組在冬眠末期胃淀粉酶活性顯著性高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05）。

表5 不同配合飼料對(duì)冬眠期間中華鱉肝臟、腸道和胃淀粉酶的影響U/mg·pro

2.4 血清生化指標(biāo) 由圖7 可知，冬眠前期P/F28C 和P/F33E 組血清中溶菌酶活力顯著高于P/F33E、P/F41E 兩組（P ＜0.05）；由圖8 可知，冬眠期間，中華鱉血清中堿性磷酸酶活性整體表現(xiàn)為先下降后上升，P/F33E 組在冬眠初和冬眠中期血清中堿性磷酸酶活力顯著性高于其他試驗(yàn)組（P ＜0.05）。從圖9 可知，在冬眠前期，P/F41E 組總超氧化物歧化酶（T-SOD）顯著高于其他試驗(yàn)組，中華鱉冬眠期間，血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力整體表現(xiàn)為冬眠中期最低，冬眠末期最高，P/F33E組冬眠期間血清SOD 活力波動(dòng)最小。

圖7 不同飼料組中華鱉血清溶菌酶活力比較

圖8 中華鱉在冬眠不同時(shí)期血清堿性磷酸酶活力

圖9 中華鱉在冬眠不同時(shí)期血清T-SOD 活力

3 討論

Ringo 等（2004）研究表明，豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子中抗胰蛋白酶因子和植酸會(huì)抑制機(jī)體對(duì)脂肪和蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化和沉淀，發(fā)酵豆粕因抗?fàn)I養(yǎng)因子較低和良好的適口性，被認(rèn)為是取代去皮豆粕的最佳飼料原料，并已在畜禽和魚蝦上取得良好的應(yīng)用效果，比如，使用50%～ 70%的發(fā)酵豆粕替代魚粉不影響牛蛙的生長(zhǎng)性能（陳明哲等，2021）；用8%的發(fā)酵豆粕替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦的生長(zhǎng)沒有影響（楊景豐等，2018）。大米蛋白粉是一種新型的植物蛋白質(zhì)原料，已有研究表明，飼料中使用大米蛋白粉替代魚粉對(duì)保育豬的生長(zhǎng)性能沒有影響（田冬冬等，2016）；畜禽和魚蝦對(duì)大米蛋白粉的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率優(yōu)于豆粕和發(fā)酵豆粕（劉衛(wèi)東等2010），因此，在飼料配方中提高發(fā)酵豆粕和大米蛋白粉，并輔以降低去皮豆粕和國(guó)產(chǎn)魚粉的用量，來降低進(jìn)口魚粉使用量，從而降低飼料生產(chǎn)成本，是一種相對(duì)穩(wěn)妥可行的方案。

在本次養(yǎng)殖試驗(yàn)中，P/F33E 組較P/F28C 組在生長(zhǎng)、形體指數(shù)、體成分方面均無顯著性差異。這是因?yàn)镻/F33E 組在降低進(jìn)口魚粉1 的使用量時(shí)，提高了進(jìn)口魚粉2、發(fā)酵豆粕和大米蛋白粉的使用量，來補(bǔ)充飼料中的蛋白質(zhì)，隨之降低了國(guó)產(chǎn)魚粉2 和去皮豆粕的使用量，規(guī)避了國(guó)產(chǎn)魚粉和豆粕對(duì)中華鱉機(jī)體的損傷。P/F41E 組較P/F33E 組和P/F28C 組在生長(zhǎng)和形體指數(shù)均無顯著性差異，但卻顯著性降低了鱉體粗脂肪，提高了內(nèi)臟粗脂肪含量?？赡苁且?yàn)樵谶M(jìn)一步降低進(jìn)口魚粉1 的使用量時(shí)，采用在P/F33E 組的基礎(chǔ)上增加進(jìn)口魚粉2和大米蛋白粉使用量的方法，從總體上提高了飼料中植物蛋白質(zhì)源的比例，促使中華鱉體內(nèi)糖原異生轉(zhuǎn)化為脂肪，儲(chǔ)存于肝臟中，隨著投喂時(shí)間延長(zhǎng)，導(dǎo)致該組中華鱉患脂肪肝的可能行越大，不利于中華鱉健康。P/F28E 組在生長(zhǎng)、形體指數(shù)和體成分（除鱉體粗脂肪和內(nèi)臟粗蛋白質(zhì)）均值均劣于P/F28C組，但無顯著性差異，而鱉體粗脂肪顯著性高于其他試驗(yàn)組，內(nèi)臟粗蛋白質(zhì)顯著性低于P/F33E 組和P/F28C，可能是因?yàn)樵趦H使用進(jìn)口魚粉2 的情況下，提高發(fā)酵豆粕使用量，不足以維持氨基酸平衡，影響了蛋白質(zhì)消化吸收和利用。

水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的溶菌酶（LSZ）是一種重要的非特異性防御因子，也是生理防御水平的重要標(biāo)志之一（Paulsen等，2001），堿性磷酸酶（AKP）是溶酶體酶的重要組成部分（Hashimoto等，1997），與脂類、葡萄糖、鈣和無機(jī)磷的吸收存在正相關(guān)性（馮曉燕等2003），并具有防御和消化的雙重作用（周永燦，2000）。在養(yǎng)殖試驗(yàn)期間P/F33E 組和P/F28C 組溶菌酶活力顯著性高于其他兩組，P/F33E組堿性磷酸酶顯著性高于其他試驗(yàn)組，說明僅僅依靠提高發(fā)酵豆粕或大米蛋白粉的用量來降低進(jìn)口魚粉1 的用量可能會(huì)降低機(jī)體免疫水平。對(duì)大西洋鰈（Aksne等，1997）、大菱鲆（Oliva-Teles等，1999）和半滑舌鰨（柳旭東等，2006）的研究也表明，低質(zhì)魚粉會(huì)顯著性降低機(jī)體的免疫力水平?？偝趸锲缁傅幕钚钥梢员碚鳈C(jī)體抗氧化狀態(tài)（Drail等，2001），相關(guān)研究表明低質(zhì)魚粉的氧化油脂會(huì)致使水產(chǎn)動(dòng)物的總超氧化物歧化酶活性升高（Mourente等，2002）。在本試驗(yàn)中P/F41E 組TSOD（即冬眠前期）顯著高于其他試驗(yàn)組，可能是因?yàn)榈唾|(zhì)魚粉中不利因子含量和植物蛋白用量超過了中華鱉的耐受度，對(duì)其造成了脅迫。因此，在養(yǎng)殖試驗(yàn)期間，就生長(zhǎng)、形體指數(shù)、體成分、血清免疫酶活和價(jià)格等因素而言，P/F33E 組配方最優(yōu)。

冬眠是生物對(duì)外界不良環(huán)境條件的一種適應(yīng)現(xiàn)象。冬眠期間，中華鱉主要通過皮膚呼吸和消耗體內(nèi)積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持微弱的新陳代謝。經(jīng)過冬眠的鱉體質(zhì)量通常會(huì)減輕10%～15%（張幼敏等，1993）。已有研究表明，冬眠期低溫降低了蛙類免疫等保護(hù)機(jī)能，同時(shí)也限制了病原微生物的內(nèi)稟增長(zhǎng)率，但體質(zhì)較差的個(gè)體易患過冬死亡癥（井潤(rùn)貞等，2011）。在冬眠期間，P/F33E 組和P/F28C組中華鱉體重變化幅度最大，且能在冬眠末期（復(fù)蘇時(shí)）體重快速增長(zhǎng)，表明兩組中華鱉既能有效利用能量以順利度過冬眠期，也能在復(fù)蘇時(shí)快速適應(yīng)環(huán)境和攝食。

飼料中魚粉的組胺含量低時(shí)，可以促進(jìn)消化酶的分泌以及提高其活性（Sugahara等，1988），但含量高時(shí)會(huì)導(dǎo)致消化道損傷，抑制消化酶的分泌和活性，從而降低飼料利用效率和養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)（Okazaki等，1983）。國(guó)產(chǎn)魚粉的組胺含量高于進(jìn)口魚粉，豆粕中的胰蛋白酶抑制因子會(huì)降低機(jī)體蛋白質(zhì)酶的活性（Yamamoto等，1998）。在本次養(yǎng)殖試驗(yàn)中，P/F28C 和P/F33E 組肝臟、腸道和胃的蛋白質(zhì)酶活顯著性高于其他兩組，P/F28E 可能是因?yàn)轱暳现袊?guó)產(chǎn)魚粉含量較高，其中的組胺抑制了機(jī)體蛋白質(zhì)酶活力；而P/F41E 組蛋白酶活力低，可能與動(dòng)植物蛋白源使用比例不合理有關(guān)；P/F33E 組蛋白質(zhì)酶活力較高的原因，可能是飼料中復(fù)合魚粉的使用降低了飼料中組胺的含量，復(fù)合植物蛋白質(zhì)源抑制了飼料中胰蛋白酶抑制因子的活性。中華鱉是一種變溫爬行動(dòng)物，環(huán)境溫度的變化會(huì)影響動(dòng)物機(jī)體代謝過程中的酶活和酶濃度的變化（Crawford等，1999）。因此在本次冬眠試驗(yàn)中，蛋白質(zhì)酶活力呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，P/F28C 和P/F33E 組在冬眠末期各組織蛋白質(zhì)酶活均上升至冬眠初期水平，可能是該兩組中華鱉體質(zhì)較好，能快速恢復(fù)活力并攝食。

淀粉酶主要是由肝臟產(chǎn)生，并在腸道中激活（Debnath等，2007），且長(zhǎng)期攝食高植物蛋白質(zhì)飼料可提高機(jī)體淀粉酶活性。在本次養(yǎng)殖試驗(yàn)中，中華鱉機(jī)體淀粉酶活性整體表現(xiàn)與飼料中植物蛋白質(zhì)源呈正相關(guān)。葡萄糖是生物機(jī)體的主要防凍劑，可降低生物在冬眠期間的死亡風(fēng)險(xiǎn)（Storey等，1987）。當(dāng)年氣溫變化無常，擾亂了中華鱉機(jī)體代謝，使得中華鱉過早恢復(fù)攝食，然而此時(shí)并未及時(shí)投喂，只能攝食水體中枯枝敗葉和已死亡的中華鱉，在本次冬眠試驗(yàn)期間，淀粉酶活力整體表現(xiàn)為先上升后下降，但后期仍高于初期，推測(cè)與整個(gè)冬眠期糖類的分解供能有關(guān)，也可能與復(fù)蘇的中華鱉主要攝食水體中的植物有關(guān)。中華鱉的脂肪主要存儲(chǔ)于肝臟和四肢脂肪腺中。冬眠期間，中華鱉鱉體和內(nèi)臟中粗脂肪含量顯著性減少，且肝體比也在顯著性下降，而中華鱉鱉體和內(nèi)臟中粗蛋白質(zhì)和灰分含量顯著性上升，表明冬眠期間，中華鱉消耗的能源物質(zhì)除糖類外還有脂肪。

中華鱉是一種變溫爬行動(dòng)物，所以免疫功能具有明顯的溫度依賴性，且冬眠會(huì)抑制機(jī)體免疫（Bouma等，2010）。因此，冬眠期間中華鱉堿性磷酸酶和總超氧化物歧化酶活力整體表現(xiàn)為先下降后上升趨勢(shì)。已有研究表明（Gregory等，1997），蛙類在低溫馴化初始階段會(huì)導(dǎo)致免疫抑制，適應(yīng)后會(huì)恢復(fù)至或上升到更高水平，而P/F41E 組冬眠末期T-SOD 顯著性低于冬眠前期，可能是此時(shí)中華鱉機(jī)體免疫器官受冬眠影響而遭到破壞，故不建議采用這樣的組合替代方法降低進(jìn)口魚粉的使用量。因此，在冬眠試驗(yàn)期間，綜合生長(zhǎng)、形體指數(shù)、體成分、血清免疫酶活力和價(jià)格等因素，P/F33E組配方最優(yōu)。

4 結(jié)論

采用提高大米蛋白粉和發(fā)酵豆粕使用量，并同時(shí)降低去皮豆粕和國(guó)產(chǎn)魚粉使用量的組合方式來降低配方中進(jìn)口魚粉的使用量，進(jìn)而降低飼料生產(chǎn)成本的方法是可行的，綜合生長(zhǎng)、形體指數(shù)、體成分、血清免疫酶活和價(jià)格等因素，P/F33 E 組配方最優(yōu)。