新疆克孜勒蘇柯爾克孜地區(qū)帕米爾牦牛mtDNA COⅠ的遺傳多樣性分析

高勤學(xué)，楊文科，蒙永剛，牙生江·納斯?fàn)枺I買提吐爾干·庫瓦西

1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動物科技學(xué)院，江蘇 泰州 225300；

2.克孜勒蘇柯爾克孜自治州畜牧獸醫(yī)局，新疆 阿圖什 845350；

3.克孜勒蘇柯爾克孜自治州畜禽繁育改良站，新疆 阿圖什 845350

牦牛是主要生長在以青藏高原為中心及其比鄰的高山、亞高山等海拔2 000—5 500 m以上的高原地區(qū)的珍奇稀有牛種［1］。帕米爾牦牛主要分布于新疆克孜勒蘇柯爾克孜自治州（以下簡稱克州）、喀什地區(qū)塔什庫爾干縣境內(nèi)，是經(jīng)過長期自然選擇和人工選育形成的乳肉兼用型的牦牛品種。2021年10月，經(jīng)過國家畜禽遺傳資源委員會現(xiàn)場鑒定審核，帕米爾牦牛被農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為畜禽遺傳資源，并入選全國十大新發(fā)現(xiàn)畜禽遺傳資源之一。帕米爾牦牛形成歷史悠久，血統(tǒng)來源清晰，群體外貌特征與生產(chǎn)性能基本一致，主要性狀遺傳穩(wěn)定，且耐粗飼，對帕米爾高原高海拔的自然生態(tài)環(huán)境具有良好的適應(yīng)性。然而，由于受帕米爾高原地區(qū)高寒、干旱、自然災(zāi)害等自然環(huán)境的影響，先前的帕米爾牦牛個體整體偏小。隨著人民生活水平的不斷提高，國民對高品質(zhì)牛肉及奶制品的需求日益增多，帕米爾牦牛因其牛乳的乳蛋白含量高［2］，越來越受到人們的關(guān)注，同時牦牛肉價格也不斷上漲。為了增加產(chǎn)肉量和牧民的收入，近幾年帕米爾牦牛主產(chǎn)區(qū)也陸續(xù)開始對帕米爾牦牛進(jìn)行雜交改良，希望改良帕米爾牦牛的體型。自2008年以來，克州3個縣市分別從青海、西藏以及新疆巴音郭楞蒙古自治州和靜縣引進(jìn)種公牦牛共計1 125頭，對帕米爾牦牛進(jìn)行遺傳改良。目前，克州大約有青海高原牦牛、西藏高山牦牛、巴州牦牛的雜交后代約2萬頭。從整體上看，雜交個體普遍較沒有引種的阿合奇縣牦牛大，雜交改良的效果已經(jīng)顯現(xiàn)。此外，不同海拔地區(qū)的牦牛與帕米爾牦牛雜交改良，是否會改變新疆帕米爾牦牛的遺傳多樣性和高原低氧適應(yīng)性等并不明確，因此急需通過測序等手段分析帕米爾牦牛群體的遺傳多樣性水平和進(jìn)化關(guān)系。

線粒體細(xì)胞色素c氧化酶亞基Ⅰ（cytochrome oxidase Ⅰ，COⅠ）是線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）的一段蛋白質(zhì)編碼基因，也是線粒體13個蛋白編碼基因中研究最為透徹的基因之一［3］，具有相對保守與變異穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可用于區(qū)分親緣關(guān)系相近的物種，因此被廣泛應(yīng)用于研究物種的遺傳多樣性和群體結(jié)構(gòu)［4-5］。翁茁先等［6］利用線粒體COⅠ基因?qū)ξ覈鵀豕请u的遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了系統(tǒng)分析研究；向超等［7］對中甸牦牛mtDNAND6和COⅢ基因的全序列進(jìn)行測定，分析其遺傳多樣性及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，進(jìn)一步證實了應(yīng)將牦牛和野牦牛劃分為牛亞科牦牛屬；郭嬌等［8］對西藏牦牛的mtDNACOⅠ基因全序列進(jìn)行測序，研究西藏牦牛的群體遺傳多樣性及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系。本研究以帕米爾牦牛中心產(chǎn)區(qū)——克州阿克陶縣、阿圖什市、阿合奇縣的牦牛群體為研究對象，測定其線粒體COⅠ基因序列，通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹來分析其遺傳多態(tài)性。這也是帕米爾牦牛被正式命名以來，首次對其遺傳多樣性和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行的研究。旨在為畜禽遺傳資源的保護(hù)及開發(fā)提供參考依據(jù)，為下一步建立保種場、建設(shè)良種繁育體系奠定基礎(chǔ)，同時也為推動當(dāng)?shù)仃笈．a(chǎn)業(yè)的振興提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和試驗材料

選取來自帕米爾牦牛中心產(chǎn)區(qū)的克孜勒蘇柯爾克孜自治州的阿克陶縣布倫口鄉(xiāng)、阿圖什市哈拉峻鄉(xiāng)、阿合奇縣蘇木塔什鄉(xiāng)的成年健康牦牛115頭（表1），使用EDTA抗凝管采集牦牛新鮮靜脈血樣5 mL，放入4℃冰盒中帶回實驗室，于-20℃保存?zhèn)溆?。血液基因組DNA提取試劑盒購自無錫百運(yùn)納米科技有限公司；DL2000 DNA Marker購自寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂粉和核酸染料購自南京擎科生物科技有限公司；QuickTaqHS Dye-Mix購自東洋紡（上海）生物科技有限公司；凝膠回收試劑盒購自無錫百運(yùn)納米科技有限公司；Nano-Drop 2000超微量分光光度計和PCR儀（ABI system Veriti?96-Well Fast Thermal Cycler）購自賽默飛世爾公司；DYY-6C型電泳儀購自北京六一儀器廠。

表1 試驗牦牛類群、數(shù)量及采樣地點(diǎn)Table 1 Test yak groups,number and sampling location

1.2 基因組提取、PCR擴(kuò)增及COⅠ基因測序

使用血液基因組DNA提取試劑盒提取牦牛血液的基因組DNA。使用NanoDrop 2000超微量分光光度計檢測DNA濃度和質(zhì)量，用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度后，于-20℃保存?zhèn)溆?。以牦牛線粒體基因組DNA為PCR擴(kuò)增模板，使用Primer 5.0設(shè)計mtDNA COⅠ基因引物F：5′-GTCTAATGCTTTACTCAGC-3′和 R：5′-GAGGTTATGATGTTGGCTTG-3′進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物由英維捷基（上海）貿(mào)易有限公司合成。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系（25 μL）：DNA模板2.5 μL（100 ng·μL-1），上下游引物各 1 μL（10 pmol·μL-1），2×Quick Taq HS Dye Mix預(yù)混合酶12.5μL，滅菌ddH2O 8μL。PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性45 s，58℃退火35 s，72℃延伸1 min，8個循環(huán)；95℃變性45 s，68℃退火延伸95 s，27個循環(huán)；72℃延伸7min，4℃保存。PCR擴(kuò)增完成后，取2μL產(chǎn)物在1%的瓊脂糖凝膠電泳驗證PCR擴(kuò)增結(jié)果，使用凝膠回收試劑盒進(jìn)行純化、回收后送往上海立菲生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。

1.3 比對數(shù)據(jù)來源

從 NCBI獲 得 野 牦 牛（GenBank：NC_025563.1）、巴州牦牛（GenBank：MN175233.1）、青海高原牦牛（GenBank：KR011113.1）、麥洼牦牛（GenBank：MK796240.1）、西藏高山牦牛（Gen-Bank：GU256940.1）、天 祝 白 牦 牛（GenBank：KM233416.1）、甘南牦牛（GenBank：KJ704989.1）、帕里牦牛（GenBank：KR052524.1）、九龍牦牛（GenBank：GQ464284.1）、大通牦牛（GenBank：KJ463418.1）、中甸牦牛（GenBank：MT850134.1）、娘亞牦牛（GenBank：MN319467.1）、斯布牦牛（GenBank：MN398192.1）、金川牦牛（GenBank：MN176980.1）、環(huán)湖牦牛（GenBank：MK124955.1）、雪多牦牛（GenBank：MK124956.1）、玉樹牦牛（GenBank：MK704512.1）線粒體DNA測序結(jié)果以及山羊（GenBank：NC_005044.2）作為外群體COⅠ基因序列的來源。

1.4 數(shù)據(jù)處理及分析

首先使用DNAstar軟件中的內(nèi)置模塊SeqMan對測序序列進(jìn)行拼接和剪切處理；其次使用MEGA 10.1軟件［9］對同源序列進(jìn)行比對分析；然后使用DNASP 6.0軟件［10］分析新疆帕米爾牦牛的DNA多態(tài)性，包括核苷酸多樣性和單倍型多樣性等；隨后對突變位點(diǎn)進(jìn)行Tajima's D中性檢驗［11］；最后使用MEGA 5.0軟件，統(tǒng)計變異信息、轉(zhuǎn)換顛換信息，自展值（Bootstrap）設(shè)定為1 000進(jìn)行構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，并計算各類群牦牛COⅠ基因序列的遺傳距離，鄰接法（Neighbor-Joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹［12］。

2 結(jié)果與分析

2.1 COⅠ基因PCR擴(kuò)增

對新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群共115頭個體，進(jìn)行mtDNA COⅠ基因擴(kuò)增，用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增結(jié)果，擴(kuò)增產(chǎn)物大小約1 600 bp，條帶清晰，明亮且單一，無特異性擴(kuò)增產(chǎn)生（圖1），提示COⅠ基因PCR擴(kuò)增滿足產(chǎn)物測序的要求。由圖1可知，部分牦牛個體PCR產(chǎn)物無條帶，提示部分個體擴(kuò)增不成功，因此只將擴(kuò)增成功且質(zhì)檢合格的42頭帕米爾牦牛的PCR產(chǎn)物送公司測序。

圖1 新疆帕米爾牦牛mtDNA COⅠ基因PCR擴(kuò)增Fig.1 PCR amplification of mtDNA COⅠgene of Pamir yaks in Xinjiang

2.2 新疆帕米爾牦牛mtDNA COⅠ序列的核苷酸組成

將測序結(jié)果使用DNAstar軟件中的內(nèi)置模塊SeqMan進(jìn)行拼接和剪切處理；使用MEGA 10.1軟件與牦牛線粒體參考基因組（麥洼牦牛，Gen-Bank：AY684273.2）進(jìn)行比對分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：新疆帕米爾牦牛COⅠ基因全序列長度為1 048 bp，個體間序列長度無差異；無內(nèi)含子，起始密碼子為AUG（ATG），終止密碼子為TAA，共編碼349個氨基酸。T、C、A和G 4種核苷酸的平均比例分別為30.1%（29.9%～30.4%）、24.3%（23.9%～24.6%）、29.6%（29.3%～29.8%）和16.0%（15.8%～16.4%）；A+T含量為59.7%；G+C含量為40.3%，提示新疆帕米爾牦牛mtDNA COⅠ序列的核苷酸組成具有明顯的堿基偏好性。

2.3 新疆帕米爾牦牛COⅠ基因的遺傳多樣性

使用DNASP 6.0軟件計算新疆帕米爾牦牛COⅠ基因序列的核苷酸多樣性和單倍型多樣性（haplotype diversity，Hd），共發(fā)現(xiàn) 10種單倍型，由表2、表3可知，無論從單倍型數(shù)、單倍型多樣性還是核苷酸多樣性來分析都表明蘇木塔什牦牛的遺傳多樣性最高，而哈拉峻牦牛的遺傳多樣性最低。此外，單倍型多樣性和核苷酸多樣性值的變化范圍基本一致，這表明兩者具有較強(qiáng)的相關(guān)性。

表2 新疆帕米爾牦牛的單倍型多樣性和核苷酸多樣性Table 2 Haplotype diversity and nucleotide diversity of Pamir yaks in Xinjiang

表3 新疆帕米爾牦牛的mtDNA COⅠ的單倍型分布Table 3 mtDNA COⅠgene haplotypes of Pamir yaks in Xinjiang

將本研究所測序列與牦牛線粒體全基因序列（AY684273.2）中的mtDNACOⅠ的核苷酸序列比對分析后，發(fā)現(xiàn)不變位點(diǎn)1 035個，可變位點(diǎn)13個，其中單態(tài)突變位點(diǎn)9個（位于4、5、6、14、30、38、155、217和478 bp處）、簡約信息位點(diǎn)4個（位于92、302、497和649 bp處），包含轉(zhuǎn)換和顛倒2種核苷酸變異類型，未發(fā)生插入刪除事件。其中轉(zhuǎn)換11次（占84.62%），A?G間的轉(zhuǎn)換6次（占54.5%），C?T間的轉(zhuǎn)換5次（占45.5%）；顛換有2個（占15.38%），均為T?G間的顛換。新疆帕米爾牦牛COⅠ基因在650～1 048 bp之間有1個保守區(qū)域，在該保守區(qū)域內(nèi)，A、T含量為60.15%，序列保守度C為0.988；Tajima's D為-1.334 01，提示中性檢驗結(jié)果不顯著（P＞0.10），說明新疆帕米爾牦牛在較近的一段時期內(nèi)沒有出現(xiàn)種群擴(kuò)張現(xiàn)象。

新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群的單倍型多樣性變化范圍為0.616～0.905（表2），蘇木塔什牦牛的單倍型多樣性最高為0.905，哈拉峻牦牛的單倍型多樣性最低為0.616；核苷酸多樣性變化范圍在0.001 26～0.002 27之間，其中蘇木塔什牦牛的核苷酸多樣性最高為0.002 27，其次是布倫口牦牛0.001 32，最低的是哈拉峻牦牛0.001 26。提示單倍型多樣性和核苷酸多樣性值變化范圍基本一致，具有較強(qiáng)的相關(guān)性。

2.4 新疆帕米爾牦牛COⅠ的氨基酸組成

利用MEGA 6.0軟件將新疆帕米爾牦牛COⅠ基因序列轉(zhuǎn)換成氨基酸序列，推算COⅠ基因編碼蛋白的氨基酸序列組成（表4）。結(jié)果表明，在3個牦牛類群中，COⅠ編碼的蛋白均含有20種氨基酸，共由322個氨基酸組成，其中谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、異亮氨酸（Ile）、絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）等5種氨基酸在牦牛類群間存在一定差異。異亮氨酸平均含量最多（13.059%），色氨酸的平均含量最少（0.311%）。堿性氨基酸、酸性氨基酸的含量分別為13.665%、8.548%；親水性氨基酸、疏水性氨基酸分別為39.141%、60.859%。

表4 新疆帕米爾牦牛COⅠ的氨基酸組成Table 4 COⅠaverage amino-acid composition of Pamir yaks in Xinjiang /%

2.5 新疆帕米爾牦牛類群間的遺傳距離及其分類

利用MEGA 10.1軟件對新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群mtDNACOⅠ基因核苷酸序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)各類群間的遺傳距離變化范圍為0.003 72～0.005 22之間。其中，蘇木塔什牦牛與哈拉峻牦牛的遺傳距離最大（0.005 22），而蘇木塔什牦牛與布倫口牦牛的遺傳距離最小（0.003 72）（表5、圖2、圖3）。這提示新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群間的遺傳距離差異較小。

圖2 基于kimura雙參數(shù)遺傳距離的新疆帕米爾牦牛類群間的NJ聚類關(guān)系Fig.2 NJ tree based on kimura 2-parameter distance between groups of Pamir yaks in Xinjiang

圖3 基于kimura雙參數(shù)遺傳距離的新疆帕米爾牦牛類群間的UPGMA聚類關(guān)系Fig.3 UPGMA tree based on kimura 2-parameter distance between groups of Pamir yaks in Xinjiang

表5 新疆帕米爾牦牛類群間的kimura雙參數(shù)遺傳距離Table 5 Kimura 2-parameter genetic distance between Pamir yaks breeds in Xinjiang inferred from kimura

2.6 新疆帕米爾牦牛系統(tǒng)進(jìn)化研究

選取野牦牛和《國家畜禽遺傳資源品種目錄（2021年版）》［13］收錄的15個牦牛地方品種——巴州牦牛、青海高原牦牛、麥洼牦牛、西藏高山牦牛、天祝白牦牛、甘南牦牛、帕里牦牛、九龍牦牛、中甸牦牛、娘亞牦牛、斯布牦牛、金川牦牛、環(huán)湖牦牛、雪多牦牛、玉樹牦牛以及1個培育品種——大通牦牛的線粒體DNA測序結(jié)果以及山羊作為外群體COⅠ基因序列的來源，用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖4）。結(jié)果顯示哈拉峻牦牛首先與甘南牦牛和九龍牦牛聚在一起，緊接著與天祝白牦牛聚在一起，其他13個地方牦牛品種和野牦牛聚在一起后依次與布倫口牦牛、蘇木塔什牦牛一支聚在一起，山羊獨(dú)立于牛亞科物種之外。

圖4 基于NJ法構(gòu)建21個物種的COⅠ基因系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.4 The phylogenetic tree of COⅠgene of 21 species based on NJ method

3 討論

種群多樣性是物種進(jìn)化和維護(hù)生態(tài)系統(tǒng)平衡的重要驅(qū)動力，而物種內(nèi)變異是保證生物多樣性的一個重要前提，有時甚至比物種間變異具有更強(qiáng)的生態(tài)效應(yīng)［14-15］。本研究通過對帕米爾地區(qū)3個牦牛類群的mtDNACOⅠ基因序列進(jìn)行測定，分析了帕米爾牦牛的遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu)，有助于了解帕米爾高原地區(qū)生物多樣性及保護(hù)該地區(qū)的生態(tài)系統(tǒng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)帕米爾牦牛mtDNACOⅠ基因序列長度為1 048 bp，這與前人報道的西藏牦牛mtDNACOⅠ基因序列長度有一定的差別，這可能是由于牦牛品種差異導(dǎo)致的。經(jīng)過與牦牛參考序列進(jìn)行比對后，發(fā)現(xiàn)COⅠ基因存在13個單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）位點(diǎn)，大部分為轉(zhuǎn)換（占84.62%），無插入、缺失現(xiàn)象，這符合COⅠ基因保守的特征［16］。此外，帕米爾牦牛mtDNACOⅠ基因A+T含量（59.7%）明顯高于G+C含量（40.3%），具有一定的堿基偏好性。這與Song等［17］研究的西藏牦牛COⅢ基因，胡丹等［18］研究的新疆塔什庫爾干牦牛Cytb基因富含A和T的結(jié)果一致。此外，大多數(shù)哺乳動物線粒體DNA也具有A、T含量偏高的普遍特征［19-20］，這體現(xiàn)了動物線粒體DNA堿基組成的基本特點(diǎn)。

物種的遺傳多樣性大小是長期進(jìn)化的產(chǎn)物，是其生存適應(yīng)和發(fā)展進(jìn)化的前提［21］。遺傳多樣性越高或遺傳變異越豐富，其對環(huán)境變化的適應(yīng)能力就越強(qiáng)［22］。因此，分析帕米爾牦牛的遺傳多樣性對該地區(qū)牦牛產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。Hd和Pi是從群體水平上評價某物種遺傳多樣性的重要指標(biāo)，Hd和Pi的值越大，表明該類群的遺傳多樣性越豐富［23］。本研究發(fā)現(xiàn)帕米爾牦牛類群的COⅠ基因有13個變異位點(diǎn)，Hd和Pi分別為0.762、0.001 64。這低于新疆塔什庫爾干牦牛的遺傳多樣性（Hd=0.778，Pi=0.008 39）［18］，但高于王蘭萍等［24］對新疆巴州Cytb基因（Hd=0.331，Pi=0.001 02）的研究結(jié)果。這說明新疆帕米爾牦牛mtDNACOⅠ基因的核苷酸替代率較高，具有豐富的遺傳多樣性和單倍型多樣性。同時，也側(cè)面反映出隨著近些年新疆維吾爾自治區(qū)各地州政府對畜牧業(yè)的不斷重視，從西藏自治區(qū)、青海省等地引進(jìn)了高質(zhì)量種公牛及其凍精，顯著提高了新疆帕米爾牦牛的遺傳多態(tài)性。

Tajima's D常用于檢驗統(tǒng)計群體基因數(shù)據(jù)，檢驗的目的是區(qū)分隨機(jī)演變的DNA序列和在非隨機(jī)過程中演化的DNA序列［25］。Tajima's D值為正數(shù)時，說明序列進(jìn)化方式為平衡選擇，且有一些單倍型分化；負(fù)值時說明為負(fù)向選擇或者群體擴(kuò)張。Tajima's檢驗如果差異不顯著，則表示目標(biāo)序列在進(jìn)化上遵循中性模型［11］。在本研究中，帕米爾地區(qū)3個牦牛類群的Tajima D值為-1.334 01，且中性檢驗結(jié)果不顯著（P＞0.10）。這表明該地區(qū)的牦牛

在受到人工或者自然選擇后，群體發(fā)生了擴(kuò)張現(xiàn)象，同時線粒體DNA序列在進(jìn)化上遵循中性模型。

群體間的遺傳分化、遺傳差異主要根據(jù)遺傳距離大小來評價。在進(jìn)化過程中，群體間遺傳分化越大，其遺傳距離值就越大［26］。根據(jù)雙參數(shù)遺傳距離，對新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群進(jìn)行聚類分析，依據(jù)NJ和UPGMA聚類關(guān)系構(gòu)建進(jìn)化樹，發(fā)現(xiàn)蘇木塔什牦牛與哈拉峻牦牛的遺傳距離最大，而與布倫口牦牛的遺傳距離最小，各類群間的遺傳距離介于0.003 72～0.005 22之間。帕米爾地區(qū)3個牦牛類群的劃分并不明顯，各類群內(nèi)的牦牛個體沒有完全聚類到一起，這表明新疆帕米爾地區(qū)3個牦牛類群間的遺傳距離差異較小，遺傳分化不明顯。同樣地，有研究表明，西藏牦牛的多個類群的平均遺傳距離為0.001 452，這與本研究結(jié)果基本一致［17］。然而，中國黃牛品種間的平均遺傳距離較大（0.012 71±0.002 62），遺傳分化差異較大［27］。這可能是由于牦牛產(chǎn)區(qū)本身就分布于高寒地區(qū)，且近年來的引種雜交、基因交流頻繁導(dǎo)致牦牛群體遺傳分化不明顯，同時也一定程度上印證了牦牛“單一起源于野牦?！钡募僬f［28］。本研究基于COⅠ基因的牛亞科系統(tǒng)聚類分析得出哈拉峻牦牛首先與甘南牦牛和九龍牦牛聚在一起，緊接著與其他14個地方牦牛品種和野牦牛聚在一起。這表明哈拉峻牦牛與甘南牦牛和九龍牦牛親緣關(guān)系較近。導(dǎo)致這一現(xiàn)象發(fā)生的主要原因是近年來克州地區(qū)人為對帕米爾牦牛進(jìn)行改良育種。阿圖什市從2009年陸續(xù)引進(jìn)西藏種公牦牛45頭，甘南牦牛分布在甘南藏族自治州境內(nèi)，九龍牦牛分布在四川省甘孜藏族自治州，本身就是藏族同胞的居住地，在地理位置上較接近，因此有血緣滲入。此外，布倫口牦牛和蘇木塔什牦牛與其他牦牛親緣關(guān)系相距較遠(yuǎn)，可能是品種內(nèi)部的差異導(dǎo)致。

本研究通過對帕米爾牦牛的線粒體COⅠ基因序列分析，發(fā)現(xiàn)帕米爾牦牛具有豐富的遺傳多樣性，且受到人工或者自然選擇后，群體發(fā)生了擴(kuò)張和基因交流的情況，但是各類群之間遺傳分化不明顯。本研究為新疆帕米爾牦牛的遺傳改良及新疆優(yōu)良畜禽遺傳資源的保護(hù)和開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。