施今墨降糖對(duì)藥方對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝及胰島素抵抗的影響

★ 吳梅香 呂嘉婧 羅秀 曹治云 王紅日 陳旭征（.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院 福州 30003；.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 福州 30；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院 福州 30；4.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 福州 30；.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院 福州 3000）

2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）是一種以慢性高血糖為特征的代謝綜合征，是由于胰島素分泌和/或作用缺陷所引起［1］。胰島素抵抗（insulin resistance，IR）是T2DM的主要病理基礎(chǔ)，也是導(dǎo)致其他諸多慢性并發(fā)癥和心腦血管等組織器官發(fā)生功能減退或進(jìn)行性退變的共同病因，而糖脂代謝在胰島素抵抗中發(fā)揮著重要作用［2］。因此，改善IR和糖脂代謝成為了防治T2DM急需解決的問(wèn)題。

T2DM在中醫(yī)學(xué)又被稱為“消渴病”，以“陰虛”為本，“燥熱”為標(biāo)。中醫(yī)藥論治T2DM的歷史悠久，療效明確。國(guó)醫(yī)大師施今墨，論治消渴病經(jīng)驗(yàn)豐富，其中降糖對(duì)藥方采用氣陰雙補(bǔ)的方法，采用黃芪、生地，蒼術(shù)、玄參，丹參、葛根三組對(duì)藥配伍，益氣養(yǎng)陰固其本，活血化瘀治其標(biāo)，標(biāo)本兼治。經(jīng)過(guò)前期的臨床研究驗(yàn)證了施今墨降糖對(duì)藥方在糖尿病的臨床診療中具有顯著的療效［3-4］。本實(shí)驗(yàn)采用糖尿病模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察施今墨降糖對(duì)藥方對(duì)糖尿病大鼠的糖脂代謝以及IR的影響，為進(jìn)一步研究與驗(yàn)證施今墨降糖對(duì)藥方臨床療效與作用機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)SD雄性大鼠30只，4～6周齡，體質(zhì)量160～180 g，購(gòu)自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2013-0006）。大鼠飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，溫度22～25 ℃，濕度60%～70%，12 h光照維持，晝夜循環(huán)，自由攝食與飲水。

1.2 藥物

施今墨降糖對(duì)藥方：黃芪30 g、生地黃30 g、蒼術(shù)15 g、玄參30 g、丹參30 g、葛根15 g，由福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院藥劑科提供。

1.3 試劑

鏈脲佐菌素（STZ，麥克林，CAS：18883-66-4）；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號(hào)：20181017）；胰島素測(cè)試盒（北方生物技術(shù)研究所，生產(chǎn)批號(hào)：20180928）；血糖試紙（魚(yú)躍醫(yī)療）；高脂飼料（福建善思生物科技有限公司）。

1.4 儀器

微量血糖測(cè)試儀（魚(yú)躍醫(yī)療）；大鼠體重秤（松竫高精度電子秤）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司，ELX800）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模方法

將30只大鼠以普通飼料進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字法將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、施今墨降糖對(duì)藥方3組，每組10只。除正常組外，其余兩組采用STZ腹腔注射結(jié)合高脂飼料誘導(dǎo)T2DM模型大鼠。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)6周，模型組、施今墨降糖對(duì)藥方組均給予高脂飼料（60.7%基礎(chǔ)飼料，15%蔗糖，10%豬油，10%蛋黃粉，4%膽固醇，0.3%膽酚鹽）喂養(yǎng)6周。6周后，空腹12 h，除正常組以外的兩組的大鼠均腹腔注射小劑量STZ（30 mg/kg），正常組腹腔注射等體積的生理鹽水。3 d后模型組、施今墨降糖對(duì)藥方組所有大鼠均再次腹腔注射小劑量STZ（30 mg/kg），正常組腹腔注射等體積的生理鹽水。第2次腹腔注射后1周測(cè)空腹血糖（FBG），以2次FBG高于11.1 mmol/L或（和）隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)［5］。除正常組以外的兩組大鼠全部造模成功。

2.2 干預(yù)方法

建模成功后，正常組、模型組給予等量的生理鹽水灌胃，施今墨降糖對(duì)藥方組給予施今墨降糖對(duì)藥方，劑量為2.14 g/（kg·d）灌胃，灌胃給藥8周。給藥期間，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物予以普通飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)期間，所有大鼠自由飲水。

2.3 觀察指標(biāo)

以魚(yú)躍血糖儀采用尾部釆血法檢測(cè)血糖，采集第2次STZ腹腔注射后1周造模成功時(shí)的各組大鼠FBG以及采集口服糖耐量試驗(yàn)（OGTT試驗(yàn)）時(shí)0 h、0.5 h、1 h、2 h的血糖（將第2次STZ腹腔注射后1周造模成功時(shí)的各組大鼠FBG作為干預(yù)前FBG，將OGTT試驗(yàn)時(shí)0 h的FBG作為干預(yù)8周后的FBG）；末次給藥后，禁食不禁飲12 h，100 g/L水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉后開(kāi)腹經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，3 000 r/min離心15 min，取上清液，-80 ℃保存，采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)TG、TC、空腹胰島素（FINS），操作流程依據(jù)說(shuō)明書(shū)規(guī)程進(jìn)行，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。HOMA-IR計(jì)算公式為：FINS×FBG/22.5。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般情況及體重比較

3.1.1 各組大鼠一般情況正常組大鼠飲食、進(jìn)水正常，二便正常，皮毛順滑，精神良好，多動(dòng)；模型組大鼠體重下降，進(jìn)食、飲水較多，尿量較多，大便質(zhì)地偏稀，皮毛較為枯槁，精神較為萎靡；施今墨降糖對(duì)藥方組上述情況均比模型組情況較好，較正常組稍次之。

3.1.2 各組大鼠體重比較與正常組比較，模型組大鼠體重明顯減輕（P＜0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對(duì)藥方組大鼠體重明顯增加（P＜0.05），接近正常組水平。見(jiàn)表1。

表1 3組大鼠體重比較（ ±s，n=10） g

表1 3組大鼠體重比較（ ±s，n=10） g

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 體重正常組 571.20±57.94模型組 388.20±52.34*施今墨降糖對(duì)藥方組 526.50±94.09#

3.2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較

與正常組比較，模型組FBG、HOMA-IR均明顯升高，F(xiàn)INS明顯降低（P＜0.05）；與正常組比較，施今墨降糖對(duì)藥方組干預(yù)前的FBG有明顯升高（P＜0.05），干預(yù)后的FBG、HOMA-IR均無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對(duì)藥方組干預(yù)8周后的FBG、HOMA-IR均明顯降低（P＜0.05），F(xiàn)INS明顯升高（P＜0.05）。與本組治療前相比較，施今墨降糖對(duì)藥方組干預(yù)治療8周后FBG較前明顯下降（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較（ ±s，n=10）

表2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較（ ±s，n=10）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與本組干預(yù)前比較，**P＜0.05。

組別 FBG/（mmol·L-1） FINS/（mU·L-1） HOMA-IR干預(yù)前 干預(yù)8周后正常組 4.12±0.18 5.03±0.84 54.81±10.19 12.25±0.97模型組 24.64±2.88* 27.13±6.78* 22.64±0.55* 27.34±2.21*施今墨降糖對(duì)藥方組 23.39±2.58*# 7.97±2.42#** 43.65±4.92# 15.19±1.17#

3.3 各組大鼠血清TC、TG觀察與正常組比較

模型組TC、TG均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對(duì)藥方組大鼠血清TC、TG均明顯減低（P＜0.05），接近正常組水平。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠治療后TC、TG水平比較（ ±s，n=10）mmol/L

表3 各組大鼠治療后TC、TG水平比較（ ±s，n=10）mmol/L

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

3.4 各組大鼠OGTT實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較與正常組比較

模型組在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均明顯升高（P＜0.05），表示模型組存在糖耐量異常；與正常組比較，施今墨降糖對(duì)藥方組在FBG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG無(wú)明顯差異（P＞0.05）。與模型組相比較，施今墨降糖對(duì)藥方組在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均具有明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠OGTT實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較（ ±s，n=10）mmol/L

表4 各組大鼠OGTT實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較（ ±s，n=10）mmol/L

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 FBG OGTT-0.5 h PGOGTT-1 h PGOGTT-2 h PG正常組 5.03±0.84 8.10±0.47 6.21±0.39 6.46±0.95模型組 27.13±6.78* 32.63±0.64* 29.15±4.33*27.47±3.97*施今墨降糖對(duì)藥方組 7.97±2.42# 10.70±3.82# 11.18±4.53# 9.43±3.85#

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，IR是T2DM發(fā)生發(fā)展的核心問(wèn)題，也是其發(fā)病的重要的病理生理基礎(chǔ)，而全身的糖脂代謝紊亂，則起著加重組織及機(jī)體胰島素抵抗的作用。大量的中醫(yī)藥研究發(fā)現(xiàn)，充分運(yùn)用中醫(yī)藥整體結(jié)合及辨證論治的特點(diǎn)，對(duì)于改善胰島素抵抗及糖脂代謝方面有著明顯的效果，可以起到調(diào)節(jié)糖脂代謝，降低糖脂毒性，多途徑、多環(huán)節(jié)地改善IR的作用［6-7］。

施今墨降糖對(duì)藥方是施今墨名老中醫(yī)在長(zhǎng)期治療消渴病的臨床過(guò)程中得出的經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、生地、玄參、蒼術(shù)、丹參、葛根三組對(duì)藥組成。中醫(yī)方面，黃芪補(bǔ)脾胃之中氣，固下焦之元?dú)?，生地滋陰、涼血、固腎，兩藥合用共奏健脾氣，固腎陰；蒼術(shù)化脾濕，升脾氣，玄參退熱降濁，兩藥配伍，共奏滋陰清熱、健脾降濁之功。全方補(bǔ)益氣血，調(diào)整陰陽(yáng)固本的同時(shí)，不忘活血化瘀治標(biāo)。葛根升發(fā)脾胃陽(yáng)氣，布散全身津液，丹參活血化瘀、行血止痛，兩藥共奏活血化瘀，條達(dá)氣血，生津止渴之功［8］。現(xiàn)代藥理學(xué)中，黃芪在治療T2DM的臨床療效早已被證實(shí)，黃芪多糖作為黃芪主要的生物活性成分之一，胡桂禎等［9］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖具有改善胰島素抵抗、增加胰島素敏感性、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗炎、抗氧化、保護(hù)胰島β細(xì)胞等多種藥理作用。李莉［10］研究發(fā)現(xiàn)，生地黃既可以改善胰島β細(xì)胞的功能，緩解胰島素抵抗，還可以改善糖脂代謝，降低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性。田會(huì)東等［11］通過(guò)對(duì)蒼術(shù)-玄參對(duì)藥對(duì)T2DM的網(wǎng)絡(luò)藥理研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)-玄參對(duì)藥中的活性成分能通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路起到治療T2DM的作用，為蒼術(shù)-玄參對(duì)藥治療T2DM的藥理分析提供了新的科學(xué)論據(jù)。劉倩等［12］通過(guò)研究指出，黃芪與葛根的配伍，促進(jìn)了脂肪組織脂聯(lián)素（APN）、瘦素（LEP）的分泌，減少了腫瘤壞死因子α、白介素-12的分泌，抑制了趨化素、趨化素受體mRNA的表達(dá)，從而達(dá)到改善T2DM大鼠糖脂代謝的作用。柳剛等［13］的研究證實(shí)了丹參有保護(hù)T2DM大鼠腎臟的作用，可以抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、纖溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）等細(xì)胞因子的表達(dá)。以上研究皆為施今墨降糖對(duì)藥方治療T2DM提供了科學(xué)依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，STZ腹腔注射結(jié)合高脂飼料可以造成大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR的明顯升高，F(xiàn)INS和體重的明顯降低，說(shuō)明T2DM造模成功。與模型組相比較，施今墨降糖對(duì)藥方組T2DM大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR均明顯下降，F(xiàn)INS升高，并且改善了大鼠體重。研究結(jié)果證實(shí)了施今墨降糖對(duì)藥方可緩解T2DM大鼠的體重下降，降低T2DM大鼠的高血糖水平，增強(qiáng)其對(duì)糖負(fù)荷的耐受性，促進(jìn)T2DM大鼠的血脂代謝，減輕胰島功能的受損程度，降低胰島素抵抗。這一研究結(jié)果為臨床防治糖尿病糖脂代謝紊亂以及胰島素抵抗提供了新的治療思路以及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但其作用機(jī)理以及作用靶點(diǎn)尚未明確，仍有待進(jìn)一步研究。