章 婧,陳海欣,喻夢(mèng)夢(mèng),高穎茵,劉文字,蔣紅霞
(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院 國(guó)家獸醫(yī)微生物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室/廣東省獸藥研制與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510642)
腸球菌(Enterococcus)為革蘭陽(yáng)性菌,廣泛分布于自然環(huán)境(如土壤、水和植物)中,也是人和動(dòng)物胃腸道內(nèi)常見的共生菌[1]。由于其參與宿主多項(xiàng)生理功能,因此被認(rèn)為是對(duì)人類無(wú)害的共棲菌。但當(dāng)機(jī)體的免疫環(huán)境遭到抑制或破壞時(shí),腸球菌則會(huì)引起感染,通常包括傷口、尿道、腹腔、血流和外科手術(shù)感染[2]。目前,腸球菌是院內(nèi)感染的重要病原菌。由于腸球菌具有固有耐藥特征,并且具有獲得耐藥性和毒力因子及形成生物被膜的能力和傾向[3-4],因此給臨床治療帶來(lái)困難和挑戰(zhàn)。隨著抗生素在養(yǎng)殖業(yè)的大量、長(zhǎng)期使用,導(dǎo)致動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性快速增長(zhǎng)。而抗生素耐藥性可隨動(dòng)物腸道細(xì)菌傳播給人類的潛在風(fēng)險(xiǎn),已經(jīng)成為全球關(guān)注的食品安全和公共衛(wèi)生問(wèn)題[5]。
腸球菌具有天然的將耐藥性及毒力因子以水平轉(zhuǎn)移方式傳播給其他細(xì)菌的能力,因此養(yǎng)殖場(chǎng)長(zhǎng)期使用抗生素選擇出耐藥腸球菌,成為了人類耐藥條件致病菌的儲(chǔ)庫(kù)。有研究表明,腸球菌自身分泌的毒力因子與其致病力的有關(guān),包括膠原蛋白黏附素(ace)、溶血素(cly)、心內(nèi)膜炎抗原(efaA)、表面蛋白(esp)、明膠酶E(gelE)、聚集物質(zhì)(asal)、透明質(zhì)酸(hyl)等[6-7]。
加強(qiáng)養(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物腸道共生菌抗生素耐藥監(jiān)測(cè)對(duì)遏制耐藥菌/耐藥基因傳播具有重要意義。泛歐盟一項(xiàng)長(zhǎng)期(2004—2014年)的食品動(dòng)物中抗生素敏感性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目(EASSA),監(jiān)測(cè)從屠宰的健康食品動(dòng)物(肉雞、屠宰豬和肉牛)中分離的人畜共患病原(沙門菌和彎曲桿菌)和共生菌(大腸桿菌和腸球菌)的抗生素敏感性表明,健康食品動(dòng)物中腸球菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)較低,對(duì)醫(yī)學(xué)臨床上至關(guān)重要的抗生素仍然敏感或者低水平耐藥[8]。食品安全問(wèn)題目前越來(lái)越受到人們的重視,其關(guān)系到消費(fèi)者的生命健康。而生鮮肉類產(chǎn)品較易污染致病菌,其引起的食源性疾病是食品安全最主要的危險(xiǎn)因素之一[9]。而目前我國(guó)食品源腸球菌抗生素耐藥性相關(guān)研究報(bào)道較少,尤其對(duì)醫(yī)學(xué)臨床重要抗生素的耐藥水平、傳播擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)尚不清楚。因此,本試驗(yàn)采集了國(guó)內(nèi)惠州、肇慶、鄭州、天津4個(gè)城市不同超市的雞肉樣品,以具有重要公共衛(wèi)生意義的糞腸球菌為對(duì)象,分析超市零售雞肉源腸球菌耐藥現(xiàn)狀、耐藥基因和毒力基因的流行分布,研究結(jié)果為細(xì)菌耐藥性監(jiān)控提供數(shù)據(jù),也為評(píng)估由此帶來(lái)的食品安全和公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)提供理論依據(jù)。
1.1 試驗(yàn)菌株2020年9-10月從惠州、肇慶、鄭州、天津4個(gè)城市的超市雞肉樣品中分離到41株糞腸球菌,質(zhì)控菌ATCC29212、MALDI-TOF-MS 菌種鑒定標(biāo)定菌株大腸桿菌8739保存于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理教研室。
1.2 主要試劑和儀器MH固體培養(yǎng)基、MH液體培養(yǎng)基、BHI固體培養(yǎng)基、BHI液體培養(yǎng)基、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷固體培養(yǎng)基均購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;2×HieffPCR Master Mix購(gòu)自翌圣生物科技(上海)有限公司;微生物質(zhì)譜鑒定儀MALDI-TOF-MS(基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀)購(gòu)自島津公司。
1.3 菌株的分離鑒定2020年9-10月間,采集了惠州、肇慶、鄭州、天津4個(gè)不同城市的超市雞肉樣品96份,樣品置于冰盒,于24 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行腸球菌的分離和鑒定:雞肉樣品在6.5% NaCl高鹽BHI肉湯中,37℃過(guò)夜增菌,劃線接種于疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂平板。37℃培養(yǎng)18~24 h后,觀察其菌落形態(tài)及培養(yǎng)基顏色,在培養(yǎng)基上大小中等、表面光滑,且能使周圍培養(yǎng)基變黑的典型菌落,可初步判斷為腸球菌。采用PCR方法對(duì)菌株進(jìn)行分子鑒定:擴(kuò)增糞腸球菌特異性持家基因[10]。PCR反應(yīng)體系為25 μL,反應(yīng)條件:94℃ 5 min;94℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 1 min,共30個(gè)循環(huán);72℃終延伸5 min。引物由北京擎科生物科技有限公司合成。采用微生物質(zhì)譜鑒定儀MALDI-TOF-MS(基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀)對(duì)PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的糞腸球菌進(jìn)行鑒定。
1.4 藥物敏感性試驗(yàn)按照2018年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(CLSI)推薦的抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn),對(duì)分離出的糞腸球菌進(jìn)行氨芐西林(AMP)、左氧氟沙星(LVX)、環(huán)丙沙星(CIP)、四環(huán)素(TET)、多西環(huán)素(DOX)、替加環(huán)素(TGC)、萬(wàn)古霉素(VAN)、利奈唑胺(LZD)、利福平(RFP)、紅霉素(ERY)、氯霉素(CHL)、氟苯尼考(FFC)等8大類12種藥物的最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定。同時(shí)本試驗(yàn)也對(duì)分離株進(jìn)行了高水平氨基糖苷類耐藥(HLAR)、高水平鏈霉素耐藥(HLSR)檢測(cè)??股孛舾行越Y(jié)果依據(jù)CLSI的耐藥折點(diǎn)來(lái)判斷。
1.5 耐藥基因的檢測(cè)采用PCR方法檢測(cè)噁唑烷酮類(poxtA、optrA和cfr)、四環(huán)素類(tet(M)和tet(L))、氯霉素類(fexA、fexB和floR)、大環(huán)內(nèi)酯類 (ermB)、喹諾酮類(qnrA、qnrB、qnrS)、糖肽類(vanA和vanB)等抗生素耐藥基因,引物設(shè)計(jì)與退火溫度參照文獻(xiàn)[11],擴(kuò)增體系同1.3。擴(kuò)增后的產(chǎn)物通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),陽(yáng)性產(chǎn)物送至北京擎科生物科技有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果通過(guò)NCBI網(wǎng)站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行Blast分析。
1.6 毒力基因的檢測(cè)對(duì)攜帶重要抗生素耐藥基因optrA、cfr的腸球菌株,參照文獻(xiàn)[12],采用PCR方法,對(duì)ace、cylA、cylB、cylM、efaA、esp、gelE、asal、hyl和agg等10種常見的毒力基因進(jìn)行篩查。擴(kuò)增體系同1.3。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間比較采用x2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中0.05
2.1 細(xì)菌的分離鑒定通過(guò)實(shí)驗(yàn)室初步純化培養(yǎng),從形態(tài)上分離鑒定的疑似菌株進(jìn)行PCR以及MALDI-TOF-MS鑒定。從采集的96份雞肉源樣品中,共分離鑒定出41株糞腸球菌,其中來(lái)自鄭州的樣品,分離到10株糞腸球菌;肇慶樣品中,分離出14株;惠州和天津樣品中分別得到10株和7株糞腸球菌(表1)。
表1 2020年不同地區(qū)超市樣品糞腸球菌分離結(jié)果
2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析41株糞腸球菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,所有菌株均對(duì)AMP、VAN、LZD敏感,對(duì)LVX、CIP也很敏感,而對(duì)TET、DOX的耐藥率最高均達(dá)到75%以上;對(duì)ERY和HLAR的耐藥率分別為43.90%和41.46%。此外,菌株對(duì)RFP、CHL、FFC、HLSR的耐藥率在20%~37%之間,相對(duì)較低(表2)。有48.78%的菌株呈現(xiàn)多重耐藥表型(即對(duì)3類或3類以上的抗菌藥物耐藥)。
如表2所示,比較分離自不同地區(qū)超市雞肉的糞腸球菌,分離自天津樣品的菌株的耐藥率除對(duì)喹諾酮類藥物外,均低于其余3個(gè)地區(qū)的分離株,但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但值得注意的是,在鄭州的分離株中檢測(cè)到1株TGC耐藥菌株。
表2 41株糞腸球菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率 %
2.3 耐藥基因檢測(cè)結(jié)果耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示,tetL最流行,檢出率為51.22%。其次為ermB,檢出率48.78%。optrA的檢出率為41.46%;34.15%的菌株攜帶fexA;tetM基因的檢出率最低,為7.32%。poxtA、fexB、cfr、floR、qnrA、qnrB、qnrS、vanA、vanB等基因均未檢出。攜帶optrA基因的菌株往往攜帶多重耐藥基因(15/17)。
比較不同樣品來(lái)源糞腸球菌中耐藥基因的流行分布發(fā)現(xiàn)(圖1),分離自廣東惠州的糞腸球菌的耐藥基因更復(fù)雜,檢測(cè)到的耐藥基因種類、檢出率大多高于其余地區(qū)。這4個(gè)地區(qū)糞腸球菌所攜帶的耐藥基因組合均以optrA-tet(L)-fexA-ermB最為常見。
*表明差異顯著(0.01≤P≤0.05)
2.4 毒力基因檢測(cè)結(jié)果分析對(duì)分離到的41株糞腸球菌進(jìn)行毒力基因篩查,被檢的10種毒力基因中檢測(cè)出9種,其中efaA的檢出率最高,達(dá)到95.12%(39/41);其他依次為gelE73.17%(30/41)、agg58.54%(24/41)、asal36.59%(15/41)、ace34.15%(14/41)、cylA9.76%(4/41)。毒力基因cylB僅在1株廣州肇慶分離株中檢出。
檢測(cè)的腸球菌往往攜帶多種毒力基因,36.59%(15/41)菌株攜帶0~2種毒力基因,56.10%(23/41)的菌株攜帶3~5種毒力基因,有1株來(lái)自廣東肇慶的分離株同時(shí)攜帶8種毒力基因 (cylA、cylB、cylM、efaA、gelE、esp、agg、asal)。菌株攜帶的多個(gè)毒力基因以efaA-gelE-agg-asal組合最為常見。未檢測(cè)到hyl毒力基因。
不同地區(qū)來(lái)源的腸球菌,攜帶的毒力基因也有差異。結(jié)果顯示,除ace、asal外,廣州肇慶地區(qū)糞腸球菌中各毒力基因種類的檢出率均最高(圖2)。天津地區(qū)糞腸球菌ace的檢出率(71.43%)明顯高于廣東肇慶分離株(7.14%)(P<0.01)。廣東肇慶地區(qū)糞腸球菌gelE的檢出率(92.86%)明顯高于天津分離株(57.14%),agg的檢出率(78.57%)明顯高于廣東惠州分離株(20.00%)(P<0.05)。不同地區(qū)攜帶的毒力基因種類也不相同,廣東惠州地區(qū)以攜帶2種毒力基因的較多,以efaA-gelE最常見,在廣東肇慶地區(qū)攜帶3種毒力基因的較多,以efaA-gelE-agg為主,而在鄭州以及天津地區(qū)則以攜帶4種毒力基因的最多見。
兩組之間標(biāo)記字母相同,表示兩組之間不存在差異;兩組之間標(biāo)記字母不同,表示兩組之間存在差異
2.5 糞腸球菌攜帶毒力基因數(shù)與耐藥性的關(guān)系糞腸球菌對(duì)抗菌藥物敏感性和毒力基因之間的關(guān)系見表3。糞腸球菌攜帶毒力基因數(shù)≤2種的腸球菌共有15株(36.59%),攜帶毒力基因數(shù)3~5種的有23株(56.10%),毒力基因數(shù)≥6的有3株(7.32%)。但這三類菌株對(duì)CIP、DOX、RFP、ERY、FFC、HLGR、HLSR的耐藥率之間無(wú)明顯差異(P>0.05),推測(cè)糞腸球菌攜帶的毒力基因數(shù)與耐藥性無(wú)關(guān)聯(lián)。
表3 攜帶不同毒力基因數(shù)目的腸球菌對(duì)抗菌藥物耐藥率
由于臨床和畜牧養(yǎng)殖過(guò)程中大量使用抗菌藥物,使耐藥菌和耐藥基因普遍存在于人類、動(dòng)物及整個(gè)生態(tài)環(huán)境微生物中。基于“one health”理念下,人類、動(dòng)物和環(huán)境形成緊密關(guān)聯(lián)的整體,耐藥細(xì)菌及耐藥基因能在這個(gè)整體環(huán)境中不斷轉(zhuǎn)移、進(jìn)化和傳播。歐洲開展的抗生素耐藥性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明,無(wú)論是醫(yī)院還是社區(qū)獲得性感染的耐藥性調(diào)查均顯示臨床一些重要抗生素耐藥性都在增加,如2011-2012年間,醫(yī)院侵襲性金黃色葡萄球菌中甲氧西林耐藥率為41%,腸球菌中VAN耐藥率為10%,腸桿菌中第3代頭孢菌素耐藥率為33%,鮑曼不動(dòng)桿菌中碳青霉烯耐藥率高達(dá)81%。而過(guò)去10年中動(dòng)物和食物鏈中發(fā)現(xiàn)的抗生素耐藥性預(yù)示著人類抗生素耐藥性將進(jìn)一步增加。因此加強(qiáng)食品動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè),對(duì)保障食品安全和公共衛(wèi)生安全都具有重要意義。
本研究對(duì)不同地區(qū)超市雞肉源糞腸球菌調(diào)查研究表明,不同地區(qū)糞腸球菌的分布、耐藥性、耐藥基因和毒力基因分布均存在差異。4個(gè)不同地區(qū)的超市雞肉樣品中,共分離到糞腸球菌41株,分離率為42.71%。李金磊等[13]研究表明,在180份規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)雞源樣品中分離糞腸球菌100株??梢酝茰y(cè),在養(yǎng)殖過(guò)程中流行的糞腸球菌可能是超市零售雞肉糞腸球菌的重要來(lái)源之一。為了防止雞攜帶的糞腸球菌污染雞肉,導(dǎo)致影響食品安全的事件發(fā)生,在雞養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)加強(qiáng)糞便處理及測(cè)樣環(huán)境的清潔衛(wèi)生,避免糞腸球菌在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)大范圍的傳播。
近年來(lái),隨著腸球菌對(duì)抗生素耐藥性的逐漸上升,出現(xiàn)了萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌(VRE),利奈唑胺耐藥腸球菌(LRE)、HLAR腸球菌,給獸醫(yī)及人醫(yī)臨床治療帶來(lái)困難。對(duì)超市雞肉樣品中分離的41株糞腸球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果表明雞肉糞腸球菌存在一定的耐藥性。除喹諾酮類藥物外,各地區(qū)分離株對(duì)不同藥物的耐藥率基本呈現(xiàn)出廣東惠州地區(qū)最高,河南鄭州地區(qū)次之,天津地區(qū)最低的趨勢(shì),且對(duì)3類或3類以上抗菌藥物耐藥的多重耐藥菌株占48.78%。這表明在超市零售雞肉中耐藥腸球菌的存在已較為普遍。
TGC對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、厭氧菌有廣譜抗菌活性,包括多重耐藥的革蘭陽(yáng)性菌,如 MRSA、VRE等[14],為對(duì)抗“超級(jí)細(xì)菌”提供了重要保障。耐TGC腸球菌目前僅在人醫(yī)臨床有報(bào)道[15-16],是造成人類嚴(yán)重感染的主要細(xì)菌之一。本研究中,自河南鄭州的樣品中檢測(cè)到1株TGC耐藥菌株,應(yīng)當(dāng)引起重視。此外,盡管腸球菌對(duì)氨基糖苷類藥物低水平固有耐藥,但氨基糖苷類藥物與青霉素、糖肽類合用對(duì)腸球菌有協(xié)同治療作用,在臨床治療上有應(yīng)用價(jià)值[17]。2019年CHINET監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明,糞腸球菌對(duì)高濃度慶大霉素(HLAR)的耐藥率為39.8%[18],而本研究雞肉源糞腸球菌的HLAR為41.46%,劉洋等[19]報(bào)道北京和山東禽源腸球菌中,糞腸球菌的HLAR為26.6%;韓國(guó)一項(xiàng)研究表明雞源分離株中糞腸球菌的HLAR為25.5%[20];加拿大肉雞和火雞樣品糞腸球菌的HLAR為9.6%[21]。因此,我國(guó)雞肉源分離腸球菌對(duì)高濃度的氨基糖苷類耐藥情況高于醫(yī)院臨床株,也比其他國(guó)家食品源腸球菌耐藥率高。動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中不合理使用抗菌藥物,導(dǎo)致動(dòng)物源和環(huán)境細(xì)菌耐藥性日趨嚴(yán)重。腸球菌“作為抗生素耐藥基因儲(chǔ)庫(kù)”可以將耐藥基因轉(zhuǎn)移至其他腸球菌和其他革蘭陽(yáng)性細(xì)菌。而食源性耐藥腸球菌可能在消費(fèi)者的腸道中定殖并將耐藥基因轉(zhuǎn)移到腸道微生物群中。因此加強(qiáng)雞場(chǎng)腸球菌耐藥性監(jiān)測(cè)對(duì)控制耐藥性傳播、保障公共衛(wèi)生和人類健康具有重要意義。
人醫(yī)臨床及動(dòng)物源腸球菌中tetL、tetM、ermB檢出率很高[22],這些基因在本研究的雞肉源腸球菌中也有較高的檢出率。目前LZD是臨床多重耐藥革蘭陽(yáng)性菌,尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MASA)及VRE感染的有效治療藥物[23],LRE是目前最受人們關(guān)注的耐藥腸球菌之一。LZD的獲得性耐藥機(jī)制主要由cfr和optrtA、poxtA這幾種基因介導(dǎo)。自2015 年我國(guó)學(xué)者首次在腸球菌中發(fā)現(xiàn)可移動(dòng)的新型噁唑烷酮類耐藥基因optrA后,該基因已經(jīng)在多種革蘭陽(yáng)性菌,如腸球菌、葡萄球菌和鏈球菌中被發(fā)現(xiàn)[24-25]。CAI等[26]也對(duì)2010—2014年醫(yī)院隨機(jī)收集的腸球菌中optrA基因進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果表明optrA的陽(yáng)性率呈現(xiàn)出一定的增長(zhǎng)趨勢(shì)的。2015年,WANG等[27]報(bào)道了optrA在食品動(dòng)物源中的檢出率約為20.3%,在人醫(yī)臨床株中分離率為4.2%。本研究中,41.46%(17/41)的菌株分離到optrA基因,高于先前報(bào)道中的檢出率。畜禽專用藥物FFC被證明與在動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的LRE有著密切的關(guān)系[28-29],出現(xiàn)這種現(xiàn)象可能與飼養(yǎng)過(guò)程中FFC的使用情況有關(guān)。與之前的研究報(bào)道相似[25,27],腸球菌菌株攜帶optrA基因,但對(duì)LZD仍然敏感。
研究表明,腸球菌致病是由多種毒力基因和多重耐藥性協(xié)同作用的結(jié)果[30]。近年來(lái),腸球菌毒力基因越來(lái)越多被發(fā)現(xiàn),毒力基因雖不是糞腸球菌致病力的唯一原因,但確實(shí)與致病力相關(guān),兩者之間的具體關(guān)系尚未明確[31]。因此,糞腸球菌攜帶的毒力基因?qū)﹄u的養(yǎng)殖、雞肉及其食品安全有著重要的意義。毒力基因esp在腸球菌尿道感染中能使腸球菌定植在宿主細(xì)胞上,并且延長(zhǎng)腸球菌細(xì)菌在膀胱內(nèi)停留的時(shí)間。有研究認(rèn)為esp基因更能在臨床分離屎腸球菌中檢測(cè)到,在非臨床株以及動(dòng)物分離株中并未檢測(cè)到esp基因[32],但本研究在2株雞肉源糞腸球菌中檢出了esp,應(yīng)當(dāng)引起一定重視。本研究禽源腸球菌攜帶的毒力基因主要是efaA、gelE、agg,與豬源腸球菌毒力基因檢測(cè)結(jié)果[6-7]相似,
比較雞肉源糞腸球菌所攜帶的毒力基因數(shù)與耐藥型之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn),耐藥率之間的差異在CIP、DOX、RFP、ERY、FFC、HLGR、HLSR中均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與黃奕雯等[7]及祝進(jìn)等[31]的研究發(fā)現(xiàn)糞腸球菌對(duì)多種藥物的耐藥率與毒力基因數(shù)無(wú)關(guān)聯(lián)是一致的。糞腸球菌的耐藥性與其毒力基因的個(gè)數(shù)的關(guān)系需進(jìn)一步研究確定。
超市零售雞肉樣品中糞腸球菌耐藥情況較為嚴(yán)重,攜帶的耐藥基因和毒力基因流行且多樣,這些腸球菌可能在人、動(dòng)物甚至是環(huán)境之間進(jìn)行相互傳播,對(duì)公共衛(wèi)生帶來(lái)潛在危險(xiǎn)。因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)食品雞肉源糞腸球菌耐藥性監(jiān)測(cè)。