血清熱休克蛋白27與冠心病的相關(guān)性研究

劉海亮，水之源，郭瀲，史九波，程治軍，王輝宇，趙光煊

(三門峽市中心醫(yī)院 a.心內(nèi)科；b.檢驗(yàn)科，河南 三門峽 472000)

隨著人口老齡化，我國心血管疾病患病率呈持續(xù)上升態(tài)勢，其中冠心病(coronary heart disease，CHD)2020年患病達(dá)1 139萬[1]，一級預(yù)防刻不容緩，關(guān)于潛在危險(xiǎn)因素或血管內(nèi)皮保護(hù)因子的研究炙手可熱。血清熱休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)作為小分子熱休克蛋白家族中的一員[2]，能調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)[3]，調(diào)控蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及代謝，具有防御熱休克、氧化應(yīng)激作用，影響腫瘤壞死因子-α對細(xì)胞的損傷[4]，進(jìn)而影響炎癥反應(yīng)[5]，調(diào)控細(xì)胞的凋亡等[6]。近年研究發(fā)現(xiàn)HSP27與頸動脈內(nèi)中膜厚度(intima media thickness，IMT)[2]、雌激素[7]、心力衰竭[5,8]、腫瘤[9-10]等有關(guān)，但關(guān)于其與CHD關(guān)系的研究不多。本研究通過分析血清HSP27水平與CHD的相關(guān)性，旨在尋找CHD的預(yù)測因子。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2020年7月至2021年8月在三門峽市中心醫(yī)院心內(nèi)科住院的300例接受冠狀動脈造影術(shù)(coronary arteriography，CAG)患者，其中CHD 240例，依據(jù)臨床診斷分為穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)組、不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)組和急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)組。SAP組85例，其中男44例，女41例；UAP組74例，其中男41例，女33例；AMI組81例，其中男47例，女34例；余60例CAG結(jié)果正常者為對照組，其中男36例，女24例。同時排除心肌病、瓣膜病、不明原因的心律失常、腫瘤、急性腦血管病、感染性疾病、免疫性疾病、各種原因引起心功能不全及肝、腎功能異?；颊?。所有患者簽署知情同意書。

1.2 資料搜集收集患者入院次日空腹靜脈血5 mL加入干燥真空管，室溫放置2 h后，以3 000 r·min-1離心20 min，取上清液置于-80 ℃保存待測，以酶聯(lián)免疫吸附法測定血清HSP27水平，并由雙人進(jìn)行質(zhì)控。人HSP27試劑盒購自上海江萊生物科技公司。采用AU5800全自動生化分析儀測定生化指標(biāo)、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、甘油三酯、血糖、C反應(yīng)蛋白等。收集患者肌酐、尿素氮等資料。

1.3 CAG取右側(cè)橈動脈途徑，采用Judikin’s導(dǎo)管技術(shù)進(jìn)行造影，由2名介入科高級職稱醫(yī)生對結(jié)果進(jìn)行判讀及質(zhì)控。CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)為CAG顯示左主干、前降支、回旋支、右冠狀動脈中任何一支血管管腔狹窄大于50%。CAG后按照Gensini積分對左主干進(jìn)行權(quán)重，左主干狹窄>50%時，記錄為雙支病變，余任何一支血管狹窄>50%時記為單支病變。

2 結(jié)果

2.1 基線資料4組患者基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 CHD組與對照組基線資料比較

2.2 生化指標(biāo)水平AMI組血清HSP27、低密度脂蛋白水平高于對照組，低密度脂蛋白水平高于UAP組，高密度脂蛋白水平低于對照組、SAP組，C反應(yīng)蛋白高于對照組、SAP組、UAP組(P<0.05)。UAP組中高密度脂蛋白水平低于對照組，C反應(yīng)蛋白高于對照組、SAP組(P<0.05)。SAP組C反應(yīng)蛋白高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 CHD組與對照組相關(guān)生化指標(biāo)水平比較

2.3 不同冠狀動脈病變程度組與對照組HSP27、C反應(yīng)蛋白水平三支病變組HSP27水平高于對照組(P<0.05)；單支、雙支、三支病變組C反應(yīng)蛋白水平均高于對照組(P<0.05)，單支、雙支、三支病變組間HSP27、C反應(yīng)蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同冠狀動脈病變程度患者與對照組HSP27、C反應(yīng)蛋白水平比較

2.4 多因素分析以是否發(fā)生CHD為因變量(病例=1，對照=0)，經(jīng)成組logistic回歸分析進(jìn)入回歸方程的自變量是血清HSP27、高血壓(有=1，無=0)、高脂血癥(有=1，無=0)、超重(有=1，無=0)、糖尿病(有=1，無=0)、睡眠呼吸暫停綜合征(有=1，無=0)、C反應(yīng)蛋白，得到回歸方程為：

Y=1.305-2.411X1+2.311X2+1.486X3+1.356X4+

2.416X5+1.254X6+3.232X7

式中：X1為HSP27；X2為高血壓；X3為高脂血癥；X4為超重；X5為糖尿病；X6為睡眠呼吸暫停綜合征；X7為C反應(yīng)蛋白。

經(jīng)logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清HSP27是CHD的保護(hù)性因子(P<0.05)，高血壓、高脂血癥、超重、糖尿病、睡眠呼吸暫停綜合征、C反應(yīng)蛋白均是CHD的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

表4 回歸方程中的變量

2.5 相關(guān)性分析經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，血清HSP27與體質(zhì)量指數(shù)、C反應(yīng)蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、血糖呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與高密度脂蛋白呈正相關(guān)(r=0.642，P<0.05)。見表5。

表5 HSP27與其他危險(xiǎn)因素的Pearson相關(guān)性分析

3 討論

HSP是一組生理狀態(tài)下弱表達(dá)，當(dāng)機(jī)體面對組織代謝異常、應(yīng)激性刺激或病理性改變時被特異性上調(diào)的蛋白[11]。HSP27相對分子質(zhì)量約為27 kDa，在各細(xì)胞、器官組織普遍存在，具有結(jié)合、穩(wěn)定細(xì)胞骨架等功能，能通過活化NF-κB來調(diào)節(jié)包括血管壁炎癥直接相關(guān)的基因的表達(dá)[3]，參與細(xì)胞的生存、凋亡，又被稱作細(xì)胞內(nèi)分子伴侶，為近年研究的熱點(diǎn)。有研究通過對186例接受了超聲頸動脈IMT測量的2型糖尿病患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，IMT陽性組的HSP27水平高于IMT陰性組，并且血清HSP27水平與頸動脈IMT呈正相關(guān)，即使調(diào)整了收縮壓、舒張壓、總膽固醇、C反應(yīng)蛋白及發(fā)病年齡等因素后，HSP27仍與2型糖尿病的頸動脈IMT獨(dú)立相關(guān)，校正后的優(yōu)勢比為1.085，最終得出HSP27是2型糖尿病患者亞臨床動脈粥樣硬化的獨(dú)立預(yù)測因子的結(jié)論[2]。有研究顯示頸動脈硬化患者的血清HSP27水平低于健康對照組，提出HSP27對心血管系統(tǒng)的細(xì)胞外作用為抗動脈粥樣硬化[12-13]。動物實(shí)驗(yàn)顯示動脈粥樣硬化病變負(fù)荷與血清HSP27水平之間存在負(fù)相關(guān)，HSP27在動脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)隨著病理階段的進(jìn)展而減少[14-15]。有研究顯示，在急性腦缺血后，大腦中的 HSP27水平升高，并且通過抗氧化、抗炎、抗細(xì)胞凋亡等在神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)中發(fā)揮重要作用[16]。陳偉等[17]、韓百合等[8]在對心力衰竭患者的研究中發(fā)現(xiàn)，HSP27水平與左心收縮功能、舒張功能呈負(fù)相關(guān)，與左心室舒張末期內(nèi)徑、紐約心臟病協(xié)會分級、N-末端腦鈉肽前體呈正相關(guān)，HSP27是預(yù)測心力衰竭患者發(fā)生主要不良心血管事件的危險(xiǎn)因素。

本研究結(jié)果顯示，AMI組的HSP27、C反應(yīng)蛋白水平高于對照組，但心絞痛組與對照組HSP27水平，以及CHD組內(nèi)HSP27水平相比，均無明顯差異。推測在AMI時，高應(yīng)激狀態(tài)、C反應(yīng)蛋白等炎癥因子的大量釋放誘發(fā)了HSP27水平的代償性增高。CHD組內(nèi)HSP27水平無明顯差異，表明在存在動脈粥樣硬化導(dǎo)致的固定狹窄時，機(jī)體HSP27水平未改變，提示HSP27可能與冠狀動脈的斑塊穩(wěn)定性無關(guān)，與Seibert等[18]的研究結(jié)論具有一致性，但與湯鑫等[19]的研究結(jié)果不一致，推測可能與本研究中患者合并基礎(chǔ)病較多有關(guān)，特別是睡眠呼吸暫停綜合征的存在，可能缺氧、缺血的刺激干擾了HSP27的水平。本研究結(jié)果顯示，AMI組血清低密度脂蛋白水平高于對照組、UAP組，高密度脂蛋白水平低于對照組、SAP組，UAP組中高密度脂蛋白水平低于對照組，說明高密度脂蛋白越低，越易出現(xiàn)不穩(wěn)定的斑塊；相對于心絞痛及健康者，不管斑塊是否穩(wěn)定，高低密度脂蛋白水平患者更易發(fā)生AMI。按冠狀動脈病變程度對CHD患者進(jìn)行分組后發(fā)現(xiàn)，三支病變組中HSP27水平高于對照組，提示HSP27與冠狀動脈的嚴(yán)重范圍及程度有關(guān)。本研究通過不同分組方法進(jìn)一步研究C反應(yīng)蛋白水平，結(jié)果提示CHD患者的冠狀動脈血管的C反應(yīng)蛋白水平大于無CHD患者，C反應(yīng)蛋白水平可能與冠狀動脈病變處斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，但與冠狀動脈病變的范圍無關(guān)。logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清HSP27是CHD的保護(hù)性因子，高血壓、高脂血癥、超重、糖尿病、睡眠呼吸暫停綜合征、C反應(yīng)蛋白是CHD的危險(xiǎn)因素；經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清HSP27與體質(zhì)量指數(shù)、C反應(yīng)蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、血糖呈負(fù)相關(guān)，與高密度脂蛋白呈正相關(guān)。HSP27抗動脈硬化的可能機(jī)制為：機(jī)體在缺血、缺氧、高壓力等急性應(yīng)激狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的部分蛋白變性，引起機(jī)體HSP27水平上調(diào)，誘導(dǎo)其磷酸化[4]。磷酸化的HSP27，在細(xì)胞內(nèi)通過抑制Bax、上調(diào)谷胱甘肽還原酶、降低活性氧等來穩(wěn)定細(xì)胞膜的完整及活力[7]，激活NF-κB信號通路以誘導(dǎo)粒細(xì)胞-單核細(xì)胞集落刺激因子，與ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1，從而促進(jìn)總膽固醇外流[20]，還可抑制巨噬細(xì)胞對乙?；牡兔芏戎鞍椎臄z取能力[2]，抑制泡沫細(xì)胞的形成，通過p38信號通路刺激白細(xì)胞介素-10的分泌，降低清道夫受體A的表達(dá)，調(diào)控促炎因子的釋放，抑制炎癥反應(yīng)的進(jìn)程[21]。磷酸化的HSP27可增強(qiáng)肌動蛋白的重聚，同時抑制其降解，加強(qiáng)纖維狀肌動蛋白的聚集能力，最終達(dá)到抑制動脈硬化進(jìn)展的目的[7]。Shi等[22]的研究顯示，用重組HSP25接種小鼠可提高HSP27天然IgG自身抗體水平，減少動脈粥樣硬化形成，減輕斑塊炎癥，降低總膽固醇水平。Kim等[23]通過構(gòu)建大鼠缺血/再灌注模型發(fā)現(xiàn)，靶向給藥重組HSP27可抑制缺血性損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，減少纖維化面積，并改善心肌梗死大鼠的心臟功能，促進(jìn)心肌梗死后的恢復(fù)，提示血清HSP27有望成為抗動脈硬化治療的靶點(diǎn)。

綜上所述，血清HSP27水平與AMI及冠狀動脈三支病變有關(guān)，是CHD的保護(hù)性因子。血清中HSP27水平對預(yù)測CHD的嚴(yán)重性有一定價值，隨著循證醫(yī)學(xué)的深入研究，血清HSP27有望作為CHD早期預(yù)防和判斷預(yù)后甚至治療的靶點(diǎn)。本研究的局限性在于未對AMI進(jìn)一步分組研究，缺乏對CHD患者的隨訪及動態(tài)對比研究，可能會對試驗(yàn)結(jié)果造成一定偏倚。今后應(yīng)進(jìn)一步設(shè)計(jì)多中心的隨機(jī)對照研究，加入隨訪研究數(shù)據(jù)及亞組分析結(jié)果，進(jìn)一步探討HSP27對CHD病程的影響及靶向治療的可能性。