雅士勇制劑對(duì)夏季公豬精液保存時(shí)間的影響

趙勤輝，黃文輝，郭承建

（意大利亞士可化工大藥廠，上海 201100）

引言

豬的繁殖性能受到環(huán)境、疾病、營(yíng)養(yǎng)及管理等各方面的影響，其中環(huán)境的影響，尤其是夏季高溫高濕的影響巨大，并且已經(jīng)有大量的研究報(bào)道，熱應(yīng)激對(duì)公豬、母豬的繁殖和育肥豬的生長(zhǎng)產(chǎn)生負(fù)面的影響。熱應(yīng)激會(huì)造成公豬性欲下降，精液品質(zhì)降低；后備母豬初情期延遲，初情率低；斷奶母豬發(fā)情率低，斷配間隔延長(zhǎng)；哺乳母豬采食量下降，哺乳能力下降；育肥豬采食量下降，料重比升高，生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題。所以一到夏季，防暑降溫工作是豬場(chǎng)日常工作的重中之重。

左旋肉堿是由賴氨酸和蛋氨酸等組成的天然物質(zhì)，在肝臟、腎臟中合成。動(dòng)物能夠部分合成自己所需的左旋肉堿，但它的主要來(lái)源是日常攝入。左旋肉堿在脂質(zhì)代謝中非常重要，它將長(zhǎng)鏈脂肪酸帶入線粒體進(jìn)行β氧化，從而產(chǎn)生正常精子功能所必需的能量（ATP）。左旋肉堿對(duì)生物體的解毒也非常重要，它可以清除線粒體乙酰輔酶A，過(guò)量的乙酰輔酶A對(duì)生物體是有害的。左旋肉堿還在抗氧化中發(fā)揮重要作用，因?yàn)樗苊饬擞啥嗖伙柡椭舅徇^(guò)氧化引起的細(xì)胞膜氧化損傷。雄性生殖系統(tǒng)暴露于氧化應(yīng)激下會(huì)導(dǎo)致精子損傷和線粒體完整性喪失。

在許多文獻(xiàn)中可以找到關(guān)于左旋肉堿對(duì)精子積極作用的信息，Jeulin等人的研究表明，肉堿在附睪液中的含量很高，附睪尾部中左旋肉堿的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于附睪頭部，并且隨著精子在附睪中的逐漸發(fā)育成熟，精子中左旋肉堿的水平也在逐步提高，附睪中左旋肉堿的水平與精子的成熟有密切的關(guān)系。Claudette等人的研究表明，附睪不同區(qū)域段精子活力與左旋肉堿的濃度存在明顯的正相關(guān)，左旋肉堿在精子的活化以及提升其運(yùn)動(dòng)性能中起到了重要作用。Yang等人的研究表明，在17℃常溫保存公豬精液時(shí)，添加左旋肉堿可有效維持公豬精子活力。在冷藏精液中，左旋肉堿對(duì)公豬精子質(zhì)量的影響主要是通過(guò)提高精子質(zhì)膜完整性，提升抗氧化能力和提高線粒體活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。呂艷秋等人的研究表明， 添加肉堿可以改善凍融豬精子的抗凋亡能力和精卵結(jié)合能力。

為研究左旋肉堿營(yíng)養(yǎng)液“雅士勇”制劑對(duì)夏季公豬精液的保存時(shí)間，抗凋亡能力的影響，特開(kāi)展此項(xiàng)研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

左旋肉堿營(yíng)養(yǎng)液 “雅士勇”制劑由意大利亞士可化工大藥廠生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)于2021年7—8月在廣東某現(xiàn)代化公豬站進(jìn)行，選取30頭1～2歲長(zhǎng)白公豬做研究，試驗(yàn)組和對(duì)照組各15頭。試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧上，每天每頭公豬飼喂雅士勇30 mL，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧。其他按正常的公豬站管理，采精頻率相同，每2周采精3次。連續(xù)飼喂45 d后采取每頭公豬的精液稀釋后做對(duì)比觀察，一直到第7天。

1.3 精液稀釋和評(píng)估

精液稀釋粉采用全能健Z，購(gòu)自中國(guó)牧工商集團(tuán)有限公司。稀釋后每劑精子規(guī)格定為80 mL，有效精子數(shù)30億。稀釋后在室溫下放置1 h后放入17℃儲(chǔ)藏，采用目測(cè)法，分別在稀釋后0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、第7天（168 h）后，每份精液樣品采20 μL在38℃恒溫加 熱 板 回溫2 min，之后在16×10倍顯微鏡下觀察精子的活力，對(duì)照組和試驗(yàn)組的精子評(píng)分由同一人、同一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行盲評(píng)。所有精液每12 h輕輕搖勻并翻轉(zhuǎn)1次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用Excel（2010）軟件進(jìn)行整理，利用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行單因素方差分析。精子活力是指直線運(yùn)動(dòng)精子所占百分率，100%為1分，90%為0.9分，以此類推；精子存活率是指各時(shí)間點(diǎn)精子活力/稀釋后0 h精子活力×100%。

2 結(jié)果

2.1 雅士勇制劑對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間下精子活力的影響

雅士勇制劑對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間下精子活力的影響見(jiàn)圖1。

從圖1可以看出，雅士勇制劑組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)精子活力都優(yōu)于對(duì)照組，在稀釋后0 h、12 h、60 h后兩組之間精子活力差異顯著（P＜0.05），稀釋后24 h、36 h、48 h后兩組之間精子活力差異極顯著（P＜0.01）。試驗(yàn)組到第7天精液活力還高于0.6，符合配種標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 雅士勇對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間下精子活力的影響

2.2 雅士勇制劑對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間下精子存活率的影響

雅士勇制劑對(duì)不同存儲(chǔ)時(shí)間下精子存活率的影響見(jiàn)表1。

從表1可以看出，雅士勇組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的精子存活率均優(yōu)于對(duì)照組，其中稀釋后36 h、48 h精子存活率差異顯著。說(shuō)明雅士勇組相比對(duì)照組在48 h內(nèi)精子細(xì)胞凋亡較慢，精子細(xì)胞抗逆性強(qiáng)于對(duì)照組。

表1 雅士勇對(duì)不同存儲(chǔ)時(shí)間下精子存活率的影響 %

3 討論

夏季公豬精液質(zhì)量差是當(dāng)前豬場(chǎng)普遍面臨的一個(gè)問(wèn)題。公豬的理想環(huán)境溫度是18～20℃，超過(guò)27℃，公豬的體溫和呼吸頻率顯著增加，精子畸形率增加。McNitt等人的研究表明，將公豬飼養(yǎng)在33℃、50%濕度的環(huán)境下72 h，精子畸形率急劇上升。Suriyasomboon等人的研究表明，將杜洛克公豬飼養(yǎng)在濕度大于75%、溫度持續(xù)26～29℃超過(guò)4周或以上，公豬精子畸形率顯著提高。所以，如何在夏季做好防暑降溫工作是公豬飼養(yǎng)管理的重點(diǎn)工作。從一年四季上看，夏秋季公豬精液對(duì)冷藏保存更加敏感、抗逆性差。

目前豬場(chǎng)的主要通風(fēng)降溫方式有空調(diào)、風(fēng)機(jī)、水簾、噴霧等。在炎熱的夏季，常規(guī)的通風(fēng)降溫系統(tǒng)因受制于風(fēng)機(jī)可靠性、空氣濕度、水簾水的供應(yīng)壓力、水簾墻通風(fēng)率、成本因素等一些客觀因素的影響，降溫效果不理想，所以，公豬熱應(yīng)激還是非常普遍，經(jīng)常出現(xiàn)因熱應(yīng)激而導(dǎo)致的精液品質(zhì)下降問(wèn)題。

當(dāng)前豬集中供精站蔚然成風(fēng)，行業(yè)內(nèi)有一些優(yōu)秀的商品化供精站。從母豬場(chǎng)的角度來(lái)看，外購(gòu)豬精最擔(dān)心的是經(jīng)過(guò)物流、顛簸、檢測(cè)、消毒、備貨等環(huán)節(jié)或原因，豬精到使用的時(shí)候精子活力指標(biāo)能不能達(dá)標(biāo)的問(wèn)題，如不能達(dá)標(biāo)，則影響豬場(chǎng)正常的生產(chǎn)工作。

雅士勇制劑含左旋肉堿、氨基酸、維生素、山梨糖醇等多種成分，可以提升精子細(xì)胞對(duì)脂肪酸的利用，增加精子細(xì)胞活力，增加公豬食欲和性欲，促進(jìn)激素的合成，增加豬只抗逆性，通腎利尿。從本次研究來(lái)看，該公豬站通風(fēng)降溫系統(tǒng)設(shè)備先進(jìn)，熱應(yīng)激不是很嚴(yán)重，但雅士勇制劑還是可以極顯著提升稀釋后24～48 h精子活力，顯著提升稀釋后24～36 h精子的存活率。出現(xiàn)以上現(xiàn)象的機(jī)制可能是雅士勇制劑中含有的左旋肉堿等成分促進(jìn)精子細(xì)胞脂肪酸的利用，清除線粒體乙酰輔酶A，抗氧化，提高精子質(zhì)膜完整性和線粒體活性等綜合因素作用的結(jié)果。在豬場(chǎng)實(shí)際配種生產(chǎn)中，使用稀釋后48 h內(nèi)的精液進(jìn)行配種的比例很高。這個(gè)研究為解決夏季公豬精液活力低，畸形率高，保存時(shí)間短提供了一個(gè)很好的參考。

4 結(jié)論

在夏季，公豬連續(xù)飼喂45 d左旋肉堿營(yíng)養(yǎng)液雅士勇制劑后可延長(zhǎng)公豬精液的保存時(shí)間，提升精子細(xì)胞的抗凋亡能力。