天麻鉤藤加味飲對肝陽上亢型高血壓大鼠的作用研究

李新，丁勻喬，袁名揚，蔣蕾，楊波※，彭海生※

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150076；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)藥學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

高血壓作為全球高發(fā)的慢性疾病，知曉率、控制率和治療率均低[1-3]。目前高血壓人數(shù)驟增，逐漸趨向年輕化，形式較為嚴(yán)峻。Katona Eva[4]研究表明，體內(nèi)ET-1和NO水平失衡是引起血壓變化的重要原因，因此均衡ET-1和NO水平是治療高血壓的關(guān)鍵。西醫(yī)現(xiàn)有治療藥物包括血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、鈣通道阻滯劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑和 受體拮抗劑以及利尿劑。但是西藥治療效果單一，而且副作用大，存在安全隱患[5]。而中藥為天然成分，安全性高，治療存在靈活性，可以根據(jù)患者癥狀進行藥物的調(diào)試使用。

天麻鉤藤加味飲是常用的民間驗方，由天麻、鉤藤、地龍、黃芩、石決明和川牛膝等13味飲片組成，用于肝陽上亢、肝腎陰虛、頭痛目眩的治療，在臨床上廣泛應(yīng)用。研究證明，其主要作用于腎素 血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）控制血壓，降壓效果顯著[6,7]。

本研究通過探討天麻鉤藤加味飲對肝陽上亢型高血壓大鼠的治療作用，確定天麻鉤藤加味飲發(fā)揮作用的途徑，為臨床研究提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

FH2004A電子分析天平（龍騰電子科技）；DMI3000B倒置熒光生物顯微鏡（德國萊卡）；Synefe-1200LC多功能酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器）；BP-98A無創(chuàng)鼠尾動脈血壓測量儀（日本軟?。?。

1.2 動物

36只SPF級SD大鼠，購自長生生物技術(shù)有限公司，均為雄性，體質(zhì)量200～220 g。

1.3 飲片及試劑

天麻9 g、鉤藤12 g、黃芩12 g、石決明18 g、川牛膝12 g、地黃10 g、杜仲9 g、槲寄生9 g、梔子12 g、益母草10g、茯苓9 g、夜交藤10 g、地龍8 g（亳州長征中藥飲片）、制附子200 g（哈爾濱普方藥業(yè)飲片有限公司）。

L-NNA（上海瑞勇）；卡托普利片（常州制藥廠）；NO試劑盒（伊萊瑞特生物科技）；ET-1試劑盒（伊萊瑞特生物科技）。

2 方法

2.1 造模、給藥及分組

2.1.1 制備肝陽上亢型高血壓大鼠模型 給SD大鼠連續(xù)28 d腹腔注射L-NNA 15 mg/（kg d）建立高血壓模型[8]，然后按照生藥量2 g/（kg d）灌胃28 d附子湯，以易怒程度確定肝陽上亢證模型[9]。篩選出造模后血壓高于150 mmHg的大鼠作為成功模型。

2.1.2 藥劑的制備 附子湯的制備：取200 g制附子，加1 000 mL水，浸泡30 min，煎煮2次，每次1.5 h，合并藥液濃縮至500 mL，備用。

天麻鉤藤加味飲的制備：按量稱取13味飲片，加200 mL水，浸泡30 min，煎煮2次，每次煎煮1.5 h；合并藥液按照給藥量進行濃縮，備用。

2.1.3 分組及給藥方式 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分成6組，空白組、模型組、卡托普利組、TGJY低劑量組、TGJY中劑量組、TGJY高劑量組，每組6只?？ㄍ衅绽M按照體重灌胃卡托普利4.5 mg/（kg d）；TGJY低、中、高劑量組按照體重灌胃天麻鉤藤加味飲，按照生藥比為10 g/（kg d）、20 g/（kg d）、25 g/（kg d）；空白組和模型組灌胃去離子水；每天1次，連續(xù)灌胃14 d。灌胃藥量按照公式1計算。

大鼠的劑量=Xmg/kg 70 kg 0.018/0.2 kg=6.3X mg/kg（公式1）。

式中X：人的用量

2.2 飲水量的檢測

每天定時給每組大鼠提供500 mL的水，第2天同一時間計算飲水量，取每周的平均值進行比較。

2.3 血壓的測量

將大鼠固定，用45℃的溫水浸泡鼠尾5 min。靜置5 min后用血壓測量儀測量血壓，每只測量3次，記錄大鼠的收縮壓（SBP）及舒張壓（DBP），計算平均值。分別在造模前后及給藥后測量。

2.4 易激惹程度的評價

每天觀察鼠的狀態(tài)，按照表1進行評分。根據(jù)記錄評分取平均值，評價大鼠的易怒情況。

表1 易怒程度評價指標(biāo)Table 1 Evaluation index of the irritability

2.5 臟器系數(shù)的觀察

末次給藥后禁食不禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，稱體重，生理鹽水灌流，取心、腎以及脾臟進行稱重，計算臟器系數(shù)。

2.6 主動脈形態(tài)學(xué)觀測

取胸主動脈和腹主動脈，4%多聚甲醛固定，脫水，透明，石蠟包埋、切片，蘇木素 伊紅（HE）染色，在顯微鏡下觀察，進行主動脈形態(tài)學(xué)觀測。

2.7 ELISA檢測

心臟取血，在 4℃放置過夜，離心（3 000 r/min）5 min，分離血清置于 20℃下備用，根據(jù)ELISA試劑盒說明書，檢測血清中NO、ET-1含量。

2.8 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 26.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果用x±s表示，對組間樣本進行單因素方差分析及顯著性檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 飲水量結(jié)果

與空白組相比，造模后的大鼠飲水量顯著增加（P＜0.01），與模型組大鼠比較，給藥組大鼠飲水量都有所下降，TGJY高劑量組有顯著性的下降（P＜0.01）。結(jié)果見圖1（第1周造模前，2～5周高血壓造模，6～9周肝陽上亢模型，10～11周給藥）。

圖1 各組大鼠飲水量變化響（±，n=6）Fig.1 Changes in water consumption of rats in each group(±,n=6)

3.2 血壓測定結(jié)果

與空白組相比，造模后的大鼠血壓顯著增加（P＜0.01），增加值大于20 mmHg且都大于150 mmHg，成功得到高血壓大鼠模型。在給藥后，給藥組血壓對比模型組都有所下降，TGJY高劑量組有顯著性的下降（P＜0.05），認為TGJY高劑量的治療效果最好。結(jié)果見表2和表3。

表2 各組大鼠DBP變化（±，n=6）Table 2 Changes in DBP of rats in the each group(±,n=6)

表3 各組大鼠SBP變化（±，n=6）Table 3 Changes in SBP of rats in each group(±,n=6)

3.3 易激惹程度結(jié)果

造模后，大鼠出現(xiàn)易怒程度，得到肝陽上亢型高血壓大鼠模型。給藥后的大鼠易怒程度有所下降，尤其是中劑量組和高劑量組與模型組相比具有顯著性（P＜0.05）；TGJY中劑量組和TGJY高劑量組相比卡托普利組顯著下降（P＜0.05）。所以證明天麻鉤藤加味飲對肝陽上亢型高血壓有治療效果，而且比西藥的治療效果更佳，見表4。

表4 各組大鼠易怒程度變化（±，n=6）Table 4 Changes in irritability of rats in the each group(±,n=6)

3.4 臟器系數(shù)結(jié)果

高血壓對大鼠的腎臟系數(shù)具有一定的影響，對心臟有顯著影響（P＜0.05）；由結(jié)果還可以得到天麻鉤藤加味飲對腎臟也有一定的治療效果，經(jīng)過治療后臟器系數(shù)逐漸趨向空白組大鼠。但是對于脾臟的治療效果并不明顯，見圖2。

圖2 各組大鼠臟器系數(shù)比較（±，n=6）Fig.2 Comparison of organ coefficients of rats in the each group(±,n=6)

3.5 主動脈形態(tài)學(xué)觀測結(jié)果

高血壓模型組大鼠血管內(nèi)膜增厚，結(jié)構(gòu)遭到破壞，出現(xiàn)紊亂。經(jīng)過藥物治療后大鼠主動脈內(nèi)膜趨向光滑，結(jié)構(gòu)變的緊密，纖維排列也有不同程度改善。TGJY中、高劑量組改善效果尤其明顯，見圖3和圖4。

圖3 各組大鼠胸主動脈形態(tài)學(xué)比較（HE 400，n=6）Fig.3 Morphological comparison of thoracic aorta in each group(HE 400,n=6)

圖4 各組大鼠腹主動脈形態(tài)學(xué)比較（HE 400，n=6）Fig.4 Morphological comparison of abdominal aorta in each group(HE 400,n=6)

3.6 ELISA結(jié)果

與模型組相比，給藥組大鼠血清中ET-1濃度降低，NO濃度增加。從表5看，各給藥組與模型組項目相比，均能顯著性提高NO濃度，顯著降低ET-1濃度（P＜0.01）。

表5 各組大鼠NO和ET-1含量比較（±，n=6）Table 5 Comparison of NO and ET-1 contents among groups of rats(±,n=6)

4 討論

高血壓是常見的心血管疾病，對腦、心臟和腎臟等靶器官都有影響，會引起網(wǎng)膜病變、冠心病、腎病和腦卒中等并發(fā)癥[10]。而中醫(yī)講究的肝陽上亢證表現(xiàn)為頭痛、眩暈、耳鳴、急躁易怒、口干舌燥和心悸健忘[11]。張?zhí)m娥等[12]研究表明，地龍中含有的地龍蛋白肽能顯著降低原發(fā)性高血壓（SHR）的血壓（P＜0.05）。劉萍萍等[13]研究表明，地龍降壓膠囊聯(lián)合常規(guī)西藥治療可增強降壓效果。

L-精氨酸是一種一氧化氮合成酶（NOS）抑制劑，能抑制NO的合成，對血管收縮壓產(chǎn)生影響，誘導(dǎo)動物出現(xiàn)高血壓[14]。短時間內(nèi)體內(nèi)出現(xiàn)大量NOS抑制劑，阻礙血管內(nèi)皮細胞生成NO，損害血管結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致動脈血壓升高，而NO的減少會使ET-1的含量增加，NO和ET-1兩者相互作用，使動物出現(xiàn)持續(xù)性高血壓[15]。鄢東紅等[16]研究表明，給自發(fā)性高血壓的大鼠灌胃附子湯后，大鼠出現(xiàn)飲水量增加，旋轉(zhuǎn)時間減短，疼痛閾降低的現(xiàn)象，這與肝陽上亢證患者出現(xiàn)的眩暈、口干、頭痛等臨床特征相符合。實驗結(jié)果表明，模型組大鼠血壓和易怒程度顯著高于空白組（P＜0.05），表明L-NNA結(jié)合附子湯能導(dǎo)致肝陽上亢型高血壓的生成；主動脈HE染色的結(jié)果表明，造模結(jié)束后主動脈的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，內(nèi)膜粗糙，結(jié)構(gòu)紊亂，纖維排列稀疏；ELISA檢測結(jié)果顯示，模型組大鼠NO水平下降，ET-1水平上升，打破了它們之間的平衡關(guān)系。經(jīng)天麻鉤藤加味飲治療后，大鼠血壓明顯下降，飲水量下降，易怒情況減少，主動脈損傷有所恢復(fù)，NO和ET-1水平逐漸趨于平衡，緩解主動脈的壓力，從而使改善大鼠致肝陽上亢型高血壓癥狀。

天麻鉤藤加味飲是民間驗方，方中君藥天麻平肝熄風(fēng)，臣藥鉤藤清熱平肝，其他為佐藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒、清熱定驚功效，對降壓、眩暈、頭痛效果顯著。本研究深入探討了天麻鉤藤加味飲的降壓作用，通過檢測大鼠血清中NO和ET-1的水平探索天麻鉤藤加味飲降壓作用。結(jié)果表明，天麻鉤藤加味飲大鼠血清中NO水平上調(diào)，ET-1水平下調(diào)，表明天麻鉤藤加味飲可以通過調(diào)節(jié)NO和ET-1的平衡，從而降低血管舒張因子對血管的損傷，促進血管功能恢復(fù)，也確定了天麻鉤藤加味飲給藥量25 g/（kg d）效果最好。

綜上所述，天麻鉤藤加味飲可以通過降低高血壓大鼠飲水量、易怒程度、ET-1含量和增加NO含量，改善主動脈形態(tài)受損，從而起到降壓的效果，以改善高血壓引起的癥狀。