miR-345-5p靶向下調(diào)KIF15抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲

王志剛，魯靜，王明華，崔秀卿

（1保定蓮池區(qū)人民醫(yī)院腫瘤科，保定 071000；2湖北省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，武漢 430000；3保定市第二醫(yī)院老年病科，保定 071000）

肺癌是最常見(jiàn)的癌癥之一，也是全球人口因癌癥死亡的主要原因[1]。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌病例的80%以上，由于臨床癥狀不明顯發(fā)作較晚，篩查方法不完善，許多NSCLC患者被確診時(shí)已為晚期。盡管在醫(yī)學(xué)治療方面有了進(jìn)步和改善，但肺癌患者的5年存活率仍然很低[2]。因此，確定新的預(yù)測(cè)標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)對(duì)于肺癌的治療具有重要意義。miRNA是小的內(nèi)源性非編碼RNA，它們通過(guò)結(jié)合靶基因3’非翻譯區(qū)中的互補(bǔ)序列負(fù)調(diào)控mRNA的穩(wěn)定性或抑制mRNA翻譯[3]。大多數(shù)miRNA以組織特異性方式充當(dāng)腫瘤抑制因子或癌基因，miRNA表達(dá)失調(diào)與人類(lèi)癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[4]。已有研究報(bào)道，miR-345-5p在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)失調(diào)，可抑制腫瘤增殖，發(fā)揮抑癌效果[5]，而運(yùn)動(dòng)蛋白超家族蛋白15（kinesin superfamily proteins 15，KIF15）作為一種基于微管的、正端導(dǎo)向的運(yùn)動(dòng)蛋白，能夠參與紡錘體裝配、質(zhì)膜運(yùn)輸和細(xì)胞分裂等多種細(xì)胞過(guò)程[6]。相關(guān)研究表明，KIF15參與胰腺癌、肺癌等多種腫瘤生長(zhǎng)[7,8]。然而miR-345-5p調(diào)控K I F15參與NSCLC增殖、遷移、侵襲的研究，尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC組織與細(xì)胞中miR-345-5p表達(dá)水平，探討miR-345-5p/KIF15軸對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響，以期為NSCLC的臨床治療提供參考依據(jù)。

材料與方法

1 NSCLC組織標(biāo)本及細(xì)胞系

2018年5 月至2019年5月期間在本院進(jìn)行手術(shù)切除的肺癌患者中收集40對(duì)NSCLC組織及其癌旁組織樣本，并將所有組織樣本速凍保存在液氮中。所有患者術(shù)前未接受過(guò)任何放療或化療。本研究得到湖北省腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署了知情同意書(shū)。

人NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H358、SPC-A-1及人正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B均購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。

2 主要試劑與儀器

miR-345-5p模擬物（miR-345-5p mimics）及其陰性對(duì)照（miR-NC）、miR-345-5p抑制物（antimiR-345-5p）及其陰性對(duì)照（anti-miR-NC）、KIF15過(guò)表達(dá)物（KIF15 OE）及其陰性對(duì)照（OE-NC）均購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）均購(gòu)自TaKaRa公司；CCK-8試劑盒、Transwell小室均購(gòu)自金圖生物科技有限公司；蛋白提取試劑盒、BCA試劑盒、Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；EdU試劑盒購(gòu)自上海覓拓生物科技有限公司；TaqMan MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、TransStart?Green qPCR SuperMix、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京全式金生物科技有限公司；Trizol試劑、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒均購(gòu)自Sigma公司；兔源一抗KIF15、增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metal proteinase 2，MMP-2）、GAPDH、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；熒光定量PCR儀購(gòu)自Roche公司。

3 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

將人NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H358、SPC-A-1及人正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B置于含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中，并在37 ℃，含有5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。將A549細(xì)胞以1×106個(gè)/孔的密度接種到6孔培養(yǎng)板中，觀察到細(xì)胞融合率達(dá)到80% ～ 90%時(shí)，利用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分組轉(zhuǎn)染。各組轉(zhuǎn)染如下：miRNC組轉(zhuǎn)染miR-NC，miR-345-5p mimics組轉(zhuǎn)染miR-345-5p mimics，anti-miR-NC組轉(zhuǎn)染anti-miR-NC，anti-miR-345-5p組轉(zhuǎn)染anti-miR-345-5p，miR-345-5p mimics+OE-NC組 為miR-345-5p mimics與OENC共轉(zhuǎn)染，miR-345-5p mimics+KIF15 OE組為miR-345-5p mimics與KIF15 OE共轉(zhuǎn)染，最后取未轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞作為空白對(duì)照，記為空白組。

4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NSCLC組織中PCNA、Bcl-2、MMP-2蛋白表達(dá)

將固定于4%多聚甲醛中的組織經(jīng)梯度酒精脫水、石蠟包埋后，切成5 mm的切片，再將切片通過(guò)脫蠟和水化后，置于3%過(guò)氧化氫中孵育20 min，利用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，加入一抗PCNA、Bcl-2、MMP-2，均為1:1000稀釋?zhuān)?℃下孵育過(guò)夜，再將切片與羊抗兔二抗（1:2000）在室溫下孵育1 h，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素親和素復(fù)合物孵育1 h，DAB顯色后用蘇木精復(fù)染，普通光學(xué)顯微鏡下觀察PCNA、Bcl-2、MMP-2蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)。

5 qRT-PCR檢測(cè)NSCLC組織和細(xì)胞系中miR-345-5p表達(dá)水平

使用Trizol試劑提取各組織和細(xì)胞系總RNA。利用Nanodrop ND-1000確定RNA濃度和質(zhì)量。利用TaqMan microRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA（5 μg）反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用TransStart?Green qPCR SuperMix試劑盒對(duì)miR-345-5p表達(dá)水平進(jìn)行定量。miR-345-5p擴(kuò)增體系：2×TransStart?Green qPCR SuperMix 10 μL，F(xiàn)orward primer（10 μmol/L）0.5 μL，Reverse primer（10μmol/L）0.5 μL，cDNA模 板（1 μg）2 μL，RNase-Free H2O補(bǔ)足至20 μL。擴(kuò)增條件為：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s，60 ℃，20 s，72℃，10 s，共40個(gè)循環(huán)。使用U6作為內(nèi)參基因，采用2-??CT計(jì)算miR-345-5p mRNA相對(duì)表達(dá)水平。所用引物序列如下：U6正向引物：CTCGCTTCGGCAGCACA，U6反向引物：AACGCTTCACGAATTTGCGT；miR-345-5p正向引物：TCGGCGGCTGACTCCTAGTCCA，miR-345-5p反向引物：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGT。

6 CCK-8法檢測(cè)A549細(xì)胞增殖情況

分別收集各組A549細(xì)胞接種至96孔板（1.0×105個(gè)/孔）中，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染0 h、24 h、48 h、72 h時(shí)分別加入10 μL CCK-8溶液于每個(gè)孔中，并在37 °C下孵育2 h。隨后，采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定A549細(xì)胞在450 nm波長(zhǎng)處的吸光度（OD值）。

7 EdU染色檢測(cè)細(xì)胞增殖

收集A549細(xì)胞接種至24孔板（5.0×104個(gè)/孔）培養(yǎng)48 h后，加入含50 μmol/L EdU的培養(yǎng)基孵育12 h，PBS洗滌3次，冰甲醇固定15 min，根據(jù)EdU試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞EdU染色情況，EdU染色陽(yáng)性率（%）=EdU染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

8 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549細(xì)胞遷移情況

收集各組細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×104個(gè)/mL，并將各組細(xì)胞重懸于100 μL無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中，且全部置于Transwell上腔室中。同時(shí)，將600 μL含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基添加至下腔室。室溫孵育24 h后，將遷移細(xì)胞用4%多聚甲醛固定30 min，并用0.1%結(jié)晶紫染色。在倒置顯微鏡下，隨機(jī)選擇5個(gè)區(qū)域觀察細(xì)胞遷移數(shù)目。

9 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549細(xì)胞侵襲情況

在上腔室中預(yù)先涂上Matrigel膠，收集各組細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×104個(gè)/mL，其余步驟同上述1.6，在倒置顯微鏡下，隨機(jī)選擇5個(gè)區(qū)域?qū)Υ┠ぜ?xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以穿膜細(xì)胞數(shù)表示為細(xì)胞侵襲能力。

10 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miRNA-345-5p與KIF15的靶向關(guān)系

使用Targetscan7.2軟件預(yù)測(cè)miRNA-345-5p與KIF15結(jié)合位點(diǎn)。分別構(gòu)建KIF15野生型（WT）和突變型（MUT）3’-UTR區(qū)質(zhì)粒，標(biāo)記為WTKIF15、MUT-KIF15。將A549細(xì)胞置于含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中，于37 ℃，5% CO2恒溫孵箱里培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時(shí)，按照以下分組轉(zhuǎn)染：miR-NC+WT-KIF15共轉(zhuǎn)染組、miRNA-345-5p mimics+WT-KIF15共轉(zhuǎn)染組、miR-NC+MUT-KIF15共轉(zhuǎn)染組、miRNA-345-5p mimics+MUT-KIF15共轉(zhuǎn)染組，每組各設(shè)6個(gè)復(fù)孔。轉(zhuǎn)染48 h后，通過(guò)雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行酶活測(cè)定。

11 Western blot檢測(cè)A549細(xì)胞中KIF15蛋白表達(dá)水平

將細(xì)胞在含有1 mmol/L苯甲基磺酰氟的RIPA緩沖液中裂解。使用BCA蛋白測(cè)定試劑盒確定蛋白濃度。通過(guò)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離等量蛋白質(zhì)（50 μg），并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉2 h后，將膜與兔抗KIF15（1︰1000）和兔抗GADPH（1︰1500）4 ℃孵育過(guò)夜。經(jīng)洗滌后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗（1︰2000），37 ℃孵育2 h，然后使用ECL化學(xué)發(fā)光試劑可視化蛋白質(zhì)。使用Image J軟件對(duì)蛋白條帶進(jìn)行定量分析。

12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 miR-345-5p在NSCLC組織和細(xì)胞系中降低

NSCLC組織中miR-345-5p表達(dá)水平顯著低于癌旁組織（表1）。與BEAS-2B細(xì)胞相比，A549、NCI-H358、SPC-A-1細(xì)胞中miR-345-5p表達(dá)水平顯著降低，以A549細(xì)胞系中降低最為明顯（表2）。因此，后續(xù)選擇A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

表1 miR-345-5p在NSCLC組織中的表達(dá)水平Tab. 1 Expression level of miR-345-5p in NSCLC tissue

表2 miR-345-5p在NSCLC細(xì)胞系中的表達(dá)水平Tab. 2 Expression level of miR-345-5p in NSCLC cell line

2 NSCLC組織中PCNA、Bcl-2和MMP-2增高

免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，NSCLC組織中PCNA、Bcl-2和MMP-2免疫反應(yīng)性均顯著強(qiáng)于癌旁組織（圖1）。

圖1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)PCNA、Bcl-2、MMP-2在NSCLC組織中的表達(dá)。比例尺，50 μmFig 1 Immunohistochemical examination for the expression of PCNA, Bcl-2 and MMP-2 in NSCLC tissues. Scale bar, 50 μm

3 miR-345-5p抑制A549細(xì)胞增殖、遷移及侵襲

qRT-PCR檢測(cè)顯示：與空白組和miR-NC組相比，miR-345-5p mimics組A549細(xì)胞中miR-345-5p表達(dá)水平顯著升高（表4）。CCK-8分析和Edu染色顯示，miR-345-5p mimics組A549細(xì)胞在轉(zhuǎn)染miR-345-5p mimics后24、48、72 h的增殖能力和EdU陽(yáng)性細(xì)胞率明顯低于空白組和miR-NC組（表3，圖2）；Transwell實(shí)驗(yàn)表明，與空白組和miR-NC組相比，miR-345-5p mimics組A549細(xì)胞的遷移及侵襲能力顯著降低（表4，圖3）。

表3 上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響Tab. 3 Effect of up-regulation of miR-345-5p on proliferation of A549 cells

圖2 EdU染色檢測(cè)上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。比例尺，50 μmFig 2 EdU staining for the effect of miR-345-5p up-regulation on the proliferation of A549 cell. Scale bar, 50 μm

圖3 上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞遷移和侵襲影響的Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。比例尺，100 μmFig. 3 Transwell assay for effect of up-regulation of miR-345-5p on migration and invasion of A549 cells. Scale bar, 100 μm

表4 上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞中miR-345-5p表達(dá)水平及細(xì)胞遷移、侵襲的影響Tab. 4 Effects of miR-345-5p up-regulation on the expression level of miR-345-5p, cell migration and invasion in A549 cells

4 miR-345-5p靶向調(diào)控KIF15表達(dá)

利用TargetScan軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)KIF15 3’-UTR與miR-345-5p存在結(jié)合位點(diǎn)（圖4）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證表明，與miR-NC+WT-KIF15組比較，miR-345-5p mimics+WT-KIF15組A549細(xì)胞熒光素酶相對(duì)活性顯著降低，而miR-345-5p mimics+MUT-KIF15組A549細(xì)胞熒光素酶相對(duì)活性與miR-NC+MUT-KIF15組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表5）。qRT-PCR檢測(cè)顯示，anti-miR-345-5p組A549細(xì)胞中miR-345-5p表達(dá)水平顯著低于空白組和antimiR-NC組（表6）。Western Blot結(jié)果顯示，miR-345-5p mimics組A549細(xì)胞中KIF15蛋白的表達(dá)水平顯著低于空白組和miR-NC組，而anti-miR-345-5p組A549細(xì)胞中KIF15蛋白的表達(dá)水平顯著高于空白組和anti-miR-NC組（表6，圖5）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-345-5p與KIF15存在靶向關(guān)系。

表5 雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-345-5p與KIF15 3’-UTR的靶向關(guān)系Tab. 5 Target relationship between miR-345-5p and KIF15 3’-UTR verified by double luciferase reporter gene

表6 miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞中KIF15蛋白表達(dá)水平的影響Tab. 6 Effect of miR-345-5p on KIF15 protein expression in A549 cells

圖4 TargetScan預(yù)測(cè)miR-345-5p與KIF15 3’-UTR結(jié)合位點(diǎn)Fig 4 TargetScan prediction of the binding sites for miR-345-5p and KIF15 3’-UTR

圖5 miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞中KIF15蛋白表達(dá)水平的影響Fig. 5 Effect of miR-345-5p on KIF15 protein expression in A549 cells

5 KIF15過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的抑制

與miR-345-5p mimics和miR-345-5p mimics + OE-NC組比較，miR-345-5p mimics + KIF15 OE組A549細(xì)胞中KIF15蛋白表達(dá)水平顯著升高（表8，圖6）。miR-345-5p mimics+KIF15 OE組A549細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力顯著高于miR-345-5p mimics組和miR-345-5p mimics + OE-NC組（表7，表8，圖7，圖8）。

圖6 KIF15過(guò)表達(dá)及上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞中KIF15蛋白影響的Western blot檢測(cè)。Fig. 6 Western blot detection for the effects of KIF15 overexpression and up-regulation of miR-345-5p on KIF15 protein in A549 cells

圖7 EdU染色檢測(cè) KIF15過(guò)表達(dá)及上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。比例尺，50 μmFig. 7 Edu staining detection for the effect of KIF15 overexpression and up-regulation of miR-345-5p on the proliferation of A549 cells. Scale bar, 50 μm

圖8 KIF15過(guò)表達(dá)及上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞遷移及侵襲影響的Transwell實(shí)驗(yàn)分析，比例尺，100 μmFig. 8 Transwell assay for effects of KIF15 overexpression and up-regulation of miR-345-5p on migration and invasion of A549 cells. Scale bar, 100 μm

表7 KIF15過(guò)表達(dá)及上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響Tab. 7 Effects of KIF15 overexpression and up-regulation of miR-345-5p on A549 cell proliferation

表8 KIF15過(guò)表達(dá)及上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞中KIF15蛋白、細(xì)胞遷移及侵襲的影響Tab. 8 Effects of KIF15 overexpression and up-regulation of miR-345-5p on KIF15 protein, cell migration and invasion in A549 cells

討論

NSCLC是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率和死亡率均較高。盡管NSCLC的治療方法在不斷改進(jìn)，但結(jié)果仍然較差。腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是阻礙NSCLC治療的最關(guān)鍵挑戰(zhàn)之一[9]。

許多研究表明，miRNA參與了腫瘤增殖、凋亡、遷移、侵襲、血管生成等過(guò)程[10]。例如miR-345-5p在胰腺癌組織中呈低表達(dá)狀態(tài)[11]，且和胰腺癌患者預(yù)后不良相關(guān)，這與本研究中miR-345-5p在NSCLC組織中低表達(dá)是一致的。另外，相關(guān)文獻(xiàn)還報(bào)道，上調(diào)miR-345-5p表達(dá)可明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[11]；苦參堿可通過(guò)提高miR-345-5p表達(dá)水平來(lái)抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲[12]；LncRNA DANCR通過(guò)調(diào)節(jié)miR-345-5p/Twist1軸來(lái)抑制膽管癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、血管生成和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[13]。由此表明miR-345-5p在腫瘤中具有抑癌基因的作用。PCNA作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)，研究表明PCNA在肺癌組織中高表達(dá)，并可促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖[14]；Bcl-2可抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[15]；MMP-2可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的遷移與侵襲[16]；相關(guān)研究顯示，miR449a過(guò)表達(dá)可通過(guò)抑制PCNA、Bcl-2、MMP-2蛋白表達(dá)從而抑制甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的增殖、遷移侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-345-5p在NSCLC組織中低表達(dá)，而PCNA、Bcl-2及MMP-2蛋白在NSCLC組織中高表達(dá)，提示在NSCLC組織中miR-345-5p的低表達(dá)狀態(tài)可能參與了NSCLC的增殖、遷移與侵襲。本研究在體外細(xì)胞水平上檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-345-5p在NSCLC細(xì)胞A549、NCI-H358、SPC-A-1細(xì)胞系中表達(dá)水平顯著低于正常肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B，且miR-345-5p在A549細(xì)胞系中的表達(dá)顯著低于其他非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，因此，選擇A549細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本研究結(jié)果還表明，上調(diào)miR-345-5p可抑制A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。

為了進(jìn)一步探究miR-345-5p抑制A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的分子機(jī)制，本研究通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)KIF15是miR-345-5p的靶基因。KIF15是KIF家族的成員，屬于驅(qū)動(dòng)蛋白12亞科，對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡有著重要影響[18,19]。據(jù)報(bào)道，KIF15在乳腺癌組織中高表達(dá)，其高表達(dá)可能與腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)[20]；KIF15表達(dá)與肝癌進(jìn)展密切相關(guān)，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和侵襲有關(guān)[21]；KIF15在黑色素瘤的致瘤性中發(fā)揮促進(jìn)作用，其可以作為黑色素瘤的新型診斷分子和治療靶標(biāo)[22]；KIF15可促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖，同時(shí)KIF15高表達(dá)也是膀胱癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[23]；沉默KIF15能顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，集落形成，侵襲和遷移能力[24]。本研究結(jié)果表明，KIF15過(guò)表達(dá)能逆轉(zhuǎn)上調(diào)miR-345-5p對(duì)A549細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的抑制作用。

綜上所述，miR-345-5p通過(guò)靶向KIF15表達(dá)，抑制A549細(xì)胞增殖，遷移和侵襲能力。這為miR-345-5p在NSCLC轉(zhuǎn)移中的重要作用提供了有說(shuō)服力的證據(jù)，且暗示miR-345-5p可能成為NSCLC治療中潛在的分子靶標(biāo)。