青光安Ⅱ號(hào)方對(duì)DBA/2J 小鼠視網(wǎng)膜中Rho/ROCK 相關(guān)因子的影響

時(shí) 健，彭 俊，姚小磊，孫嘉檜，李銀鑫，彭清華

（1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙 410208；2. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長沙 410208；3. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西南寧 530022；4.中醫(yī)藥防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長沙 410208）

青光眼作為目前不可逆眼部疾病的第一位，2040 年全球原發(fā)性青光眼患病人數(shù)超過1.118 億［1］。中國青光眼患者是目前全球青光眼患者人數(shù)最多的國家，我國40 歲及以上的總患病率為2.3%～3.6%，其中54.9%～82.0% 的青光眼患者未被診斷，6.3%～14.1%的青光眼患者雙眼致盲［2］，研究表明，72%的青光眼患者在就醫(yī)時(shí)已是晚期［3］。而控制眼壓是臨床上保存視力的較為重要的方式，但眼壓穩(wěn)定后，視力依舊出現(xiàn)下降的情況，這就是青光眼導(dǎo)致的視神經(jīng)損傷。前期研究已經(jīng)表明青光安Ⅱ號(hào)方可能抑制Rho/ROCK 信號(hào)通路從而保護(hù)視網(wǎng)膜的作用［4］，但其僅蛋白水平進(jìn)行驗(yàn)證，所以本次研究通過q?PCR 技術(shù)，從基因?qū)用孢M(jìn)一步驗(yàn)證其是否通過抑制Rho/ROCK 信號(hào)通路，進(jìn)而保護(hù)DBA/2J 小鼠視網(wǎng)膜的作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取48 只健康DBA/2J 小鼠，質(zhì)量18～22 g，SPF 級(jí)，雌性，10 周齡，許可證號(hào)：SCXK（京）2016?0006，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供；8 只C57BL/6J 小鼠，質(zhì)量18～22 g，SPF級(jí)，雌性，10 周齡，許可證號(hào)：SCXK（湘）2016?0002，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。倫理批準(zhǔn)編號(hào)：LL20191008021。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 青光安Ⅱ號(hào)方湯劑：由枸杞（生產(chǎn)批號(hào)：SL19112203）、牛膝（ 生產(chǎn)批號(hào)：CK19101401）等用滅菌蒸餾水按規(guī)定比例煎煮；益脈康分散片（湖南湘雅制藥有限公司，批號(hào)：1903119）；青光安Ⅱ號(hào)方有效組分：是基于中藥高通量篩選體系［5］對(duì)青光安Ⅱ號(hào)方中藥組分進(jìn)行篩選，提取出青光安Ⅱ號(hào)方有效組分。

1.1.3 主要試劑與儀器 RNA 提取液（武漢賽維爾生物科技有限公司，貨號(hào)：G3013）；三氯甲烷（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號(hào)：10006818）；異丙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號(hào)：8010921）；無水乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號(hào)：10009218）；HyPureTMMolecular Biology Grade Wa?ter（HyClone，貨號(hào)：SH30538.02）；Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo，貨 號(hào) ：#K1622）；Fast Start Universal SYBR Green Master（Rox）（武漢賽維爾生物科技有限公司，貨號(hào)：4913850001）。

勻漿儀（武漢賽維爾生物科技有限公司，型號(hào)：KZ?Ⅱ）；臺(tái)式高速冷凍型微量離心機(jī)［大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）股份公司，型號(hào)：D3024R］；熒光定量PCR 儀（賽默飛，型號(hào)：Stepone plus）；超凈工作臺(tái)（蘇凈安泰，型號(hào)：SW?CJ?1FD）；超微量分光光度（賽默飛，型號(hào)：NanoDrop2000）；標(biāo)準(zhǔn)試劑型純水儀（青島富勒姆科技有限公司，型號(hào)：FBZ2001?up?p）。

1.1.4 引物 引物合成公司：武漢賽維爾生物科技有限公司。引物序列見表1。

表1 引物序列表Tab 1 Primer sequence

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物及分組 將48 只DBA/2J 小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為6 組，每組8 只，設(shè)為模型組、益脈康分散片組、青光安Ⅱ號(hào)湯劑組、青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低、中、高濃度組，同時(shí)使用8 只C57BL/6J 小鼠作為空白組。

1.2.2 模型建立 根據(jù)文獻(xiàn)［6］，DBA/2J 小鼠喂養(yǎng)至38 周齡自動(dòng)形成青光眼模型。觀察DBA/2J 小鼠眼壓及眼前節(jié)變化，確定是否形成青光眼模型。

1.2.3 給藥方式 待模型成立且穩(wěn)定后，開始灌胃，每日1 次，連續(xù)4 周。通過人/動(dòng)物體表面積等效劑量比值表計(jì)算成人等效劑量。空白組和模型組予以等效劑量蒸餾水；益脈康分散片組予以等效劑量（0.31 g·kg?1·d?1）益脈康分散片懸混液；青光安Ⅱ號(hào)湯劑組予以等效劑量（9.67 g·kg?1·d?1）青光安Ⅱ號(hào)方湯劑；青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低、中、高濃度組組分別予以成人等效劑量的1/2 倍、1 倍、2 倍（0.85、1.70、3.40 g·kg?1·d?1）青光安Ⅱ號(hào)方有效組分懸混液。

1.3 取材與檢測(cè)

將各組小鼠行處死，取出眼球，除去眼前節(jié)及玻璃體，迅速剝離出視網(wǎng)膜組織，低溫保存，供q?PCR 檢測(cè)。

1.3.1 眼壓檢測(cè) 使用Tono?pen AVIA 接觸式眼壓筆，取連續(xù)10 次測(cè)量的平均值（且LCD 上顯示置信指標(biāo)≥95）作為當(dāng)周該眼眼壓值，每4 周測(cè)1 次，從第10 周開始，待到DBA/2J 小鼠眼壓升高以及趨于穩(wěn)定后停測(cè)。

1.3.2 眼前節(jié)檢測(cè) 所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后接受眼前段裂隙燈檢查，每4 周檢查1 次。由3 位固定的實(shí)驗(yàn)人員在檢查室內(nèi)進(jìn)行操作完成，一位負(fù)責(zé)將小鼠托舉在裂隙燈頜架裝置適當(dāng)高度位置，一位負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)焦距，通過目鏡觀察小鼠眼前段情況，觀察部位包括角膜、虹膜、前房、瞳孔、晶狀體等，一位負(fù)責(zé)電腦拍照。

1.3.3 q?PCR 檢測(cè)RhoA mRNA、ROCK mRNA、Caspase?3 mRNA 及Bcl?2 mRNA 轉(zhuǎn)錄的表達(dá) （1）RNA 抽提：在勻漿管中，加入1 mL 的Trizol Re?agent，置于冰上預(yù)冷，加入100 mg 組織，使用勻漿儀充分研磨，12 000 r/ min 離心10 min，取上清，加入250 μL 三氯甲烷，混勻后靜置3 min，1 2000 r/min 離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入0.8 倍體積的異丙醇，顛倒混勻，?20 ℃放置15 min，12 000 r/min 離心10 min。吸除液體，加入75% 乙醇1.5 mL 洗滌沉淀，12 000 r/min 離心5 min，吸出液體，將離心管置于超凈臺(tái)上吹3 min，加入15 μL 無RNA 酶的水溶解RNA，55℃孵育5 min，使用Nanodrop 2000 檢測(cè)RNA 濃度及純度。將濃度過高的RNA 進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋，使其終濃度為100～500 ng/μL。（2）反轉(zhuǎn)錄：取一PCR 管，加入含10 μL RNA 和1 μL oligo（dT）18，用無核糖核酸酶的去離子水補(bǔ)足至12 μL，于PCR 儀上65 ℃保溫5 min，迅速置冰上冷卻，依次加入4 μL 5×Reaction Buffer，2 μL10 mmol/L dNTP Mix，1 μL RiboLock RNAase 抑制劑（20 U/μL）和1 μL RevertAi M?MuLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（200 U/μL），混勻，于PCR 儀上42 ℃保溫60 min，結(jié)束后70 ℃保溫5 min 滅活反轉(zhuǎn)錄酶。（3）定量PCR：取0.2 mL PCR 管，加入2×qP?CR Mix（12.5 μL），7.5 μmol/L 基因引物（2.0 μL），反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（2.5 μL），ddH2O（8.0 μL），3 管。PCR擴(kuò)增：預(yù)變性（95 ℃10 min），循環(huán)（40 次95 ℃15 s→60 ℃60 s），熔解曲線（60℃→95 ℃每15 s 升溫0.3 ℃），（4）結(jié)果處理：2?△△Ct法：△Ct 試驗(yàn)=Ct 目的?Ct 內(nèi)參，△Ct 對(duì)照=Ct 目的?Ct 內(nèi)參；△△Ct=△Ct 實(shí)驗(yàn)?△Ct 對(duì)照；相對(duì)表達(dá)量=2?△△Ct。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS26.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，行雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)性意義。計(jì)量資料用（±s）表示。進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，進(jìn)行單因素方差分析或校正單因素方差分析。采用Tukey法進(jìn)行多組比較。若不滿足正態(tài)性要求，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 眼壓結(jié)果

C57BL/6J 小鼠眼壓持續(xù)穩(wěn)定，持續(xù)波動(dòng)在11～14 mmHg，DBA/2J 小鼠眼壓從第10 周齡開始持續(xù)升高，38 周齡時(shí)達(dá)到（23.41±2.26）mmHg［4］，已形成高眼壓型小鼠模型，從第14 周開始，空白組眼壓與其他組眼壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），18 周以后眼壓差異較大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖1。

圖1 C57BL/6J 小鼠與DBA/2J 小鼠不同時(shí)間點(diǎn)眼壓比較Fig 1 IOP comparison at different time points between C57BL/6J mice and DBA /2J mice

2.2 眼前節(jié)檢測(cè)

C57BL/6J 小鼠眼前節(jié)無明顯變化（圖2A、B），DBA/2J 小鼠10 周齡時(shí)即出現(xiàn)角膜鈣化（圖2C）；且角膜鈣化加重，出現(xiàn)虹膜色素脫失播散，局部出現(xiàn)虹膜透照，虹膜基質(zhì)萎縮，瞳孔后粘連，到38 周齡時(shí)虹膜色素脫失加重，瞳孔移位，部分并發(fā)白內(nèi)障（圖2D）。

圖2 C57BL/6J 小鼠與DBA/2J 小鼠不同周齡眼前節(jié)情況Fig 2 Anterior segment of C57BL/6J mice and DBA/2J mice at different ages

2.3 q?PCR 檢測(cè)結(jié)果

在RhoA mRNA 的轉(zhuǎn)錄中，與空白組相比，其它6組的相對(duì)表達(dá)量均升高，但模型組、益脈康分散片組及青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組相比較，其它6 組的相對(duì)表達(dá)量均低于模型組，僅青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其它無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。在ROCK mRNA 的轉(zhuǎn)錄中，與空白組比較，除高濃度組以外，其它5 組相對(duì)表達(dá)量明顯升高，但僅模型組、益脈康分散片組及青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；模型組的ROCK mRNA 轉(zhuǎn)錄高于其它6 組，與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中、高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組與益脈康分散片組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其它無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表1。

表1 不同組RhoA mRNA 和ROCK mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，±s）Tab 1 Comparison of RhoA mRNA and ROCK mRNA rela?tive expression in different groups（n=3，±s）

表1 不同組RhoA mRNA 和ROCK mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，±s）Tab 1 Comparison of RhoA mRNA and ROCK mRNA rela?tive expression in different groups（n=3，±s）

注：與空白組比較,*P<0.05；與模型組比較,#P<0.05；與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組比較,△P<0.05；與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組比較,▲P<0.05。

ROCK mRNA 1 125.20±13.13*62.79±1.30*▲47.54±1.88 52.10±2.85*25.35±6.12#9.03±0.76#19.549 0.003組別空白組模型組益脈康分散片組青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中濃度組青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組HP RhoA mRNA 1 7.30±0.83*4.21±0.25*3.71±0.30#4.83±0.12*4.06±0.70 1.97±0.12#△18.333 0.005

在Caspase?3 mRNA 的轉(zhuǎn)錄中，與空白組比較，其它6 組相對(duì)表達(dá)量均上升，僅模型組、益脈康分散片組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，其它6 組均下降，青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中、高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；益脈康分散片組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其它無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。在Bcl?2 mRNA 轉(zhuǎn)錄中，與空白組比較，其它6 組相對(duì)表達(dá)量均下降，模型組、青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中、高濃度組的Bcl?2 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量均高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其它無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

表2 不同組Caspase?3 mRNA 和Bcl?2 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，±s）Tab 2 Comparison of relative Caspase?3 mRNA and Bcl?2 mRNA expression of different groups（n=3，±s）

表2 不同組Caspase?3 mRNA 和Bcl?2 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，±s）Tab 2 Comparison of relative Caspase?3 mRNA and Bcl?2 mRNA expression of different groups（n=3，±s）

注：與空白組比較,*P<0.05；與模型組比較,#P<0.05；與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組比較,△P<0.05；與青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組比較,▲P<0.05。

組別空白組模型組益脈康分散片組青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組青光安Ⅱ號(hào)方有效組分低濃度組Caspase?3 mRNA 1 6.90±1.26*4.49±0.34*▲3.59±0.37 4.45±0.13*▲Bcl?2 mRNA 1 0.12±0.01*0.44±0.01 0.43±0.05*0.40±0.00*青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中濃度組3.25±0.70#0.47±0.06#0.62±0.01#△18.068 0.006青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高濃度組HP 1.86±0.09#19.132 0.004

3 討論

青光眼中晚期出現(xiàn)不可逆的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGCs）及其軸突緩慢而漸進(jìn)地喪失是無法避免的，且在眼壓控制后的情況下，仍然不能緩解，所以如何保護(hù)視神經(jīng)和減少視神經(jīng)凋亡是目前研究的重點(diǎn)。前期研究發(fā)現(xiàn)青光安Ⅱ號(hào)方在視神經(jīng)保護(hù)中具有優(yōu)勢(shì)。我們之前發(fā)現(xiàn)青光安Ⅱ號(hào)方作用機(jī)制之一是通過抑制GSK?3β mRNA 的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)β?catenin mRNA 表達(dá)，激活Wnt/β?catenin 信號(hào)通路［7］，而后上調(diào)PAX6、Ngn1、Ngn2 mRNA 的表達(dá)量［8］，從而發(fā)揮保護(hù)視神經(jīng)的作用。另一種機(jī)制為青光安Ⅱ號(hào)方對(duì)NF?кB/HIF?1α 通路的改變，抑制了BNIP?3 和SOD，前者減弱了RGCs 的線粒體自噬，而后者使MDA 的減少［9］。當(dāng)然也有可能是通過促進(jìn)HSP 的表達(dá)［10］，進(jìn)而保護(hù)了線粒體的功能，從而減弱視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的線粒體自噬。

而目前所研究的青光安Ⅱ號(hào)方有效成分是基于Wnt/β?Catenin/Pax6 的中藥高通量篩選體系進(jìn)行篩選的，同時(shí)也驗(yàn)證了其通過Wnt/β?Catenin 信號(hào)通路對(duì)青光眼視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞起到保護(hù)作用［8］，所以筆者認(rèn)為Wnt/β?Catenin 信號(hào)通路與Rho/ROCK信號(hào)通路在保護(hù)青光眼視神經(jīng)作用上具有一定協(xié)同作用。研究表明玻璃體內(nèi)注射Rho?GTPase 抑制劑C3 轉(zhuǎn)移酶（BA?210）可提高RGC 的存活率和軸突再生［11］，同時(shí)短暫的視網(wǎng)膜缺血再灌注，主要是將白細(xì)胞通過血管內(nèi)皮細(xì)胞浸潤到神經(jīng)組織中，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)元細(xì)胞的丟失［12］，而Rho/ROCK 信號(hào)通路主要使白細(xì)和內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接，使其減少浸潤［13］。ROCK 抑制劑Y?27632 可促進(jìn)原代RGCs?5 細(xì)胞系的活性，局部施用Rock/Net 抑制劑可促進(jìn)視神經(jīng)損傷后RGC 的存活和再生［14］。ROCK 抑制劑E212 治療可抑制氧化應(yīng)激和抗炎作用，減少RGCs 的損失［15］。Rho/ROCK 通路的失活可以促進(jìn)神經(jīng)突的再生［16，17］。

我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為青光眼是氣虛血瘀，脈絡(luò)阻滯，致目竅失養(yǎng)，而玄府閉塞，使神水瘀積［18］，所以在治療上采用益氣活血利水的治法［19］。青光安Ⅱ號(hào)方側(cè)重補(bǔ)肝腎之陰，同時(shí)在補(bǔ)益基礎(chǔ)上，活血利水行氣，氣行則血行、氣行亦水行，全方補(bǔ)通兼施，使目竅通暢、氣血調(diào)和。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與之前的WB 結(jié)果相似［4］，發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜中RhoA mRNA、ROCK mRNA、Caspase?3 mRNA 轉(zhuǎn)錄時(shí)相對(duì)表達(dá)量升高，模型組明顯升高，其中青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組和青光安Ⅱ號(hào)方有效組分高劑量組具有較明顯的作用，而青光安Ⅱ號(hào)方有效組分的3 個(gè)組中，高劑量組與低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明高劑量組對(duì)RhoA mRNA、Caspase?3 mRNA 的轉(zhuǎn)錄具有明顯的抑制作用。而Bcl?2 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量均降低，其中模型組最低，而青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中、高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與空白組沒有差異，說明兩組有較為明顯的作用，同時(shí)而青光安Ⅱ號(hào)方有效組分的3 個(gè)組中，高劑量組與低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明青光安Ⅱ號(hào)方可以提高Bcl?2 mRNA 的轉(zhuǎn)錄，從而提高Bcl?2 的表達(dá)，來抑制Caspase?3 mRNA 的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而抑制Caspase?3。

但是筆者發(fā)現(xiàn)青光安Ⅱ號(hào)方有效組分中劑量組的ROCK mRNA 的表達(dá)量（25.35±6.12）與青光安Ⅱ號(hào)方湯劑組（47.54±1.88）有一定的差別，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.51），可能是因?yàn)橛行С煞謱?duì)于ROCK mRNA 具有特定的抑制作用，而湯劑可能是因?yàn)楹械牟幻鞯某煞謱?duì)于有效成分有一定的抑制作用。所以根據(jù)其對(duì)于相關(guān)因子的表達(dá)量可以發(fā)現(xiàn)，青光安Ⅱ號(hào)方有效成分效果更好，可以為以后臨床用藥提供指導(dǎo)，通過改良劑型，以達(dá)到較好的療效。

所以本次實(shí)驗(yàn)與之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，表明了高濃度青光安Ⅱ號(hào)方可能是通過抑制Rho/ROCK信號(hào)通路從而減弱了視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡。

作者貢獻(xiàn)度說明：

時(shí)?。簩?shí)驗(yàn)，撰寫論文；彭俊：數(shù)據(jù)分析；姚小磊：指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)；孫嘉檜：實(shí)驗(yàn)；李銀鑫：實(shí)驗(yàn)；彭清華：指導(dǎo)與監(jiān)督。

本文無任何利益沖突。