羅漢果粗提物抑制H2O2誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞的ROS 生成及凋亡

李肖娟，李玉雪，周璐煒，王娟,2*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林 541199）

（2.桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院廣西肝臟損傷與修復(fù)分子醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西神經(jīng)鞘脂代謝相關(guān)疾病基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林 541001）

羅漢果（Siraitia grosvenorii）是我國(guó)特有的珍貴葫蘆科植物，是一種多年生草本藤蔓植物，主要產(chǎn)地為廣西，此外，廣東、江西、貴州、湖南等地區(qū)也有分布[1]。羅漢果素有“神仙果”之稱，作為廣西道地藥材，一種常用的藥食兩用的植物，其有效活性成分的研究也已被廣泛關(guān)注。在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中，羅漢果被用作肺部緩和劑，用于治療肺結(jié)核、哮喘、及急性支氣管炎等[2]，具有鎮(zhèn)咳祛痰、增強(qiáng)免疫、抗氧化損傷、潤(rùn)腸通便和抑癌等多種作用[3]，臨床上用于治療多種疾病，如前列腺癌、鼻咽癌、高血壓、糖尿病等[4]。其果實(shí)中含有以三萜苷類為主的非糖甜味的成分，包括羅漢果皂苷V、羅漢果皂苷IV 及羅漢果11-O-V 和羅漢果皂苷ⅢE 等。

胰島β細(xì)胞發(fā)生凋亡的主要原因與氧化應(yīng)激密切相關(guān)[5,6]。內(nèi)分泌胰島β細(xì)胞對(duì)活性氧（ROS）比其他組織細(xì)胞更加敏感，肥胖時(shí)機(jī)體會(huì)產(chǎn)生過(guò)量ROS 誘導(dǎo)β細(xì)胞功能障礙和凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致代謝失衡和高血糖[7]。因此抗氧化治療對(duì)于保護(hù)機(jī)體胰島β細(xì)胞，減少其氧化損傷，降低血糖具有重要的作用，談建成等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，羅漢果中的皂苷和黃酮成分均具有抗氧化作用，一方面可以通過(guò)減少脂質(zhì)過(guò)氧化物而增加肝臟的抗氧化能力，一方面通過(guò)清除人體胰島β細(xì)胞的活性氧自由基，減輕胰島細(xì)胞的損傷，改善細(xì)胞狀態(tài)，回復(fù)胰島β細(xì)胞的降血糖能力。羅漢果中另含羅漢果多糖[9]，具有多種生物活性，如降血脂、降血壓、降血糖[10]、調(diào)節(jié)免疫等。黃飛[11]對(duì)羅漢果多糖降低血脂的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羅漢果多糖可一定程度上降低膽固醇和甘油三酯的含量，從而降低血糖，輔助治療糖尿病，廣泛應(yīng)用于糖尿病人的代用糖。目前針對(duì)羅漢果提取物的研究多集中在羅漢果皂苷，國(guó)內(nèi)外關(guān)于使用羅漢果粗提物對(duì)防治糖尿病的干預(yù)研究還鮮有報(bào)道。本研究以小鼠MIN6 細(xì)胞為對(duì)象，通過(guò)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞的凋亡，給予不同濃度的羅漢果粗提物[12]（Momordica grosvenoriiextract，MGE），觀察其對(duì)細(xì)胞的氧化損傷及細(xì)胞凋亡的影響，為羅漢果粗提物在防治糖尿病中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與藥物

細(xì)胞小鼠胰島β細(xì)胞（MIN6 細(xì)胞系）為本課題組傳代保存。

羅漢果粗提物由桂林萊茵公司饋贈(zèng)，樣品編號(hào)LHG200618-02 2，其中提取方法參考劉輝等[13]研究方法。由高效液相色譜儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)里面主要含有羅漢果苷V（53.27%），羅漢果皂苷VI（1.21%），11-氧-羅漢果皂甙V（12.26%），羅漢果皂苷IV-E（2.45%）。

1.1.2 主要試劑與儀器

胎牛血清，美國(guó)CL?RK 公司；DMEM 培養(yǎng)基，美國(guó)Gibco 公司；噻唑藍(lán)（MTT），北京索萊寶科技有限公司；二甲基亞砜（DMSO）、H2O2，廣東西隴化工有限公司；DCFH-DA，美國(guó)Sigma 公司；RIPA 強(qiáng)裂解液，上海碧云天生物科技有限公司；β-actin、PCNA、Bax 單克隆抗體，美國(guó)Abcam 公司；鼠二抗、兔二抗，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；ECL 超敏化學(xué)發(fā)光試劑，合肥Bio sharp 公司；CellXpert C170 二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱，德國(guó)Eppendorf 公司；AC2-4S1 生物安全柜，新加坡ESCO 公司；Infinite M200 PRO 多功能酶標(biāo)儀，瑞士TECAN 公司；蛋白電泳系統(tǒng)、PowerPac Basic 蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，新加坡Bio-Rad 公司；TDZ4-WS 臺(tái)式低速離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；Centrifuge 5425 小型高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf 公司；Sorvall Biofuge Stratos Centrifuge 高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司；Annexin V-FITC 凋亡試劑盒、BD Accuri C6 Plus 流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

MIN6 細(xì)胞采用高糖DMEM 培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，青霉素100 U/mL，鏈霉素100 μg/mL）置于37℃，飽和濕度5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。使用含EDTA胰蛋白酶消化，按照1:3 傳代培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 藥物配制

配制1×PBS 緩沖液，其中取NaCl 8 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 3.58 g，KH2PO40.24 g 用雙蒸水定容至1 L。羅漢果粗提物用1×PBS 緩沖液配制成濃度為200 mg/mL 母液，H2O2用1×PBS 緩沖液配制成濃度為60 mmol/L 母液，實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需濃度用培養(yǎng)基稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3 H2O2氧化應(yīng)激損傷模型建立

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿面積80%以上時(shí)，消化并離心，每孔以2000 個(gè)細(xì)胞的密度種植于96 孔板中，每個(gè)濃度設(shè)立5 個(gè)復(fù)孔，37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，每孔加入100 μL 不同濃度H2O2（200、400、800、1200 μmol/L），24、48 和72 h 后每孔加入20 μL MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄上清，每孔加入150 μL DMSO 溶液混合均勻。采用酶標(biāo)儀于490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定光密度值（OD），計(jì)算IC50值。

1.2.4 羅漢果粗提物對(duì)MIN6 細(xì)胞活性的影響

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿面積80%以上時(shí)，消化并離心，每孔以2000 個(gè)細(xì)胞的密度種植于96 孔板中，待細(xì)胞貼壁后，將羅漢果粗提物母液用完全培養(yǎng)基稀釋成不同濃度（25、100、200、400、800、1000、1600 μg/mL），每孔100 μL 藥物，每個(gè)濃度設(shè)立5 個(gè)復(fù)孔。24 h 后每孔加入20 μL MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后棄上清，每孔加入150 μL DMSO 溶液混合均勻。采用酶標(biāo)儀于490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定光密度值（OD），計(jì)算IC50值。

1.2.5 MTT 檢測(cè)羅漢果粗提物和H2O2對(duì)MIN6 細(xì)胞活性的影響

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MIN6 細(xì)胞，用PBS 洗一次，用0.25%含EDTA 的胰蛋白酶于室溫消化2 min，加入培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞懸液移至15 mL 離心管中離心（1000 r/min，5 min），棄上清，加入適當(dāng)培養(yǎng)基，細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞密度為2000 cells/孔，接種于96 孔板中，每孔加入100 μL 細(xì)胞懸液，置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后，聯(lián)用羅漢果粗提物及過(guò)氧化氫組，先加入100 μL 羅漢果粗提物（200 μg/mL），待藥物作用1 h 后，給予H2O2（200、400、800、1200 μmol/L），空白對(duì)照組加入100 μL 完全培養(yǎng)基，單用羅漢果粗提物組加入100 μL濃度為200 μg/mL的羅漢果粗提物。每組設(shè)立5 個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后，每孔加入20 μL MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后棄上清，每孔加入150 μL DMSO 溶液混合混勻后。采用酶標(biāo)儀于490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定光密度值（OD）。

1.2.6 實(shí)驗(yàn)分組及MIN6 細(xì)胞形態(tài)觀察

將實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（Ctrl）、過(guò)氧化氫組（H2O2）、聯(lián)用羅漢果粗提物及過(guò)氧化氫組(MGE+H2O2)、羅漢果粗提物組（MGE）。其中空白對(duì)照組僅加入完全培養(yǎng)基；MGE 組加入羅漢果粗提物，濃度為200 μg/mL；過(guò)氧化氫組加入過(guò)氧化氫，濃度為500 μmol/L；MGE+H2O2組加入羅漢果粗提物（200 μg/mL）及過(guò)氧化氫（500 μmol/L）。

在6 孔板中均勻接種MIN6 細(xì)胞，加入2 mL 完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.2.7 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MIN6 細(xì)胞種于6 孔板中，按1.2.6分組給藥作用24 h 后，0.25%胰酶消化后收集細(xì)胞及上清于15 mL 離心管中，1000 r/min 離心5 min，棄上清，加入2 mL PBS 緩沖液混懸細(xì)胞沉淀再次離心，取沉淀結(jié)束后按照Annexin FITC/PI 雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡的步驟進(jìn)行操作并上機(jī)檢測(cè)凋亡率。

1.2.8 細(xì)胞中ROS 水平的檢測(cè)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MIN6 細(xì)胞種于6 孔板中，待其貼壁后，按1.2.6 分組給藥處理，24 h 后收集細(xì)胞，PBS洗滌3 次，每組中加入2 μmol/L 的ROS 探針DCFH-DA，避光室溫染色30 min，PBS 洗滌之后流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS 水平。

1.2.9 Western Blot 檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MIN6 細(xì)胞種于7 cm 培養(yǎng)皿中，按1.2.6 分組給藥24 h 后，收集沉淀，加入適量裂解液冰上放置30 min 后，于4 ℃，12000 r/min 離心20 min，取上清液，BCA 法定量，用12% SDS-PAGE 電泳分離120 min，轉(zhuǎn)膜70 min，5%脫脂牛奶室溫封閉3 h，加入一抗4 ℃孵育過(guò)夜，PBST 洗3 次，每次10 min，與二抗室溫孵育1 h，PBST 洗3 次，每次10 min，加入ECL 發(fā)光液，免疫印跡成像系統(tǒng)檢測(cè)目的蛋白。

1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用IBM SPSS Statistics 22（IBM；USA）統(tǒng)計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組樣本之間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組樣本之間采用單因素檢驗(yàn)分析，以p＜0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅漢果粗提物預(yù)保護(hù)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的MIN6 存活率的影響

2.1.1 不同濃度羅漢果粗提物對(duì)MIN6 細(xì)胞活性的影響

向小鼠胰島MIN6 細(xì)胞中加入不同濃度羅漢果粗提物24 h 后，檢測(cè)細(xì)胞活性。結(jié)果表明，當(dāng)羅漢果粗提物為25、100、200、400 μg/mL 時(shí)，細(xì)胞活力分別為99.67%、98.82%、97.27%、89.32%。200 μg/mL 時(shí)細(xì)胞活力達(dá)90%以上且相對(duì)400 μg/mL 的濃度來(lái)說(shuō)對(duì)細(xì)胞活力幾乎無(wú)抑制作用，因此我們選用200 μg/mL羅漢果粗提物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。（圖1a）

2.1.2 羅漢果粗提物減少H2O2對(duì)MIN6細(xì)胞的影響

從石瑤瑤等[14]的研究可知，H2O2作為一種常見(jiàn)的活性氧，易透過(guò)細(xì)胞膜從而導(dǎo)致氧化損傷和凋亡，是構(gòu)建細(xì)胞氧化損傷模型的常用試劑，因此本實(shí)驗(yàn)選擇H2O2進(jìn)行體外建模。MIN6 細(xì)胞經(jīng)H2O2誘導(dǎo)后，細(xì)胞存活率明顯下降，呈濃度依賴性，H2O2濃度越大，細(xì)胞存活率越低（如圖1b）；計(jì)算IC50值為540 μmol/L，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇500 μmol/L H2O2建立H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激模型；200 μg/mL 的羅漢果粗提物預(yù)處理1 h 后分別加入不同濃度H2O2（200、400、800 和1200 μmol/L）作用于MIN6 細(xì)胞，培養(yǎng)24、48 和72 h，檢測(cè)細(xì)胞活力。與單用H2O2組相比，羅漢果粗提物預(yù)處理后用H2O2處理各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活力明顯升高（如圖1c）。以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)羅漢果粗提物能將細(xì)胞活力由13.23%提高到61.48%，極顯著增加800 μmol/L H2O2導(dǎo)致的細(xì)胞增殖減少（p＜0.01）。

同時(shí)在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)也發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組（Control，Ctrl）細(xì)胞狀況生長(zhǎng)良好，細(xì)胞密度較H2O2組高，細(xì)胞膜邊緣清晰可見(jiàn)，H2O2組細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，皺縮變圓，變亮，而單用羅漢果粗提物組與對(duì)照組差異不大，這說(shuō)明H2O2很可能誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞發(fā)生了死亡。羅漢果粗提物組預(yù)處理組與單用H2O2相比，預(yù)處理組細(xì)胞密度有所增加，細(xì)胞碎片減少，死細(xì)胞也相應(yīng)減少，說(shuō)明羅漢果粗提物對(duì)H2O2誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞死亡具有一定的逆轉(zhuǎn)作用（如圖1d）。細(xì)胞存活是反映細(xì)胞活力及其增殖能力最直觀的指標(biāo)。各種因素導(dǎo)致的氧化應(yīng)激能使細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高，能損傷胰島細(xì)胞甚至誘導(dǎo)其發(fā)生細(xì)胞凋亡[5]。細(xì)胞存活越高，說(shuō)明氧化應(yīng)激對(duì)胰島細(xì)胞的損傷就越小。因此，細(xì)胞存活率是表明天然活性成分具有抗氧化活性的指標(biāo)之一[15]。蔡小華等人[15]發(fā)現(xiàn)辣木葉水提物能恢復(fù)H2O2損傷細(xì)胞的存活率到100%，說(shuō)明該提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性。本研究也發(fā)現(xiàn)200 μg/mL 羅漢果粗提物能將細(xì)胞活力由13.23%提高到61.48%，說(shuō)明羅漢果提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的胰島MIN6 細(xì)胞有良好的保護(hù)作用，能緩解H2O2對(duì)MIN6 細(xì)胞的氧化損傷。

2.2 羅漢果粗提物和H2O2 對(duì)MIN6 細(xì)胞中活性氧（ROS）的影響

胰島β細(xì)胞表達(dá)抗氧化酶很弱，尤其對(duì)活性氧簇（ROS）比其他組織更加敏感。而體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)量ROS[5,6,16]會(huì)誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞功能障礙和凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致血糖失衡，引起代謝失調(diào)及高血糖等疾病。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS 發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，H2O2單獨(dú)處理組綠色熒光顯著增強(qiáng)（熒光強(qiáng)度比對(duì)照組增加了1.35倍），而單用羅漢果粗提物預(yù)處理組的ROS 含量則無(wú)明顯變化，以上結(jié)果表明H2O2能增加ROS 含量，并有可能誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞的氧化損傷。用羅漢果粗提物預(yù)處理后，能降低H2O2導(dǎo)致的ROS 含量上升，甚至將細(xì)胞內(nèi)ROS 水平降至正常，與正常組相比無(wú)顯著性差異（p＞0.05），而與單用H2O2組相比，ROS 水平下降了26.86%，具有明顯差異（p＜0.05），說(shuō)明羅漢果粗提物可以抑制H2O2誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞內(nèi)ROS 水平升高。（如圖2）。H2O2引起的氧化應(yīng)激導(dǎo)致細(xì)胞受損，細(xì)胞存活減少甚至凋亡，羅漢果粗提物能明顯降低H2O2氧化應(yīng)激導(dǎo)致的ROS水平增高，從而能減輕ROS對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞的損傷和增殖抑制。

2.3 羅漢果粗提物對(duì)H2O2 誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞凋亡作用的影響

ROS 的過(guò)度產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致胰島β細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激凋亡，從而導(dǎo)致胰島素分泌不足和發(fā)生胰島素抵抗等[5]。前面的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)提示羅漢果粗提物能明顯增加MIN6 細(xì)胞的增殖，顯微鏡下觀察也發(fā)現(xiàn)羅漢果提取物干預(yù)后能減少死細(xì)胞的數(shù)量，推測(cè)其對(duì)MIN6 細(xì)胞的保護(hù)作用可能與其抗細(xì)胞凋亡有關(guān)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，單用羅漢果粗提物處理組細(xì)胞凋亡率為（3.13%）與對(duì)照組（3.52%）差異不明顯。H2O2處理組的凋亡率高達(dá)為26.12%，而羅漢果粗提物預(yù)處理后，明顯減少H2O2導(dǎo)致的MIN6 凋亡，下降到為15.57%，與H2O2單獨(dú)處理組相比差異顯著（p＜0.05），活細(xì)胞的數(shù)量（Q3 象限）增加了10%（如圖3）。以上結(jié)果表明羅漢果粗提物促進(jìn)氧化損傷胰島β細(xì)胞的存活，與其降低ROS 產(chǎn)生進(jìn)而減少H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有一定的關(guān)系。

2.4 Western blot 檢測(cè)凋亡及氧化應(yīng)激信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)

對(duì)作為細(xì)胞增殖指標(biāo)之一的PCNA[17]表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，Western blot 結(jié)果顯示單用H2O2組的PCNA 表達(dá)降低，降低為Ctrl 的27.02%，與對(duì)照組相比，差異極顯著（p＜0.001）而羅漢果粗提物預(yù)處理后能增加PCNA的表達(dá)，比單用H2O2處理組升高37.20%，差異具有顯著（p＜0.05），說(shuō)明羅漢果粗提物可以減少H2O2對(duì)MIN6細(xì)胞PCNA 表達(dá)的抑制，進(jìn)而促進(jìn)了MIN6 細(xì)胞的存活。

細(xì)胞凋亡[18-20]是維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序性死亡，作為一個(gè)主動(dòng)的過(guò)程，細(xì)胞凋亡涉及一系列基因的激活及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過(guò)程，包括Bcl-2 家族、caspase 家族、抑癌基因P53 等，其中Bcl-2[21-24]家族中包括抗凋亡和促凋亡的基因，如Bcl-2、Mcl-1、Bcl-w、Bax 等，Bax 作為促凋亡蛋白，對(duì)細(xì)胞凋亡具有重要意義。Western blot結(jié)果顯示，促凋亡蛋白Bax在單用H2O2組里表達(dá)增加，用羅漢果粗提物預(yù)處理后用H2O2處理Bax 表達(dá)下降，說(shuō)明羅漢果粗提物可以減少H2O2導(dǎo)致的Bax 增加，這可能是其具有抗凋亡活性的分子機(jī)制之一。

綜上所述，說(shuō)明羅漢果粗提物對(duì)H2O2誘導(dǎo)的增殖抑制、ROS 生成以及細(xì)胞凋亡有明顯的改善作用，與其升高PCNA 的水平以及降低促凋亡蛋白Bax 的表達(dá)有關(guān)，這可能也是羅漢果發(fā)揮促增殖及抗凋亡作用的機(jī)制之一。研究表明羅漢果粗提物可通過(guò)抑制H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡，促進(jìn)胰島細(xì)胞的存活，進(jìn)而能改善葡萄糖刺激胰島素分泌功能，該研究為糖尿病的預(yù)防提供了新的思路，但羅漢果粗提物對(duì)糖尿病的預(yù)防作用深層機(jī)制和臨床應(yīng)用仍需要進(jìn)一步的探討。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以羅漢果粗提物為研究對(duì)象，以H2O2誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞構(gòu)建氧化應(yīng)激損傷模型，分別從細(xì)胞增殖、細(xì)胞內(nèi)ROS 水平、細(xì)胞凋亡以及增殖凋亡因子PCNA和Bax 的表達(dá)等方面探討羅漢果粗提物對(duì)H2O2誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，羅漢果粗提物能顯著緩解H2O2引起的MIN6 細(xì)胞的增殖抑制和細(xì)胞內(nèi)ROS 的增多，增加細(xì)胞促增殖因子PCNA 的表達(dá)以及減少促凋亡因子Bax 的水平，從而提高M(jìn)IN6細(xì)胞的存活。以上研究表明，羅漢果粗提物具有較強(qiáng)的細(xì)胞抗氧化活性及抗凋亡作用，這為后續(xù)羅漢果對(duì)胰島細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制提供了研究基礎(chǔ)，也為將羅漢果抗氧化降血糖的功能產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。