山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)的鑒別

潘澤玥章蕾鐘曉明黃真

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江 杭州310053）

山胡椒Lindera glauca（Sieb.et Zucc.）Bl.為樟科山胡椒屬植物，是落葉灌木或小喬木，主要分布于山東、浙江、湖南等丘陵山地［1-2］。具有溫中散寒、行氣止痛、平喘等功效［3］，能抑制腫瘤細(xì)胞活性、抗炎、抑菌［4-7］，其化學(xué)成分有檸檬醛、羅勒烯等［8］，始載于《新修本草》［9］，《植物名實(shí)圖考》［10］記載“野胡椒，大小葉排生如簇，葉微似橘葉，青時(shí)氣已香馥”。但山胡椒地方用藥描述頗為混亂，廣西地區(qū)［11］又名“假死風(fēng)”，《浙江植物志》［12］稱其為“牛筋樹(shù)”。文獻(xiàn)［13-14］亦誤將其描述為樟科木姜子屬植物。

狹葉山胡椒Lindera angustifoliaCheng 又名“見(jiàn)風(fēng)消”，《植物名實(shí)圖考》［10］記載其“生長(zhǎng)沙山阜，葉面青背白，似野胡椒而窄”，具有祛風(fēng)、利濕消腫、行氣散寒的功效［15］，可見(jiàn)它與同屬植物山胡椒在基原、藥理活性、化學(xué)成分方面相似。為了保證臨床用藥準(zhǔn)確有效，有必要展開(kāi)山胡椒、狹葉山胡椒鑒定研究。

因此，本實(shí)驗(yàn)采用性狀鑒別、微性狀鑒別、顯微鑒別等多種中藥鑒別方法，并通過(guò)掃描電鏡觀察山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)表面形態(tài)，旨在為這種藥材鑒別奠定依據(jù)，同時(shí)也為其他果實(shí)類中藥相關(guān)研究提供參考。

1 材料

1.1 藥材與試劑 山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)各3批，采自浙江省杭州植物園植物分類區(qū)，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)黃真教授分別鑒定為樟科山胡椒屬山胡椒Lindera glauca（Sieb.et Zucc.）Bl.、狹葉山胡椒Lindera angustifoliaCheng 果實(shí)。FAA 固定液由10%甲醛5 mL、冰醋酸5 mL、70% 乙醇90 mL 配制。稀甘油、水合氯醛為分析純。

1.2 儀器 Olympus 光學(xué)顯微鏡［奧林巴斯（中國(guó)）有限公司］；Olympus SZ61 體式顯微鏡、KDBM 生物組織包埋機(jī)、KD-BL 包埋機(jī)冷凍臺(tái)（浙江金華市科迪儀器設(shè)備有限公司）；HM430 石蠟切片機(jī)［賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司］；YT-6C生物組織攤片機(jī)、su8010 型掃描電子顯微鏡、e1010 型離子濺射鍍膜儀（日本日立公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 基原鑒別 觀察山胡椒和狹葉山胡椒全株，記錄根、莖、葉、果實(shí)特征，結(jié)合文獻(xiàn)［1］進(jìn)行描述。

2.1.1 山胡椒 落葉小喬木或灌木；小枝灰白色；芽鱗無(wú)脊；葉呈橢圓形，長(zhǎng)4～9 cm，下部被白色柔毛；傘形花序具3～8 花；雄蕊9；雌花花被片橢圓形或倒卵形，柱頭盤(pán)狀；果實(shí)球形，成熟時(shí)為黑褐色，直徑約4 mm；果柄長(zhǎng)10～15 mm。

2.1.2 狹葉山胡椒 落葉小喬木或灌木；小枝黃綠色，無(wú)毛；芽鱗具脊；葉呈橢圓狀披針形，長(zhǎng)6～14 cm，下部沿脈疏被柔毛；傘形花序2～3 腋生；雄蕊9；雌花花被片6，柱頭頭狀；果實(shí)球形，成熟時(shí)為黑色，直徑約8 mm；果柄長(zhǎng)為5～15 mm，被微柔毛。

2.2 性狀鑒別 山胡椒果實(shí)呈球形，直徑5～6.5 mm；表面黑色，光滑，腺點(diǎn)分布多，頂端有花柱殘基，基部有圓形果梗痕，多數(shù)連接細(xì)果柄；中果皮柔軟，內(nèi)果皮黃棕色，質(zhì)地脆；種皮內(nèi)有肥厚子葉2枚，富含油質(zhì)；氣芳香，味辛涼。狹葉山胡椒果實(shí)呈球形，直徑7～8 mm，表面黑色，光滑，腺點(diǎn)分布少，頂端帶有明顯花柱殘基呈黑色，基部帶果柄被稀疏柔毛，具盤(pán)狀果托；外果皮薄，中果皮肉質(zhì)多汁，富油性；內(nèi)果皮黃棕色，質(zhì)地脆；種皮內(nèi)子葉大多呈空洞狀不可見(jiàn)；氣芳香濃烈具檸檬香氣，味辛而麻舌。綜上所述，2 種藥材性狀特征整體相似，但在大小、果實(shí)頂端花柱殘基、氣味方面存在差異。

2.3 微性狀鑒別 在體式顯微鏡下進(jìn)行觀察。山胡椒果實(shí)呈球形；外果皮棕黑色，較薄，腺點(diǎn)分布多，有細(xì)密干縮皺紋，頂端花柱殘基不明顯，基部連接細(xì)果柄；中果皮黃白色；內(nèi)果皮黃棕色；種皮極薄與內(nèi)果皮連結(jié)緊密；種皮內(nèi)有肥厚子葉2枚，類白色，富含油質(zhì)，見(jiàn)圖1。狹葉山胡椒果實(shí)呈橢球形；外果皮黑色，較薄，腺點(diǎn)分布較少，光滑，頂端帶有明顯花柱殘基，基部帶果柄被稀疏柔毛；中果皮黃綠色，斷面頂部偶可見(jiàn)暗棕色圓斑；內(nèi)果皮黃棕色；種皮與內(nèi)果皮連結(jié)緊密；種子內(nèi)為子葉大多呈空洞狀不可見(jiàn)；其他微性狀特征與山胡椒果實(shí)相似，見(jiàn)圖2。

圖1 山胡椒果實(shí)微性狀Fig.1 Microscopic characteristics of the fruits of L.glauca

圖2 狹葉山胡椒果實(shí)微性狀Fig.2 Microscopic characteristics of the fruits of L.angustifolia

2.4 掃描電鏡鑒別 將處理后干燥的山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)的外果皮粘貼在掃描載物臺(tái)上進(jìn)行噴金，在掃描電鏡下觀察并拍照，參照文獻(xiàn)［16-17］進(jìn)行描述。

2.4.1 果實(shí)頂部表面特征 2 種藥材果實(shí)頂部有小突起狀花柱殘痕，掃描電鏡下可見(jiàn)近圓形突起。其中，山胡椒果實(shí)自果實(shí)頂部向外呈明顯放射狀線紋，突起部位細(xì)胞間隙大，呈蜂窩樣繩索狀連結(jié)的形態(tài)；狹葉山胡椒果實(shí)突起內(nèi)紋飾不規(guī)則，表面粗糙且有空洞，周?chē)邪雸A球狀、環(huán)狀實(shí)心突起，表面可見(jiàn)線狀紋路。

另外，山胡椒果實(shí)頂部表面為網(wǎng)狀紋飾；網(wǎng)眼稍隆起，表面可見(jiàn)顆粒狀突起；網(wǎng)脊平、窄，鑲嵌在網(wǎng)眼之間；細(xì)胞輪廓較為清晰，細(xì)胞排列緊密呈五邊形；果頂中部向外細(xì)胞排列由緊密到疏松，細(xì)胞間隔較窄，近內(nèi)部細(xì)胞大小為20～30 μm，細(xì)胞形狀呈不規(guī)則五邊形。而狹葉山胡椒表面為波狀及平滑型紋飾；網(wǎng)眼表面可見(jiàn)顆粒狀小突起，網(wǎng)脊平；細(xì)胞輪廓不清晰，細(xì)胞排列緊密呈四邊形；果頂中部向外細(xì)胞排列緊密，間隔大，細(xì)胞自內(nèi)向外逐漸變大，近內(nèi)部細(xì)胞大小約為30 μm，外部約為60 μm，形狀為四邊形，見(jiàn)圖3～4。

圖3 山胡椒果實(shí)頂部Fig.3 Top of the fruits of L.glauca

圖4 狹葉山胡椒果實(shí)頂部Fig.4 Top of the fruits of L.angustifolia

2.4.2 果實(shí)柄部及表面特征 2 種藥材果實(shí)柄部在表面紋飾、細(xì)胞形狀、油細(xì)胞數(shù)量及大小方面有一定區(qū)別，見(jiàn)圖5～6。由此可知，山胡椒果實(shí)自果柄處向外呈同心環(huán)狀紋飾，平滑處呈淺網(wǎng)狀紋飾，網(wǎng)脊隆起不明顯，網(wǎng)眼近四邊形；表面為網(wǎng)狀紋飾，網(wǎng)眼凹陷，網(wǎng)脊明顯較寬；非腺毛散在，呈細(xì)長(zhǎng)柱形，長(zhǎng)度約為2 μm；可見(jiàn)褶皺狀突起及分泌物；油細(xì)胞呈半圓球狀突起，直徑為1～4 μm，分泌孔可見(jiàn)，而狹葉山胡椒果實(shí)線狀褶皺，果蒂內(nèi)平滑處呈網(wǎng)狀紋飾，網(wǎng)脊隆起，網(wǎng)眼近四邊形。果實(shí)表面為淺波狀紋飾，網(wǎng)眼稍隆起，網(wǎng)脊平、窄；非腺毛散在，長(zhǎng)度為2～3 μm；油細(xì)胞呈半圓球狀或圓球狀突起，直徑為2～8 μm，密集分布偶可見(jiàn)分泌孔。

圖5 山胡椒果實(shí)梗部Fig.5 Stalk of the fruits of L.glauca

2.5 顯微鑒定

2.5.1 石蠟切片法 隨機(jī)選取新鮮、有代表性的山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)，在FAA 中固定7 d，采用常規(guī)石蠟切片法［18］并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定果實(shí)切片厚度為8～12 μm，番紅-固綠染色。在顯微鏡下拍攝并記錄，結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖6 狹葉山胡椒果實(shí)梗部Fig.6 Stalk of the fruits of L.angustifolia

圖7 果實(shí)橫切面特征Fig.7 Cross-section traits of fruits

由此可知，山胡椒果實(shí)最外層為1 列長(zhǎng)方形三面增厚的石細(xì)胞，其下有1～3 列扁平外果皮細(xì)胞；中果皮細(xì)胞多角形，油細(xì)胞散在并可見(jiàn)周韌型維管束；內(nèi)果皮柵狀細(xì)胞切向壁外側(cè)間隙及細(xì)胞內(nèi)含方晶，形成一結(jié)晶環(huán)，外側(cè)有一列薄的石細(xì)胞層；種皮為一列長(zhǎng)方形薄壁細(xì)胞；子葉細(xì)胞呈類圓形、類方形，含糊粉粒及豐富的脂肪油滴；種子內(nèi)維管束位于種腔中縫兩側(cè)，每側(cè)6～8個(gè)，而狹葉山胡椒果實(shí)外側(cè)邊緣略呈波狀彎曲，最外層為1 列三面增厚的石細(xì)胞，其下有1～3 列扁平外果皮細(xì)胞；中果皮細(xì)胞呈多角形或橢圓形，散在油細(xì)胞，并有周韌型維管束分布；內(nèi)果皮柵狀細(xì)胞切向壁外側(cè)間隙及細(xì)胞內(nèi)方晶較少，外側(cè)有一列薄的石細(xì)胞層；種皮為一列長(zhǎng)方形薄壁細(xì)胞；子葉細(xì)胞呈類圓形、類方形，含糊粉粒較少；在石蠟切片中種子內(nèi)多呈空洞狀，子葉細(xì)胞少見(jiàn)，可能是果實(shí)成熟致子葉皺縮。

2.5.2 藥材粉末鑒別 圖8 顯示，山胡椒粉末黃棕色；油細(xì)胞淡黃色，多破碎，完整者呈類圓形或類多角形，直徑1～10 μm；非腺毛為單細(xì)胞，表面光滑；螺紋導(dǎo)管成束稍彎曲，有的與網(wǎng)紋細(xì)胞相伴；偶可見(jiàn)果柄處含具緣紋孔導(dǎo)管；草酸鈣方晶多見(jiàn)于內(nèi)果皮細(xì)胞并排列成行；纖維成束較長(zhǎng)，可見(jiàn)不規(guī)則縱列紋；內(nèi)果皮石細(xì)胞呈類多角形，棕色至黃棕色，表面觀聚成一群，垂周壁深波狀或微波狀彎曲，壁厚約2 μm，細(xì)胞層紋較清晰，孔溝明顯，亦可見(jiàn)尖梭形或長(zhǎng)卵圓形石細(xì)胞，胞腔內(nèi)呈深棕色，層紋明顯；外果皮細(xì)胞呈多角形，棕紅色，細(xì)胞壁較厚突起；內(nèi)果皮柵狀細(xì)胞側(cè)面觀長(zhǎng)柱形，黃色，長(zhǎng)12～15 μm，直徑1 μm；細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)多個(gè)方晶排列；種皮細(xì)胞橫斷面觀呈類多角形，垂周壁細(xì)點(diǎn)狀增厚，胞內(nèi)具細(xì)密交錯(cuò)的網(wǎng)狀紋理。子葉細(xì)胞含油滴和糊粉粒。

圖8 山胡椒果實(shí)粉末特征Fig.8 Powder traits of the fruits of L.glauca

圖9 顯示，狹葉山胡椒粉末棕黑色；草酸鈣方晶呈類方形，內(nèi)果皮中常含數(shù)個(gè)結(jié)晶；石細(xì)胞呈類圓形、類多角形，暗棕色，直徑約為3～5 μm，細(xì)胞壁較薄但明顯，胞腔內(nèi)呈黃棕色，單個(gè)或數(shù)個(gè)成群散于果皮薄壁組織；內(nèi)果皮石細(xì)胞類多角形，黃棕色，垂周壁深波狀彎曲，壁厚約2 μm，細(xì)胞層紋清晰，孔溝明顯，表面觀石細(xì)胞成片鑲嵌緊密；內(nèi)果皮細(xì)胞柵狀細(xì)胞斷面觀具光輝帶，長(zhǎng)為4 μm，寬為2 μm；其他結(jié)構(gòu)外果皮細(xì)胞、種皮細(xì)胞、纖維、螺紋導(dǎo)管，油細(xì)胞形態(tài)與山胡椒果實(shí)粉末相近；全藥材粉碎樣品中不易觀察兩者子葉細(xì)胞，可能由于該組織容易粉碎而被破壞。

圖9 狹葉山胡椒果實(shí)粉末特征Fig.9 Powder traits of the fruits of L.angustifolia

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)系統(tǒng)的中藥鑒定研究，比較兩者在外果皮表面特征。結(jié)果，2 種藥材在掃描電鏡下外果皮紋飾、細(xì)胞形態(tài)、果柄部紋飾，顯微鑒定中內(nèi)果皮柵狀細(xì)胞、石細(xì)胞、子葉細(xì)胞等方面存在差異。微性狀鑒別、掃描電鏡補(bǔ)充完善了山胡椒、狹葉山胡椒果實(shí)的鑒別依據(jù)，可為其鑒定及后期質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。