不同產(chǎn)地紅花主要成分比較研究

郭繼娜，劉圣紅

（1.新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所，新疆 庫爾勒 841000；2.新疆農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術研究所，新疆烏魯木齊 830091）

紅花為菊科紅花屬植物紅花（Carthamus tinctorius L.）的干燥花[1]，具有活血、化瘀和止痛等功效[2]，是我國傳統(tǒng)中藥材，主要分布于河南、新疆、四川、內(nèi)蒙古、甘肅和云南等地[3]。紅花的化學成分有黃酮類、生物堿和脂肪酸類等物質(zhì)[4]。目前，研究紅花的栽培技術[5]、加工技術[6]、化學成分[7]以及藥理作用[8]的報道比較多，但是在對不同產(chǎn)地紅花的化學成分比較研究較少。

本文以不同產(chǎn)地的紅花為研究對象，采用高效液相色譜法對羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素等4種化學成分進行測定和對比分析，以期為紅花的質(zhì)量評價提供參考。

1 實驗材料與儀器

1.1 樣品

采自河南、云南、新疆和四川等產(chǎn)地的紅花材料，經(jīng)由新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所鑒定。樣品編號和采集地見表1。

表1 紅花樣品來源信息Table 1 Carthamus tinctorius sample source information

1.2 儀器

Agilent 1220 LC高效液相色譜儀（DAD檢測器），十萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多），KQ-250V型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。對照品羥基紅花黃色素A（批號：111637-200905，中國藥品生物制品檢定所）；蘆丁（批號：0080-9705，中國藥品生物制品檢定所）；槲皮素（批號：100081-200907，中國藥品生物制品檢定所）；山柰酚（批號：110861-200405，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，磷酸為優(yōu)級純，水為超純水。

2 試驗方法與結果

2.1 制備

取不同產(chǎn)地的紅花樣品，干燥，研磨成粉末，備用。

2.1.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁、山柰素對照品適量，加入甲醇配置成含對羥基紅花黃色素A 77.6g/mL、槲皮素6.4g/mL、蘆丁46.0g/mL、山柰素12.8g/mL的混合對照品溶液，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取1～9號紅花藥材粉末，精密稱重1.0 g置于具塞錐形瓶內(nèi)，加50 mL甲醇，精密稱定重量，超聲40 min，再次精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18（250 mm 4.6 mm，5m）；柱溫為30℃；流動相：甲醇-0.75%磷酸溶液；檢測波長：360 nm；流速：0.8 mL/min；進樣量：10L；梯度洗脫程序見表2。色譜圖見圖1，在此色譜條件下，理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算不低于3 000。

表2 流動相線性梯度Table 2 Linear gradient of mobile phase

圖1 紅花中4種化學成分的色譜圖Fig.1 Chromatogram diagran of four chemical components in Carthamus tinctorius

2.3 線性關系研究

量取對照品混合溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、8.0 mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻，按“2.2”色譜條件進行測定。以對照品濃度（g/mL）為橫坐標x，以對應峰面積為縱坐標y，繪制回歸曲線，結果見表3。

表3 線性回歸方程及相關數(shù)據(jù)Table 3 Linear regression equation and related data

2.4 精密度試驗

取制備的混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，根據(jù)峰面積計算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為0.68%、0.87%、0.57%和0.62%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

稱取紅花樣品（編號4）1份，按“2.1.2”制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、16 h和24 h進樣，測定峰面積，計算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為1.78%、1.98%、1.86%和2.03%，結果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗

分別稱取1.0 g紅花樣品（編號4）6份，按“2.1.2”制備供試品溶液，進行色譜測定，計算4種成分的RSD值。羥基紅花黃色素A平均含量為6.02 mg，RSD=1.12%；槲皮素平均含量為0.27 mg，RSD=1.27%、蘆丁平均含量為2.13 mg，RSD=1.83%、山柰素平均含量為0.45 mg，RSD=1.64%，結果表明方法重復性良好。

2.7 回收率試驗

稱取6份已知含量的紅花樣品（編號4），每份約0.50 g，分別加入一定量的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁及山柰素對照品，按“2.1.2”制備供試品溶液，測定含量，計算回收率，結果見表4。

表4 紅花加樣回收試驗Table 4 Carthamus tinctorius sample recovery test

2.8 樣品含量測定

取9種不同產(chǎn)地的紅花樣品，各3個重復，按“2.1.2”制備供試品溶液，在“2.2”色譜條件下測定峰面積，代入線性回歸方程，計算對羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，結果取平均值，見表5。

表5 不同產(chǎn)地紅花樣品中的4種成分含量測定Table 5 Determination of four components in Carthamus tinctorius samples from different producing areas

續(xù)表

3 討論

關于紅花成分含量檢測的多為同省份不同產(chǎn)地的紅花多種成分檢測或建立成分含量的檢測方法。黃壯壯等[9]檢測了新疆不同產(chǎn)區(qū)的紅花藥材的6-羥基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A和脫水紅花黃色素B 3種化學成分含量，發(fā)現(xiàn)各個產(chǎn)區(qū)的紅花成分含量存在差異；還有報道云南不同產(chǎn)地紅花揮發(fā)性成分的研究方法[10]；耿維鳳[11]對河南、四川、內(nèi)蒙、新疆和云南5個產(chǎn)區(qū)的紅花中黃色素和紅色素進行對比分析，不同產(chǎn)區(qū)的含量存在明顯差異；吳晶等[12]建立了HPLC雙波長同時檢測紅花中沒食子酸、羥基紅花黃色素A、原兒茶酸、蘆丁和槲皮素5種化學成分含量的方法，靈敏度高；何婷等[3]建立了同時測定紅花中4種化學成分含量的方法，該方法簡便、準確，靈敏度高。

紅花作為藥食同源的中藥材，富含多種活性成分，如黃酮類、生物堿類、甾醇類和聚乙炔類等，其中黃酮類成分是紅花的主要活性成分，有抗炎、抗凝血和抗血栓等功效，主要發(fā)揮活血化瘀、保護急性缺血心肌等作用[13]。黃酮類成分主要包括羥基紅花黃色素A、山柰素、槲皮素、蘆丁、腺苷和芹菜素等。其中，《中國藥典》2020版中將羥基紅花黃色素A和山柰素列為紅花藥材的質(zhì)量指標成分，可用于對紅花藥材質(zhì)量評價[14]。為對比不同產(chǎn)地的紅花藥材質(zhì)量，本試驗選取了河南、云南、新疆和四川等4個紅花主產(chǎn)區(qū)的共9批紅花藥材進行成分含量檢測，采用準確度和靈敏度高的HPLC法同時對的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量進行測定，對比分析不同產(chǎn)區(qū)的紅花藥材中4種化學成分的含量，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的紅花中的成分含量存在差異[15-18]。在本試驗中，紅花中的4種化學成分含量因產(chǎn)地不同而存在較大差異，羥基紅花黃色素A含量在12.183 9～24.972 7 mg/g范圍內(nèi)變化，槲皮素含量在0.072 1～6.122 3 mg/g范圍內(nèi)變化，蘆丁含量在0.787 8～1.347 2 mg/g范圍內(nèi)變化，山柰素含量在0.161 0～0.286 3 mg/g范圍內(nèi)變化。以新疆地區(qū)的紅花藥材中含有的羥基紅花黃色素A含量最高，其次為河南產(chǎn)區(qū)、云南產(chǎn)區(qū)，四川產(chǎn)區(qū)最低；河南產(chǎn)區(qū)的槲皮素含量較高，四川產(chǎn)區(qū)的蘆丁含量較高。這可能是由于受到不同環(huán)境因素、土壤條件和氣候條件等多方面的影響導致不同產(chǎn)區(qū)紅花樣品中的成分含量不同[9,12,19]。本試驗檢測對比了4個不同產(chǎn)區(qū)紅花中羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，以期為研究不同產(chǎn)區(qū)紅花質(zhì)量評價提供參考。