不同HIV檢測試劑盒檢測HIV感染的檢測效能評(píng)價(jià)*

劉明麗，周靜江

河北省承德市中心血站，河北承德 067000

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種傳染病，HIV主要通過性接觸、輸血等途徑傳播，可導(dǎo)致全身免疫系統(tǒng)破壞，降低機(jī)體免疫能力，誘發(fā)感染，也可累及消化、泌尿、呼吸及神經(jīng)系統(tǒng)，早期診斷、及時(shí)治療是防治艾滋病的重要手段[1-2]。近年來HIV檢測技術(shù)不斷發(fā)展，其準(zhǔn)確性也不斷提升。當(dāng)前臨床常用的HIV檢測試劑主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、蛋白印記雜交、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)等[3-4]。ELISA是用于HIV初篩最經(jīng)濟(jì)、方便的方法，在臨床應(yīng)用非常廣泛，但臨床數(shù)據(jù)顯示，不同技術(shù)產(chǎn)次、不同廠家的試劑盒檢驗(yàn)效果存在一定差異，尋找最有效的抗體檢驗(yàn)試劑盒對于臨床診治工作的開展非常關(guān)鍵。本研究以常用的3種HIV檢測試劑盒作為研究材料，對河北省承德市中心血站收集的血液標(biāo)本進(jìn)行HIV試劑盒檢測，分析3種試劑盒的檢驗(yàn)效能及其檢測時(shí)間差異?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年7月送至河北省承德市中心血站的12 856份血液標(biāo)本作為研究對象，所有血液標(biāo)本的分離、保存均按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)范進(jìn)行操作。本研究經(jīng)河北省承德市中心血站倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

1.2儀器與試劑 瑞士全自動(dòng)加樣儀HAMILTON STAR-8CH，瑞士全自動(dòng)酶免分析儀HAMILTON FAME24/30。A試劑盒為HIV抗原抗體診斷試劑盒(國藥準(zhǔn)字S20080008)、B試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準(zhǔn)字S20030026)、C試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準(zhǔn)字S20020011)；BBI公司陽轉(zhuǎn)血清盤4套，每套有4～8份血清系列標(biāo)本；精密度血清盤，共高、中、低3個(gè)HIV抗體滴度；核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)檢測試劑(上海科華生物工程有限公司生產(chǎn))。所有試劑盒均在有效期內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.3方法

1.3.1ELISA檢測 所用血液標(biāo)本均使用2種試劑盒進(jìn)行2次檢測，每批設(shè)空白對照孔、陰性對照孔、陽性對照孔、室內(nèi)質(zhì)控孔，檢驗(yàn)結(jié)果若存在不同或有反應(yīng)性的檢測標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，檢測有反應(yīng)性的標(biāo)本采用NAT對輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物檢測確認(rèn)。

1.3.2NAT檢測 ELISA檢測陰性標(biāo)本采用8份份混檢，檢測有反應(yīng)性的混檢標(biāo)本拆分單檢。

1.4陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) ELISA試劑盒樣品A值(S)/CO≥1，視為HIV抗原抗體有反應(yīng)性；S/CO<1，判為HIV抗原抗體無反應(yīng)性；NAT測定值CT≥50或無數(shù)值，且標(biāo)志物測定值CT<50視為陰性，標(biāo)志物測定值CT<40視為陽性，單檢反應(yīng)性即判為陽性。若標(biāo)志物測定值CT為40～50，進(jìn)行復(fù)試并以復(fù)試結(jié)果為準(zhǔn)。

1.5觀察指標(biāo) BBI陽轉(zhuǎn)血清盤結(jié)果分析：比較各試劑在血清盤內(nèi)檢出首份陽性標(biāo)本的采集時(shí)間與核酸檢測首份陽性時(shí)間的差值。精密度檢驗(yàn)：采用精密度血清盤評(píng)價(jià)試劑板內(nèi)精密度，評(píng)價(jià)指標(biāo)為變異系數(shù)，變異系數(shù)為數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差與均數(shù)的比值。質(zhì)量控制：本研究所有操作及結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行美國病理家協(xié)會(huì)能力驗(yàn)證血清盤檢測，均滿足實(shí)驗(yàn)需求。誤診率即非HIV患者中被診斷為陽性的概率；漏診率即HIV患者中被診斷為陰性的概率。

2 結(jié) 果

2.1不同ELISA HIV檢測試劑盒對陽轉(zhuǎn)血清盤檢驗(yàn)結(jié)果分析 B試劑盒、C試劑盒檢測HIV的陽轉(zhuǎn)血清盤，檢測相比于核酸檢測的平均檢測天數(shù)相當(dāng)，分別為(16.25±3.04)、(16.75±3.32)d，A試劑盒對于HIV檢出時(shí)間相比于核酸檢測天數(shù)最短，為(13.50±3.58)d。見表1。

表1 不同HIV試劑盒的檢測天數(shù)比較(d)

2.2不同ELISA HIV檢測試劑盒對研究份群檢測結(jié)果分析 12 856份血液標(biāo)本中共初篩陽性32份，檢出率為0.25%，A試劑盒、B試劑盒、C試劑盒初篩總份數(shù)分別為7 256份、9 152份、9 304份，有反應(yīng)性份數(shù)分別為18份、22份、24份；3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2、3。

表2 3種試劑盒檢測陽性結(jié)果比較

表3 3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較(%)

2.3板內(nèi)精密度檢驗(yàn) 與不同抗體滴度質(zhì)控品進(jìn)行參比，3種試劑盒平行檢測結(jié)果見表4。A試劑盒變異系數(shù)S/CO為(6.55±1.88)，CV(%)為(5.18±0.40)%；B試劑盒變異系數(shù)S/CO為(4.94±1.60)，CV(%)為(7.28±1.66)%；C試劑盒變異系數(shù)S/CO為(6.03±1.39)，CV(%)為(6.33±0.50)%。

表4 各試劑盒變異系數(shù)比較

3 討 論

ELISA原理是將待測抗原、抗體固定在固相載體表面，用酶標(biāo)抗原或抗體與固定抗體或抗原進(jìn)行特異性反應(yīng)，加入酶底物進(jìn)行顯色，再用分光光度計(jì)進(jìn)行顯色情況的觀察，是一種半定量檢測技術(shù)[5]。ELISA是當(dāng)前應(yīng)用最為廣泛的HIV初篩方法，具有操作簡單、檢測時(shí)間短、成本低等優(yōu)點(diǎn)，對實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求較低，適用于基層實(shí)驗(yàn)室檢測，對于ELISA有反應(yīng)性的標(biāo)本再進(jìn)行重組免疫印跡、核酸檢測進(jìn)行驗(yàn)證[6-7]。

當(dāng)前HIV檢測時(shí)間長是HIV早期診斷的難題，陽轉(zhuǎn)血清盤是評(píng)價(jià)HIV早期檢測有效率的重要工具，本研究對商業(yè)血清陽轉(zhuǎn)盤進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，A試劑盒檢測平均檢測天數(shù)短于C試劑盒、B試劑盒。分析3種試劑盒的特點(diǎn)，B、C試劑盒均由HIV1/HIV2型抗原包被的微孔板及酶標(biāo)抗體組成。有研究證實(shí)，第四代抗原HIV檢測試劑盒固相包被P24抗原可將檢測窗口期提前至2周[8-9]；既往開展的針對獻(xiàn)血者的臨床研究也顯示，血清學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用HIV第四代試劑盒可縮短HIV感染檢測的窗口期[10]。

盡管ELISA試劑盒為初篩工具，但其準(zhǔn)確度及靈敏度仍關(guān)系到HIV患者的有效診治。本研究以血清標(biāo)本作為對象分析3種試劑盒的診斷效能，結(jié)果顯示，3種試劑盒仍存在一定誤診。目前對于第三代及第四代試劑盒對HIV感染檢測效果的評(píng)估已有一定報(bào)道，沈蕊等[11]開展的一項(xiàng)研究證實(shí)，第三代及第四代抗原HIV檢測試劑盒均具有較高的靈敏度及特異度，兩者能較為準(zhǔn)確地進(jìn)行HIV初篩；本研究3種檢測試劑盒診斷效能無差異，提示3種檢測試劑盒均可進(jìn)行較好的評(píng)估[12]；陳明軍等[13]近期針對無償獻(xiàn)血份群血液標(biāo)本的研究結(jié)果顯示，第三代及第四代HIV檢測試劑盒均有較好的檢測性能，第四代HIV檢測檢出率較高，但存在較高的假陽性率；黃秋芳等[14]也證實(shí)四代抗原抗體試劑較三代更為靈敏，但特異度較差。分析其原因可能為第四代試劑盒將兩種檢測放在一個(gè)實(shí)驗(yàn)內(nèi)進(jìn)行檢測，比單純進(jìn)行抗原或抗體檢測增加了非特異性風(fēng)險(xiǎn)，影響了檢測準(zhǔn)確性。另外，不同公司對抗原、抗體兩種成分結(jié)合可能存在一定差異，這些均可能造成檢測結(jié)果的差異。

本研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于使用當(dāng)前血站系統(tǒng)常用的3種試劑盒(2種是檢測抗體，1種是檢測抗原)，對檢測HIV的診斷效果進(jìn)行了比較，3種試劑盒診斷效能相當(dāng)，對在實(shí)際工作中早期診斷HIV具有一定價(jià)值。當(dāng)前臨床實(shí)際應(yīng)用中多選用2種試劑盒進(jìn)行檢測，對于有反應(yīng)性的標(biāo)本再進(jìn)行驗(yàn)證檢驗(yàn)，結(jié)合本研究，在臨床中將三代及四代檢測試劑聯(lián)合進(jìn)行檢測可能為HIV檢測的最佳組合，既能保證較好的檢測效能，也能縮短窗口期[15-16]。

開展本研究時(shí)受科研條件所限，分析指標(biāo)較少，研究內(nèi)容不夠深入，目前無法補(bǔ)充數(shù)據(jù)并增加分析指標(biāo)，這是本研究的不足之處，在今后的研究中一定增加分析指標(biāo)，更深入地開展相關(guān)研究。