某部駐訓(xùn)期間發(fā)熱呼吸道綜合征病原譜監(jiān)測(cè)分析

王曉芹，浮飛翔，于 暢，劉 錦，佟宇浩，湯 芳

病毒性呼吸道感染是指由多種病毒引起的急性呼吸道感染(acute respiratory trac tinfection，ARTI)總稱，引起病毒性呼吸道感染的病原體種類較多，如流感病毒(influenza viruses, IFV)、人副流感病毒(human parainfluenza viruses, HPIV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、人鼻病毒(human rhinovirus，HRV)、人偏肺病毒(human metapneumovirus，HMPV)、人博卡病毒(human bocavirus，HBoV)、人腺病毒(human Adenovirus, HAdV)、人冠狀病毒(human Coronavirus, HCoV)等。本研究擬對(duì)某部駐訓(xùn)期間發(fā)熱呼吸道綜合征(febrile respiratory syndrome, FRS)患者進(jìn)行病毒性呼吸道感染病原學(xué)監(jiān)測(cè)，以了解致病病原體種類和發(fā)病規(guī)律，為開展部隊(duì)ARTI的臨床診斷和預(yù)防控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 采用重大傳染病防治科技重大專項(xiàng)傳染病監(jiān)測(cè)平臺(tái)《發(fā)熱呼吸道綜合征監(jiān)測(cè)技術(shù)方案》中的FRS病例定義：(1)急性感染表現(xiàn)(至少符合下列任何一項(xiàng))，發(fā)熱(從發(fā)病開始有報(bào)告和記錄)，WBC升高或降低或WBC分布異常，寒顫，體溫降低(考慮年齡)；(2)呼吸道臨床表現(xiàn)(至少符合下列任一項(xiàng))，咳嗽(新發(fā)或咳嗽加重)，咳痰，氣短，聽診呼吸音異常(濕啰音、干啰音、哮鳴音、濁音)，呼吸急促，胸痛；(3)胸部X線片提示肺部炎性改變(如肺部片狀陰影或肺實(shí)變影等)。本研究將某部駐訓(xùn)期間(2019年8-11月)符合FRS患者定義的人群共101例納入調(diào)查對(duì)象，該部駐地為南部沿海地區(qū)，屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，夏季高溫多雨，冬季溫和少雨。

1.2 調(diào)查方法 采用回顧性調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查方法，由專業(yè)流調(diào)人員對(duì)FRS病例進(jìn)行面對(duì)面的問(wèn)卷調(diào)查，內(nèi)容包括：(1)基本人口統(tǒng)計(jì)學(xué)信息特征：年齡、性別、籍貫、部別等；(2)流行病史：調(diào)查對(duì)象與FRS患者的密切接觸史、外出史等；(3)臨床癥狀與檢查：發(fā)熱、咳嗽、寒顫、流涕、咽痛、乏力、肌肉酸痛、呼吸困難、腹瀉等臨床癥狀；(4)藥物治療史：藥物名稱、用法、用量、療程；(5)疫苗接種史：疫苗種類、接種時(shí)間。

1.3 檢測(cè)方法 在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及實(shí)驗(yàn)室工作過(guò)程中，均按照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》等相關(guān)規(guī)定，做好生物安全工作。

1.3.1 主要試劑與儀器 咽拭子標(biāo)本采集系統(tǒng)(BD Universal Viral CulturetteTM Transport System)；核酸提取試劑盒(QIAampMiniElute Virus Spin DNA/RNA kit，Qiagen)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(SuperScript Ш RT，Invitrogen)；引物、探針(上海生工公司)；PCR擴(kuò)增儀(Eppendorf)；實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀(7500，ABI)。

1.3.2 標(biāo)本采集 采集101例FRS患者的臨床標(biāo)本。用拭子擦拭咽后壁及扁桃體隱窩、側(cè)壁等處，反復(fù)擦拭3～5次，收集黏膜細(xì)胞，立即送檢。血液標(biāo)本：使用真空EDTA抗凝管和非抗凝管采集血液標(biāo)本各5 ml，存放于-80 ℃冰箱待測(cè)。

1.3.3 標(biāo)本處理 (1)咽拭子標(biāo)本處理：在安全柜內(nèi)打開咽拭子管蓋，用滅菌止血鉗夾住拭子枘，攪拌數(shù)次并擠出棉拭子上的液體，保證細(xì)胞充分脫落，提高檢出率，并分裝管中用于核酸檢測(cè)的標(biāo)本。(2)血液標(biāo)本處理：抗凝血提取外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，-80 ℃凍存?zhèn)溆?；非抗凝血進(jìn)行血清分離、分裝，-80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 核酸檢測(cè) RNA病毒檢測(cè)采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，DNA病毒檢測(cè)采用PCR方法。將核酸(RNA或DNA)分別進(jìn)行IFV(IFV-A、IFV-B和IFV-C)、HPIV(HPIV-1、HPIV-2、HPIV-3和HPIV-4)、HRV、RSV(RSV-A和RSV-B)、HMPV、HBoV、HAdV、HCoV(HCoV-229E、HCoV-OC43 HCoV-HKU1和HCoV-NL63)檢測(cè)。操作方法按照試劑盒說(shuō)明書及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化流程(SOP)操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用%表示，不同組別之間的差異比較采用檢驗(yàn)，<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基本情況 共納入FRS病例101例，均為男性，年齡18～45歲，平均(22.81±4.26)歲，其中18～29歲97例(96.04%)，戰(zhàn)士98例(97.03%)，干部3例 (2.97%)。

2.2 病原檢測(cè)情況 101例FRS咽拭子標(biāo)本中，檢出病毒陽(yáng)性標(biāo)本37例，陽(yáng)性率為36.63%，其中IFV陽(yáng)性率最高26.73%(27例)，其后依次為HPIV 3.96%(4例)、RSV 2.97%(3例)、HRV 2.97%(3例)、HMPV 1.98%(2例)；HBoV、HAdV、HCoV均未檢出陽(yáng)性標(biāo)本。27例IFV陽(yáng)性標(biāo)本中，IFV-B 26例，IFV-A H3N2 1例。4例HPIV陽(yáng)性標(biāo)本中，HPIV-3 3例，HPIV-11例。3例RSV陽(yáng)性標(biāo)本均為RSV-A。37例陽(yáng)性標(biāo)本中，2例標(biāo)本存在混合感染，檢出率為5.41%，分別為IFV-B和RSV、IFV-B和HRV混合感染。

2.3 臨床癥狀情況 101例FRS病例中，均出現(xiàn)發(fā)熱癥狀(≥37.5 ℃)，平均體溫(38.4±0.50)℃，均未出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐等消化道癥狀，無(wú)重癥病例報(bào)道。部分病例伴有咽痛(28.71%)、咳嗽(28.71%)、頭痛(35.64%)、乏力(49.50%)、咳痰(14.85%)、寒顫(21.78%)、流涕(23.76%)、肌肉酸痛(38.61%)、扁桃體腫大(12.87%)等癥狀，且咳嗽(=26.968，=0.000)、咽痛(=26.968，=0.000)、乏力(=12.865，=0.000)、頭痛(=17.901，=0.000)、肌肉酸痛(=10.704，=0.001)5種癥狀在陽(yáng)性病例組與陰性病例組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

3 討 論

FRS是一組以發(fā)熱、咳嗽、咳痰、寒顫等具有相似臨床癥狀和體征的呼吸系統(tǒng)疾病，其中ARTI是人類最常見的傳染性疾病之一，90%以上的ARTI是由病毒引起的。病毒性呼吸道感染具有發(fā)病率高、傳染性強(qiáng)、傳播速度快、流行范圍廣、病原體不斷變化的特點(diǎn)，感染率在不同國(guó)家或地區(qū)、不同時(shí)間或季節(jié)、不同人群中分布特征有所不同，特別是一系列新發(fā)現(xiàn)的病原體也被認(rèn)為與ARTI相關(guān)，如SARS-CoV2、MERS-CoV、H7N9禽流感和SARS-CoV等，疾病的迅速傳播給人類健康和世界經(jīng)濟(jì)造成巨大負(fù)擔(dān)。部隊(duì)是一個(gè)特殊群體，由于人群聚集性、流動(dòng)性、多元性等特點(diǎn)，很容易發(fā)生疫情并造成區(qū)域性暴發(fā)流行。因此，開展駐訓(xùn)部隊(duì)官兵呼吸道感染病原學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)提高部隊(duì)?wèi)?zhàn)斗力具有重要意義。

3.1 FRS病例臨床特點(diǎn)分析 本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)RS所有病例均有發(fā)熱癥狀，以咳嗽、咽痛、頭痛、乏力、肌肉酸痛等癥狀為主，與病原檢測(cè)陰性病例相較，病原陽(yáng)性病例更容易出現(xiàn)上述癥狀，提示病原診斷不明確時(shí)，加強(qiáng)對(duì)癥治療是有效和必要的。由于不同病原所致的ARTI臨床癥狀相似，對(duì)于陰性病例可重復(fù)檢測(cè)或擴(kuò)大病原譜檢測(cè)范圍，尋找感染病原，為鑒別診斷、臨床救治和預(yù)防控制提出針對(duì)性更強(qiáng)的建議。

3.2 FRS病例病原譜監(jiān)測(cè)分析 本研究結(jié)果顯示，101例FRS病例標(biāo)本中，呼吸道病毒陽(yáng)性檢出率為36.63%，主要優(yōu)勢(shì)毒株與駐地流感監(jiān)測(cè)結(jié)果一致。縱觀全國(guó)FRS調(diào)查顯示，IFV也是引起我國(guó)大部分地區(qū)FRS最常見的病毒性病原體和呼吸道感染的主要原因。IFV感染病例在嚴(yán)重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection, SARI)病例數(shù)中約占13%，IFV高峰期有47%的SARI病例為IFV感染者。我國(guó)IFV具有明顯地域性、季節(jié)性特征，南方地區(qū)存在春季、夏季和冬季三個(gè)流行高峰，北方地區(qū)存在春季、冬季兩個(gè)流行高峰，優(yōu)勢(shì)病毒株為IFA-H3N2、IFA-H1N1、IFB周期性更替流行或共同流行。部隊(duì)ARTI病原學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，呼吸道病毒陽(yáng)性檢出率為14.79%～44.81%，其中以IFB、IFA、HAdV檢出率最高。國(guó)家CDC對(duì)ARTI病原學(xué)監(jiān)測(cè)表明，呼吸道病毒陽(yáng)性檢出率為34.8%，其中IFV檢出率最高34.8%，5歲以下兒童最高46.9%，5～17歲降至30.2%，成年為26.9%，老年25.1%。馮錄召在ARTI住院病例中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IFV是成年和老年人群的優(yōu)勢(shì)病原，RSV是2歲以下兒童最常見的病毒性病原，年齡組越小，病毒多樣性越明顯。

3.3 FRS病例監(jiān)控及預(yù)防建議 基于本次調(diào)查，提出以下建議：(1)在部隊(duì)集訓(xùn)時(shí)，要及時(shí)掌握駐地地理環(huán)境、氣候條件及疾病流行情況，監(jiān)測(cè)分析訓(xùn)練期間可能出現(xiàn)的FRS疫情，加強(qiáng)衛(wèi)生防疫力量配置，嚴(yán)格落實(shí)體溫監(jiān)測(cè)、疫情報(bào)告、消毒隔離、預(yù)防用藥等制度，提高呼吸道傳染病防控意識(shí)和能力；(2)新兵入伍后，訓(xùn)練強(qiáng)度較大，生活作息緊張，心理負(fù)擔(dān)較重，對(duì)駐地氣候條件及環(huán)境不適應(yīng)，是呼吸道傳染病防控重點(diǎn)人群，應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)新兵健康宣教，采取預(yù)防性措施；(3)出現(xiàn)FRS集中暴發(fā)時(shí)，建議采用高通量檢測(cè)技術(shù)和宏基因組測(cè)序技術(shù)等檢測(cè)方法以便更全面地檢測(cè)呼吸道病原菌，如低熱者發(fā)病3～6 d內(nèi)采集標(biāo)本可能更有利于病原體的檢出，更有利于達(dá)到防控呼吸道傳染病、指導(dǎo)臨床用藥及預(yù)測(cè)預(yù)警目的。