• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    山東新分布藥用植物碎米椏的DNA條形碼分子鑒定

    2022-08-01 01:33:36葛俊偉李平張童童高飛王文越王鈞楠孫稚穎
    山東科學(xué) 2022年4期
    關(guān)鍵詞:香茶碎米條形碼

    葛俊偉, 李平, 張童童, 高飛, 王文越, 王鈞楠, 孫稚穎*

    (1.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355; 2. 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 102488)

    為摸清中藥資源家底,確保我國(guó)中醫(yī)藥事業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,從2011年起,全國(guó)各地陸續(xù)開(kāi)展了第四次中藥資源普查工作[1]。本課題組在山東省滕州市野外進(jìn)行資源普查的過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)了一種野生唇形科植物。通過(guò)形態(tài)觀察,判斷其為香茶菜屬(Isodon(Schrad. ex Benth.) Spach)植物,并且該植物與有山東分布記錄的香茶菜屬內(nèi)折香茶菜(Isodoninflexus(Thunb.) Kudo)較為相似,但也有差異,如雄蕊、花柱伸出,而內(nèi)折香茶菜雄蕊、花柱內(nèi)藏。進(jìn)一步鑒定發(fā)現(xiàn)該植物與無(wú)山東分布記錄的碎米椏(I.rubescens(Hemsl.) Hara)更為相似。香茶菜屬為唇形科植物,木本或草本;根莖常肥大木質(zhì),葉具齒。聚傘花序,花具梗[2]。屬內(nèi)多種植物入藥,如碎米椏,《中國(guó)藥典》收載,其干燥地上部分作冬凌草入藥,具有清熱解毒、活血止痛功效[3],對(duì)多種癌癥的癥狀有緩解作用[4]。此外,內(nèi)折香茶菜也有抗腫瘤作用[5]。在野外僅憑宏觀特征無(wú)法準(zhǔn)確判斷該未知植物物種,因此有必要進(jìn)行更深入的鑒定研究,從而為新資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

    DNA條形碼技術(shù)能實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥材方便快捷的鑒定。核ITS2序列與葉綠體psbA-trnH序列作為DNA條形碼現(xiàn)在被廣泛應(yīng)用于藥用植物資源鑒定,并被收錄于2015版和2020版《中國(guó)藥典》第四部[6-7],而且前人也做了大量研究,如psbA-trnH序列在薯蕷屬[8]、沉香屬[9]等中藥材的物種鑒定中的作用已得到證實(shí),ITS2序列在板藍(lán)根[10]、白前[11]、烏頭屬[12]等中藥材的物種鑒定中同樣得到很好的應(yīng)用。

    因此,本研究將利用核基因組ITS2片段以及葉綠體基因組psbA-trnH基因間隔區(qū)作為DNA條形碼序列,對(duì)所調(diào)查物種進(jìn)行分子鑒定,同時(shí)從GenBank下載相關(guān)可靠序列進(jìn)行比對(duì)分析,旨在對(duì)所發(fā)現(xiàn)的這一野生植物進(jìn)行準(zhǔn)確的物種鑒定,進(jìn)而為其資源開(kāi)發(fā)利用等相關(guān)研究提供證據(jù)。

    1 材料、試劑與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    所研究植物樣品(wz)采自山東省滕州市濱湖鎮(zhèn)雙井村東南山坡,拍照觀察,經(jīng)初步外部形態(tài)觀察后,單株取樣,隨機(jī)取3份不同植株個(gè)體幼嫩葉片(wz1,wz2,wz3),硅膠干燥備用。憑證標(biāo)本保存于山東中醫(yī)藥大學(xué)生藥系標(biāo)本室(標(biāo)本號(hào)為:370481181013001LY)。

    1.2 試劑與儀器

    試劑主要包括:GeneRed核酸染料;2×Taq PCR MasterMIX(含染料);5×TBE Buffer;DL2000 marker;植物基因組DNA提取試劑盒(天根生物技術(shù)(北京)有限公司)等。

    儀器主要包括:SYG-2恒溫水浴鍋(常州朗越儀器制造有限公司);1-14高速離心機(jī)(德國(guó)SIGMA公司);DYY-8B穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一生物科技有限公司);T100 Thermal Cycler熱循環(huán)儀(美國(guó)Bio-rad公司);LUMINESCENT Amersham Imager 600圖像分析儀(瑞典GE Healthcare Bio-Sciences AB公司);XFS-280CB手提式壓力蒸汽滅菌鍋(浙江新豐醫(yī)療器械有限公司);303-OB電熱恒溫培養(yǎng)箱(紹興市滬越儀器設(shè)備廠)等。

    1.3 方法

    1.3.1 總DNA的提取

    取干燥葉片約30 mg,于研缽內(nèi)加液氮迅速研磨,用植物基因組DNA提取試劑盒參照說(shuō)明書方法提取材料總DNA,,置于-20 ℃冰箱備用。

    1.3.2 PCR擴(kuò)增及測(cè)序

    PCR擴(kuò)增體系為25.0 μL:包括DNA模板2.0 μL,雙向引物各1.0 μL(濃度2.5 μmol/L),2×Taq PCR MasterMIX12.5 μL,雙蒸水(約8.5 μL)補(bǔ)足至25 μL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件及擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)程序參考2015版、2020版《中國(guó)藥典》第四部等的研究方法[6-7,13]。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測(cè)后,切膠純化,使用ABI 3730XL測(cè)序儀雙向測(cè)序。

    PCR擴(kuò)增及測(cè)序引物信息見(jiàn)表 1。

    表1 引物信息Table 1 Information on primers

    1.3.3 數(shù)據(jù)分析

    所得序列利用軟件Chromasv校對(duì)拼接,對(duì)于核序列,切除兩端5.8S和28S堿基序列得到樣品的ITS2序列;對(duì)于葉綠體序列,切除兩端引物序列,得到psbA-trnH序列,NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)網(wǎng)站進(jìn)行Blast比對(duì),并分別下載相關(guān)物種的ITS2和psbA-trnH序列,然后用軟件MEGA6.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,并利用鄰接法(neighbor-joining,NJ)構(gòu)建距離樹(shù)[14-15]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 植物外部形態(tài)觀察

    木質(zhì)根;葉對(duì)生,卵圓形,先端漸尖,基部楔形,驟然漸狹下延,邊緣具鋸齒,葉膜質(zhì),上下表面被柔毛至近無(wú)毛;唇形花冠,紅至紫色,雄蕊4,伸出,花柱伸出;花盤環(huán)狀。

    依據(jù)外部形態(tài)觀察,初步推斷所調(diào)查物種與內(nèi)折香茶菜相似,與《中國(guó)植物志》英文版FloraofChina[2]中碎米椏形態(tài)更為吻合。

    注:箭頭示主要鑒別特征。圖1 植物形態(tài)圖Fig.1 Morphology of the studied species

    2.2 基因序列分析

    2.2.1 ITS2序列

    為了更好地確定該物種,從GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)下載了幾條碎米椏與內(nèi)折香茶菜ITS2序列以作比較分析。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn),所測(cè)3株植物樣品ITS2堿基序列長(zhǎng)度均為212 bp,GC含量為67.9%,3株植物個(gè)體堿基序列完全一致。與GenBank中所下載的碎米椏(Sequence ID:KF032250、KT285125、JQ389511、JQ389509)序列比對(duì)也無(wú)差異,與內(nèi)折香茶菜(Sequence ID:KF032264、KF032265、KF032266)有7個(gè)位點(diǎn)差異,見(jiàn)表 2。同時(shí)經(jīng)NCBI網(wǎng)站上Blast比對(duì),本實(shí)驗(yàn)所研究樣品與碎米椏的相似度為100%,構(gòu)建系統(tǒng)聚類樹(shù)見(jiàn)圖2。可明顯看出,所研究樣品(wz1,wz2,wz3)與GenBank所下載碎米椏聚在一支。

    表2 所研究植物樣品的ITS2差異位點(diǎn)信息Table 2 Information on different ITS2 loci in the studied samples

    圖2 基于ITS2序列構(gòu)建NJ距離樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree construction based on ITS2 sequences using the NJ method

    2.2.2psbA-trnH序列

    為了更好地鑒定該物種,從GenBank下載了內(nèi)折香茶菜和碎米椏psbA-trnH序列,通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,所測(cè)3株不同個(gè)體樣品堿基序列長(zhǎng)度均為391 bp,GC含量為29.7%,居群內(nèi)個(gè)體間堿基序列無(wú)差異。與GenBank所下載序列比較,差異位點(diǎn)信息見(jiàn)表3。

    表3 所研究植物樣品的psbA-trnH差異位點(diǎn)信息Table 3 Information on different psbA-trnH loci in the studied samples

    其中KF855542兩端堿基序列不完整,根據(jù)Kimura 2-Parameter (K2P)遺傳距離分析得出,樣品與GenBank中提交的碎米椏(Sequence ID:FJ513119、KF855542)差異較小,遺傳距離為0.003~0.005;與內(nèi)折香茶菜(Sequence ID:FJ513099、KF032288)差異較大,遺傳距離為0.026~0.027。利用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)聚類樹(shù)見(jiàn)圖3,可以看出該研究物種與碎米椏聚在一支。

    圖3 基于psbA-trnH序列構(gòu)建NJ距離樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree construction based on psbA-trnH sequences using the NJ method

    3 討論

    本研究利用DNA條形碼技術(shù)對(duì)野外資源調(diào)查中所發(fā)現(xiàn)的形態(tài)鑒定不確定物種進(jìn)行了分子鑒定,所采用的方法便捷、可靠,減少了客觀環(huán)境與主觀因素造成的誤差,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。DNA條形碼分別使用了核基因組ITS2序列與葉綠體基因組psbA-trnH序列。此外,從GenBank所下載作對(duì)比分析的序列均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格篩選溯源,保證其來(lái)源的準(zhǔn)確性和可靠性,如KF855542來(lái)自中科院西雙版納植物園Yu等[16]發(fā)表在MolecularPhylogeneticsandEvolution上的文章,該文從系統(tǒng)發(fā)育學(xué)和生物地理學(xué)角度研究了香茶菜屬植物的快速輻射進(jìn)化。JQ389511、JQ389509樣品采自中國(guó)河南省北部,論文發(fā)表在PLoSOne,作者采用系統(tǒng)發(fā)育學(xué)和居群遺傳學(xué)相結(jié)合的方式篩選中國(guó)香茶菜屬植物中冬凌草甲素含量豐富的物種資源,研究結(jié)果表明河南省所產(chǎn)碎米椏和毛葉香茶菜可以提供最好的冬凌草甲素來(lái)源[17]。KF032288、KF032250、KF032264、KF032265、KF032266來(lái)自夏至等[18]發(fā)表在《中草藥》上的文章,該文對(duì)碎米椏及其近緣種進(jìn)行了分子鑒定,研究結(jié)果表明,碎米椏與毛葉香茶菜、香茶菜和內(nèi)折香茶菜親緣關(guān)系較近,ITS和psbA-trnH 序列可以準(zhǔn)確鑒別碎米椏及其近緣種。其余三條序列均來(lái)自Chen等[19]和向麗等[20]所提交序列。

    通過(guò)DNA條形碼核基因組ITS2序列與葉綠體基因組psbA-trnH序列分析結(jié)果可以佐證作者野外形態(tài)觀察推論,判斷所研究樣品應(yīng)該為碎米椏。本研究結(jié)果支持夏至等所發(fā)表文章觀點(diǎn)。但這兩種序列也有所差異,相比較而言,針對(duì)該物種,核基因組ITS2序列比葉綠體基因組psbA-trnH基因間隔區(qū)序列分辨力更高。差異主要是由于核基因來(lái)自雙親遺傳,而葉綠體基因是母系遺傳。

    本實(shí)驗(yàn)研究材料采自山東省滕州市,為全國(guó)第四次中藥資源普查中所發(fā)現(xiàn),后在調(diào)查濟(jì)南市長(zhǎng)清區(qū)中藥資源時(shí),在靈巖山附近也有發(fā)現(xiàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知此香茶菜屬資源植物為碎米椏,而《山東植物志》《山東植物精要》《山東藥用植物志》等均沒(méi)有收載該物種[21-23],也未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道其在山東有分布,因此認(rèn)為碎米椏是山東境內(nèi)新分布種。這一結(jié)論有助于補(bǔ)充和完善山東省的中藥資源數(shù)據(jù)庫(kù),同時(shí)作為具有抗癌等多種活性的藥用植物資源,碎米椏在山東省的分布與發(fā)現(xiàn),對(duì)該資源的開(kāi)發(fā)和可持續(xù)利用具有重要意義。

    猜你喜歡
    香茶碎米條形碼
    秋 風(fēng)
    大米加工中的碎米去哪里了?
    糧食加工(2022年5期)2022-12-28 22:34:59
    創(chuàng)意條形碼
    月兔香茶凝紫砂——談?wù)劇坝裢脡亍钡墓に囍琅c象征意義
    從條形碼到二維碼
    從條形碼到二維碼
    淺談釀酒原料大米碎米含量測(cè)定方法的適用性
    釀酒科技(2019年2期)2019-03-05 06:46:38
    碎米椏化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:14
    把自己煮成一壺香茶
    解放軍健康(2017年5期)2017-08-01 06:27:44
    條形碼大變身
    99久久99久久久精品蜜桃| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 777米奇影视久久| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品久久久久成人av| 妹子高潮喷水视频| 丁香欧美五月| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜激情av网站| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲av美国av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人人妻人人澡人人看| 色尼玛亚洲综合影院| 高清欧美精品videossex| 老司机靠b影院| 亚洲精品一二三| 高清黄色对白视频在线免费看| 午夜老司机福利片| 精品第一国产精品| 一区二区三区乱码不卡18| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品久久久人人做人人爽| 男女免费视频国产| 久久这里只有精品19| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产日韩欧美视频二区| 国产xxxxx性猛交| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品一区二区免费欧美| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| avwww免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 美女主播在线视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 操出白浆在线播放| 五月开心婷婷网| 男人舔女人的私密视频| 91字幕亚洲| 999久久久国产精品视频| 成人国产一区最新在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 9热在线视频观看99| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一区二区三区乱码不卡18| 午夜福利影视在线免费观看| 女性被躁到高潮视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 色老头精品视频在线观看| 在线观看免费高清a一片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 999久久久精品免费观看国产| 男女午夜视频在线观看| 午夜福利免费观看在线| 欧美日韩福利视频一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 免费看十八禁软件| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品国产高清国产av | 欧美黑人精品巨大| 交换朋友夫妻互换小说| 国产亚洲欧美精品永久| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品亚洲av一区麻豆| 咕卡用的链子| 新久久久久国产一级毛片| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 99国产精品99久久久久| 日韩免费av在线播放| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 美女主播在线视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 五月开心婷婷网| bbb黄色大片| 丁香六月欧美| 亚洲专区中文字幕在线| 91成年电影在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 黑人操中国人逼视频| 免费看a级黄色片| 亚洲九九香蕉| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产精品久久久av美女十八| 久久精品国产亚洲av高清一级| 精品欧美一区二区三区在线| 免费日韩欧美在线观看| avwww免费| 久久精品91无色码中文字幕| 国产高清国产精品国产三级| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲,欧美精品.| 成年人黄色毛片网站| 午夜免费鲁丝| 日韩免费av在线播放| 亚洲av电影在线进入| 亚洲伊人久久精品综合| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 少妇精品久久久久久久| 亚洲七黄色美女视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久国产精品影院| 久久av网站| 99香蕉大伊视频| 成人精品一区二区免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成人欧美在线观看 | 啦啦啦免费观看视频1| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 99精品欧美一区二区三区四区| 十八禁人妻一区二区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产一区二区在线观看av| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| tube8黄色片| cao死你这个sao货| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲熟女毛片儿| 十八禁网站网址无遮挡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 超碰成人久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 高清毛片免费观看视频网站 | 桃红色精品国产亚洲av| 久久青草综合色| 99国产极品粉嫩在线观看| 香蕉丝袜av| 国产男女内射视频| 成人特级黄色片久久久久久久 | 中文字幕最新亚洲高清| 免费在线观看影片大全网站| 久久久国产精品麻豆| 少妇的丰满在线观看| 手机成人av网站| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 最近最新免费中文字幕在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 自线自在国产av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人啪精品午夜网站| 在线观看www视频免费| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| e午夜精品久久久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 1024香蕉在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 老司机亚洲免费影院| 午夜福利乱码中文字幕| 一区二区三区精品91| 国产成人av激情在线播放| 在线 av 中文字幕| 久热这里只有精品99| 国产av精品麻豆| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成年动漫av网址| 免费人妻精品一区二区三区视频| 日日夜夜操网爽| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久精品成人免费网站| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 99国产极品粉嫩在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 韩国精品一区二区三区| 国产福利在线免费观看视频| 制服人妻中文乱码| 欧美日韩亚洲高清精品| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| av一本久久久久| 国产成人欧美| 欧美激情高清一区二区三区| 黄色丝袜av网址大全| 丝袜在线中文字幕| 日韩欧美免费精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲精品在线观看二区| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 又大又爽又粗| 美女福利国产在线| avwww免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 精品久久蜜臀av无| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲avbb在线观看| 午夜视频精品福利| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 麻豆av在线久日| 国产免费视频播放在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 免费不卡黄色视频| 麻豆乱淫一区二区| 黄色视频,在线免费观看| av一本久久久久| 99久久人妻综合| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 看免费av毛片| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 咕卡用的链子| 日韩欧美三级三区| 十分钟在线观看高清视频www| 久久国产精品影院| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 一二三四在线观看免费中文在| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲avbb在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 一级片免费观看大全| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 美女午夜性视频免费| 久久久国产成人免费| a级毛片黄视频| 五月开心婷婷网| 欧美国产精品一级二级三级| 国产精品影院久久| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲午夜理论影院| 国产深夜福利视频在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| av在线播放免费不卡| 日韩免费av在线播放| 热99久久久久精品小说推荐| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产成人av教育| 国产在线精品亚洲第一网站| 99热网站在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 乱人伦中国视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产在线观看jvid| 高清视频免费观看一区二区| 日韩一区二区三区影片| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲国产av影院在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 日本欧美视频一区| 亚洲五月婷婷丁香| 看免费av毛片| av线在线观看网站| 精品免费久久久久久久清纯 | kizo精华| 免费观看av网站的网址| 国产麻豆69| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲专区字幕在线| av线在线观看网站| 日韩欧美三级三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产片内射在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美在线黄色| av网站免费在线观看视频| 极品人妻少妇av视频| 久久久久久久久免费视频了| 老汉色∧v一级毛片| 日韩欧美一区视频在线观看| 大型av网站在线播放| 久久久久国产一级毛片高清牌| 超碰成人久久| 久久狼人影院| 国产精品免费大片| 久久久精品94久久精品| 亚洲专区字幕在线| 亚洲专区中文字幕在线| 在线永久观看黄色视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 69av精品久久久久久 | 97人妻天天添夜夜摸| 国产真人三级小视频在线观看| 久久中文字幕人妻熟女| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 在线观看舔阴道视频| 亚洲精品在线观看二区| 91av网站免费观看| 欧美黄色淫秽网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 自线自在国产av| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲av片天天在线观看| 色在线成人网| 久久精品国产亚洲av高清一级| 大片电影免费在线观看免费| 欧美精品亚洲一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费黄频网站在线观看国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 大型av网站在线播放| 搡老熟女国产l中国老女人| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久精品国产欧美久久久| 99re在线观看精品视频| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久久久久国产电影| 两性夫妻黄色片| 久热爱精品视频在线9| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲成人手机| 啦啦啦 在线观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文字幕色久视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99热国产这里只有精品6| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产精品欧美亚洲77777| 国产在线观看jvid| 日韩大片免费观看网站| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲人成电影免费在线| 悠悠久久av| 日韩大码丰满熟妇| 麻豆成人av在线观看| 夜夜爽天天搞| 在线 av 中文字幕| 国产免费福利视频在线观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 成人免费观看视频高清| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久久视频综合| 丁香六月天网| 亚洲伊人久久精品综合| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 另类精品久久| 欧美乱妇无乱码| 欧美成人午夜精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久国产精品影院| 久久精品成人免费网站| 老司机亚洲免费影院| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产片内射在线| 免费黄频网站在线观看国产| 免费观看av网站的网址| 亚洲熟女精品中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 最新在线观看一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲av电影在线进入| 午夜激情久久久久久久| 国产成人欧美在线观看 | 一二三四在线观看免费中文在| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品久久蜜臀av无| 午夜激情av网站| 亚洲九九香蕉| 色尼玛亚洲综合影院| 中文亚洲av片在线观看爽 | 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲av片天天在线观看| 国产高清激情床上av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲国产欧美网| 亚洲精品国产区一区二| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产精品.久久久| 久久ye,这里只有精品| 无遮挡黄片免费观看| 操出白浆在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 大陆偷拍与自拍| xxxhd国产人妻xxx| 国产高清国产精品国产三级| 涩涩av久久男人的天堂| 香蕉国产在线看| 99精品久久久久人妻精品| 老司机在亚洲福利影院| 香蕉丝袜av| 老司机午夜福利在线观看视频 | 飞空精品影院首页| 久久免费观看电影| 亚洲av成人一区二区三| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成人av激情在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜老司机福利片| 国产精品免费视频内射| 99国产综合亚洲精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 99热网站在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品久久久久成人av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 91九色精品人成在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 69av精品久久久久久 | 午夜福利,免费看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 在线观看免费高清a一片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国产一区二区久久| 欧美日韩av久久| 亚洲中文av在线| 黑人猛操日本美女一级片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久精品成人免费网站| 99国产综合亚洲精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 中文字幕制服av| 麻豆av在线久日| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 视频区欧美日本亚洲| 最新美女视频免费是黄的| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲人成伊人成综合网2020| 精品国产亚洲在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美久久黑人一区二区| 在线永久观看黄色视频| 91麻豆av在线| 97在线人人人人妻| 大香蕉久久成人网| 国产精品一区二区精品视频观看| 天堂中文最新版在线下载| 久久精品国产综合久久久| 十八禁网站免费在线| 久久人妻av系列| 国产欧美日韩一区二区三| 夫妻午夜视频| 美女午夜性视频免费| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 两人在一起打扑克的视频| 好男人电影高清在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 成人18禁在线播放| av线在线观看网站| 久久精品亚洲av国产电影网| 黑人操中国人逼视频| 一二三四社区在线视频社区8| 一级毛片电影观看| 亚洲成人免费av在线播放| 一区二区av电影网| 少妇粗大呻吟视频| 国产色视频综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 男女边摸边吃奶| 欧美日韩精品网址| 交换朋友夫妻互换小说| 免费日韩欧美在线观看| 香蕉丝袜av| 国产亚洲精品一区二区www | 欧美变态另类bdsm刘玥| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 操出白浆在线播放| 中文字幕制服av| 精品熟女少妇八av免费久了| 老汉色∧v一级毛片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 另类精品久久| 欧美乱妇无乱码| 亚洲精品在线美女| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品免费视频内射| 国产成人影院久久av| 97人妻天天添夜夜摸| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 两个人看的免费小视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本欧美视频一区| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品久久久av美女十八| av网站在线播放免费| 免费看a级黄色片| 亚洲国产欧美在线一区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成人国语在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲国产成人一精品久久久| 波多野结衣一区麻豆| 免费在线观看影片大全网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 97在线人人人人妻| 成人三级做爰电影| 免费少妇av软件| 高清av免费在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| svipshipincom国产片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲综合色网址| 丁香欧美五月| 男女高潮啪啪啪动态图| av欧美777| 久久久精品94久久精品| 在线观看一区二区三区激情| 热99re8久久精品国产| 国产男靠女视频免费网站| 日韩中文字幕视频在线看片| 午夜免费成人在线视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 在线永久观看黄色视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲第一青青草原| 制服人妻中文乱码| 深夜精品福利| 免费看十八禁软件| 色在线成人网| 老司机午夜福利在线观看视频 | 亚洲第一av免费看| av网站在线播放免费| 国产野战对白在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 搡老岳熟女国产| 欧美中文综合在线视频| 久久天堂一区二区三区四区| 黄片播放在线免费| 亚洲中文av在线| 日韩免费高清中文字幕av| 日本a在线网址| 老司机在亚洲福利影院| 嫁个100分男人电影在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99在线人妻在线中文字幕 | 男女之事视频高清在线观看| 国产亚洲精品一区二区www | 黄片播放在线免费| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 热99久久久久精品小说推荐| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲五月婷婷丁香| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 窝窝影院91人妻| 一级,二级,三级黄色视频| 国产男靠女视频免费网站| 91老司机精品| 69av精品久久久久久 | 高清av免费在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 成人国产av品久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 十八禁网站免费在线| 9热在线视频观看99| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产1区2区3区精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 手机成人av网站| 大香蕉久久成人网| 日韩欧美国产一区二区入口| 高清视频免费观看一区二区| 91成年电影在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 麻豆国产av国片精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 色视频在线一区二区三区| 国产av精品麻豆| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产av又大| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线播放国产精品三级|