厚樸酚納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備及其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

許麗娜李曉蒙談秀鳳

（1.鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南 鄭州450064； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海201203）

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils 或凹葉厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils 的干燥干皮、根皮及枝皮，主要有效成分是厚樸酚，具有中樞神經(jīng)抑制、抗氧化、抗炎、治療心肌損傷、抗腫瘤等活性［1-2］，但在37 ℃下的溶解度僅為10.60 μg／mL［3］，存在溶出受限、生物利用度低等問(wèn)題。劉會(huì)珍等［4］通過(guò)酚磷脂復(fù)合物來(lái)改善厚樸酚溶出度及生物利用度，但該制劑黏性大，而且胃腸道水相、pH 值、酶等均會(huì)影響其穩(wěn)定性［5］，藥物溶出度、生物利用度改善程度有限；張曉千等［6］制備的厚樸酚PLGA 納米粒包封率僅為75.36%，仍存在一定的提升空間。

納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體是在固體脂質(zhì)納米?；A(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的一種新型納米給藥技術(shù)，具有穩(wěn)定性好、載藥量高等特點(diǎn)［7-9］，可促進(jìn)藥物體外溶出，提高體內(nèi)口服吸收生物利用度［10］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)厚樸酚納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體處方進(jìn)行優(yōu)化，觀(guān)察其形態(tài)，測(cè)定粒徑、Zeta 電位、包封率、載藥量、體外溶出情況，并研究其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)，期相關(guān)制劑學(xué)研究提供新策略。

1 材料

安捷倫1260 型高效液相色譜儀（配置DAD 檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司）；MS205DU／A 型電子天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；HCJ-4E 型恒溫水浴磁力攪拌器（常州郎越儀器有限公司）；TL-150Y 型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（江蘇天翔儀器有限公司）；Master-sizer 型粒度分析儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）；DCY-12G 型干式氮?dú)獯祾邇x（金昌實(shí)驗(yàn)儀器公司）；TG16-G 型臺(tái)式高速離心機(jī)（常州市億能實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)）。

厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)110729-201807，純度98.7%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；厚樸酚原料藥（批號(hào)191228，純度98%，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司）。單硬脂酸甘油酯（批號(hào)181012，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；超濾離心管（截留分子量12 000～14 000 Da，美國(guó)Millipore 公司）；辛癸酸甘油酯（批號(hào)20190415，上海泰坦科技股份有限公司）；大豆磷脂（批號(hào)20180914PC，上海太偉藥業(yè)有限公司）；泊洛沙姆 188（批 號(hào)156544891，德國(guó)BSF 公司）。SD 大鼠購(gòu)自河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體質(zhì)量（280±20）g，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（豫）2016-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 厚樸酚含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相甲醇-水（60∶40）；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm。

2.1.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 稱(chēng)取厚樸酚對(duì)照品10.0 mg，轉(zhuǎn)移至25 mL 量瓶中，甲醇超聲溶解，放置至室溫后甲醇定容至刻度，得到400.0 μg／mL 貯備液，流動(dòng)相依次稀釋至50.0、10.0、5.0、1.0、0.5、0.05 μg／mL，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以厚樸酚峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行回歸，得方程為Y＝21.687 9X ＋0.987 2（r＝0.999 9），在0.05～50 μg／mL 范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.1.3 供試品溶液制備 取納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液1 mL 至50 mL 量瓶中，甲醇超聲破乳30 s，流動(dòng)相定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.1.4 方法學(xué)考察 取同一批納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液，按“2.1.3”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得厚樸酚峰面積RSD 為1.46%，表明該方法重復(fù)性良好。取同一份供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)得厚樸酚峰面積RSD為0.29%，表明儀器精密度良好。取同一份供試品溶液，于0、3、6、12、18、24 h 在 “2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得厚樸酚峰面積RSD為0.52%，表明溶液在24 h 穩(wěn)定性良好。取1 mL厚樸酚含量已知的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液至50 mL量瓶中，平行9份，加入“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0、1.25、1.5 mL 各3份，甲醇超聲破乳30 s，流動(dòng)相定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得厚樸酚平均加樣回收率分別為99.32%、100.15%、100.27%，RSD 分別為1.19%、1.42%、0.75%。

2.2 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體制備 采用熔融-超聲乳化法。取50 mg 厚樸酚至圓底燒瓶中，加入處方量固態(tài)、液態(tài)脂質(zhì)，75 ℃水浴磁力攪拌至藥物完全溶解，作為油相；取處方量泊洛沙姆188、大豆磷脂至100 mL 蒸餾水中，75 ℃水浴磁力攪拌溶解，作為水相，在攪拌條件下將油相滴加至水相中，滴完后再敞口攪拌3 h 以除盡有機(jī)溶劑，蒸餾水補(bǔ)足體積至100 mL，將圓底燒瓶固定于鐵架臺(tái)上，置于超聲儀中，在一定功率下超聲處理10 min（每工作3 s 間隔1 s），迅速置于-15 ℃冰箱中10 min，取出，過(guò)0.45 μm 微孔濾膜，即得。

2.3 包封率、載藥量的測(cè)定 取1 mL 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算總含量（m總）。取1 mL 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液至超濾管中（截留分子量12 000～14 000 Da），-4 ℃、12 000 r／min 離心25 min［11］，取續(xù)濾液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定厚樸酚游離量（m游離）。參考文獻(xiàn)［8］報(bào)道，計(jì)算包封率、載藥量。

2.4 粒徑、Zeta 電位測(cè)定 取0.1 mL 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液，加蒸餾水至4 mL，混勻后置于比色皿中，在粒度分析儀上測(cè)定粒徑、Zeta 電位。

2.5 處方篩選

2.5.1 固態(tài)脂質(zhì)種類(lèi) 固定液態(tài)脂質(zhì)為辛癸酸甘油酯，固液脂質(zhì)比為4∶1，藥脂比為1∶18，泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶1，表面活性劑用量為1%，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸＋單硬脂酸甘油酯（1∶1）制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表1。由此可知，硬脂酸作為固態(tài)脂質(zhì)時(shí)平均粒徑較小，但包封率、載藥量、Zeta 電位絕對(duì)值較低；硬脂酸＋單硬脂酸甘油酯（1∶1）制備時(shí)上述指標(biāo)均不如單硬脂酸甘油酯。最終，選擇單硬脂酸甘油酯作為固態(tài)脂質(zhì)。

2.5.2 液態(tài)脂質(zhì)種類(lèi) 固定固態(tài)脂質(zhì)為單硬脂酸甘油酯，固液脂質(zhì)比為4∶1，藥脂比為1∶18，泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶1，表面活性劑用量為1%，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以大豆油、辛癸酸甘油酯、大豆油＋辛癸酸甘油酯（1∶1）制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表2。由此可知，大豆油作為液態(tài)脂質(zhì)時(shí)包封率、載藥量、Zeta 電位絕對(duì)值較低，粒徑較大；大豆油＋辛癸酸甘油酯（1∶1）制備時(shí)上述指標(biāo)均不如單用辛癸酸甘油酯。最終，選擇辛癸酸甘油酯作為液態(tài)脂質(zhì)。

表2 液態(tài)脂質(zhì)種類(lèi)對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.2 Effects of liquid lipid type on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

2.5.3 固液脂質(zhì)比 固定藥脂比為1∶18，泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶1，表面活性劑用量為1%，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以固液脂質(zhì)比3∶1、3.5∶1、4∶1、4.5∶1、5∶1 制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表3。由此可知，當(dāng)兩者比例為4∶1 時(shí)包封率、載藥量最大，粒徑較小，Zeta 電位絕對(duì)值大于30 mV。最終，選擇4∶1作為固液脂質(zhì)比。

表3 固液脂質(zhì)比對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.3 Effects of solid-liquid lipid ratio on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

2.5.4 藥脂比 固定泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶1，表面活性劑用量為1%，固液脂質(zhì)比為4∶1，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以藥脂比1∶12、1∶15、1∶18、1∶20、1∶22制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表4。由此可知，兩者比例為1∶20 時(shí)包封率、載藥量、Zeta 電位絕對(duì)值相對(duì)最大，粒徑較小。最終，選擇1∶20 作為藥脂比。

2.5.5 泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例 固定藥脂比為1∶20，固液脂質(zhì)比為4∶1，表面活性劑用量為1%，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例1.5∶1、0.5∶1、1∶1、1∶0.5、1∶1.5 制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表5。由此可知，改變泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例時(shí)粒徑變化較大，而載藥量、包封率、Zeta 電位絕對(duì)值無(wú)明顯變化規(guī)律，程度也不大。最終，選擇1∶0.5 作為泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例，此時(shí)粒徑最小，Zeta 電位絕對(duì)值最大，載藥量、包封率理想。

表5 泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.5 Effects of Poloxamer 188-phospholipid ratio on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

2.5.6 表面活性劑用量 固定藥脂比為1∶20，固液脂質(zhì)比為4∶1，泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶0.5，超聲功率為300 W，超聲時(shí)間為20 min，分別以表面活性劑用量0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.5%制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表6。由此可知，隨著表面活性劑用量增加，包封率、載藥量均呈先升后降的趨勢(shì)，而粒徑恰好相反；當(dāng)其用量為1.0%時(shí)，包封率、載藥量、Zeta 電位最大，粒徑較小。最終，選擇1.0%作為表面活性劑用量。

表6 表面活性劑用量對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.6 Effects of surfactant consumption on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

2.5.7 超聲功率 固定藥脂比為1∶20，固液脂質(zhì)比為4∶1，泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例為1∶0.5，表面活性劑用量為1.0%，超聲時(shí)間為20 min，分別以超聲功率250、300、350、400 W制備納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，測(cè)定包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位，結(jié)果見(jiàn)表7。由此可知，超聲功率較低時(shí)粒徑較大，而較高時(shí)會(huì)影響包封率、載藥量、Zeta 電位絕對(duì)值。最終，選擇350 W 作為超聲功率。

表7 超聲功率對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.7 Effects of ultrasonic power on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)“2.5”項(xiàng)下結(jié)果，確定最優(yōu)處方為取50 mg 厚樸酚至圓底燒瓶中，按照藥脂比1∶20、固液脂質(zhì)比4∶1 加入單硬脂酸甘油酯、大豆油，再加入50 mL 無(wú)水乙醇，75 ℃水浴磁力攪拌溶解，作為有機(jī)相；以泊洛沙姆188 與大豆磷脂比例1∶0.5，表面活性劑用量1.0%制備100 mL溶液，75 ℃水浴磁力攪拌溶解，作為水相，邊攪拌邊將有機(jī)相滴加至水相中，滴完后再敞口攪拌3 h，將圓底燒瓶固定于鐵架臺(tái)上，置于超聲儀中，在功率350 W 下超聲處理20 min（每工作3 s 間隔1 s），迅速置于-15 ℃冰箱中15 min，取出，過(guò)0.45 μm 微孔濾膜，蒸餾水補(bǔ)加體積至100 mL。再按照上述優(yōu)化處方進(jìn)行3 批驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)得納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的平均包封率、載藥量分別為（84.09±1.13）%、（3.92±0.17）%。

2.7 處方表征

2.7.1 透射電鏡（TEM）取納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液0.5 mL，加入50 mL 蒸餾水后滴加于銅網(wǎng)上，室溫晾干，2%磷鎢酸染色5 min 后觀(guān)察形態(tài)，結(jié)果見(jiàn)圖1。由此可知，納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體球形，粒子之間無(wú)粘連現(xiàn)象。另外，TEM 觀(guān)察到的是干燥納米粒的粒徑，而激光粒度儀測(cè)得的是水化粒徑，故前者小于后者。

圖1 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體TEM圖Fig.1 TEM image for nanostructured lipid carriers

2.7.2 粒徑、Zeta 電位 取納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液0.5 mL，加入50 mL 蒸餾水，測(cè)定粒徑、Zeta電位，結(jié)果見(jiàn)圖2～3。由此可知，平均Zeta 電位為（-34.2±0.8）mV，粒徑為（177.59±5.18）nm，PDI 為0.062±0.006。

圖2 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體Zeta 電位Fig.2 Zeta potential of nanostructured lipid carriers

圖3 納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體粒徑分布Fig.3 Particle size distribution of nanostructured lipid carriers

2.8 凍干粉制備 取納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體混懸液適量，加入5% 乳糖混勻，分裝于5 mL 西林瓶中，在-60 ℃下預(yù)凍2 d，封口膜封口后戳6 個(gè)小孔，置于-30 ℃冷凍干燥儀中，抽真空后保存3 d，即得。取3 批凍干粉，蒸餾水復(fù)溶，測(cè)得平均包封率為（79.26±1.03）%，載藥量為（3.61±0.16）%，粒徑為（203.56±8.70）nm，Zeta 電位為（-29.6±0.6）mV。

2.9 體外釋藥研究 采用透析袋法，測(cè)得厚樸酚在0.5% 十二烷基硫酸鈉溶液中的溶解度為36.64 μg／mL，達(dá)到原料藥漏槽條件，故釋放介質(zhì)選擇1 000 mL 該溶液，并設(shè)定攪拌槳轉(zhuǎn)速為75 r／min，溫度為（37±1）℃。取凍干粉（厚樸酚含量為5 mg）適量，加入3 mL 空白介質(zhì)，轉(zhuǎn)移至透析袋中，兩端扎緊；取相同量厚樸酚，加入3 mL 空白溶出介質(zhì)，同法操作，于0、0.25、0.5、1、2、2.5、3、4、6、8、12、18、24、30、36 h 各取樣3 mL，同時(shí)注入3 mL 空白介質(zhì)，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，測(cè)定累積溶出度，結(jié)果見(jiàn)圖4。由此可知，原料藥36 h 內(nèi)累積溶出度僅為38.96%，可能是其本身顆粒較大，疏水性較強(qiáng)所致［12］；納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體后在不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度均得到顯著提高，36 h 內(nèi)為78.62%。

圖4 藥脂比對(duì)包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位的影響（n＝3）Tab.4 Effects of drug-lipid ratio on encapsulation efficiency，drug loading，particle size and Zeta potential（n＝3）

圖4 厚樸酚體外溶出曲線(xiàn)（n＝6）Fig.4 In vitro dissolution curves for magnolol（n＝6）

2.10 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

2.10.1 藥液制備 取厚樸酚及其納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體凍干粉適量，0.5% CMC-Na 溶液配制，即得（以厚樸酚計(jì)，質(zhì)量濃度為3 mg／mL）。

2.10.2 分組、給藥與采血 12 只大鼠禁食12 h，自由飲水，隨機(jī)分為厚樸酚組、厚樸酚納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組，每組6只，按60 mg／kg 劑量灌胃給予“2.10.1”項(xiàng)下藥液，麻醉后于0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h 眼眶采血，置于肝素化離心管中，3 000 r／min 離心2 min，取上清液，保存于-15 ℃冰箱中。

2.10.3 血漿樣品處理 參考文獻(xiàn)［6］報(bào)道，取內(nèi)標(biāo)溶液（稱(chēng)取葛根素對(duì)照品20 mg，溶于100 mL甲醇中，取適量繼續(xù)用甲醇稀釋至200 ng／mL，即得）、解凍血漿樣品各100 μL，置于離心管中，加入乙酸乙酯2 mL，渦旋提取5 min，5 000 r／min 離心5 min，分離上層有機(jī)相至空白離心管中，45 ℃氮吹儀緩慢吹干得殘?jiān)?00 μL 甲醇復(fù)溶（將剪去的蓋子扣上），混勻，轉(zhuǎn)移至一次性?xún)?nèi)襯管中待測(cè)。

2.10.4 血漿對(duì)照品溶液制備 取厚樸酚對(duì)照品適量，甲醇制成 1 600、800、400、200、100、20 ng／mL溶液，分別取100 μL 至離心管中，45 ℃氮吹儀吹去甲醇，于殘?jiān)屑尤?00 μL 空白血漿，渦旋混勻，按“2.10.3”項(xiàng)下方法處理，即得。

2.10.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 取血漿對(duì)照品溶液適量，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以厚樸酚、內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)（Y），厚樸酚質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行回歸，得方程為Y＝0.027 9X＋7.415 3（r＝0.993 2），在20～1 600 ng／mL 范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.10.6 方法學(xué)考察 取血漿樣品適量，于0、2、4、6、12、24 h 在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得厚樸酚、內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD 為4.82%，表明樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。取20、400、1 600 ng／mL 血漿對(duì)照品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下各進(jìn)樣測(cè)定3次，測(cè)得厚樸酚、內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD 分別為9.62、4.35%、3.84%，表明儀器精密度良好。取20、400、1 600 ng／mL 血漿對(duì)照品溶液各3份，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得平均加樣回收率分別為88.14%、93.36%、90.51%，RSD 分別為4.65%、3.11%、4.07%。取20 ng／mL 血漿對(duì)照品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得定量限（S／N ＝10）、檢測(cè)限（S／N＝3）分別為5.0、1.5 ng／mL。

2.10.7 結(jié)果分析 厚樸酚血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)見(jiàn)圖5，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表8。由此可知，原料藥在12 h 時(shí)血藥濃度已低于20 ng／mL，但同一時(shí)間點(diǎn)納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體仍高于50 ng／mL；與原料藥比較，納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體tmax、t1／2延長(zhǎng)（P＜0.01），Cmax、AUC0～t、AUC0～∞升高（P＜0.01），相對(duì)生物利用度增加至4.06 倍。

圖5 厚樸酚血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)（n＝6）Fig.5 Drug concentration-time curves for magnolol（n＝6）

表8 厚樸酚主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（， n＝6）Tab.8 Main pharmacokinetic parameters for magnolol（， n＝6）

表8 厚樸酚主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（， n＝6）Tab.8 Main pharmacokinetic parameters for magnolol（， n＝6）

注：與厚樸酚比較，**P＜0.01。

3 討論

前期報(bào)道，只采用固態(tài)脂質(zhì)作為厚樸酚納米載體時(shí)，包封率往往較低［5-6］，故本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用固液脂質(zhì)載體，包封率達(dá)（84.09±1.13）%，可能是由于它有利于形成晶體缺陷空間，可更有效地包裹藥物，但液態(tài)脂質(zhì)比例過(guò)高反而會(huì)影響載藥量、粒徑、Zeta 電位，甚至可能發(fā)生相分離［8］，故最終確定固液脂質(zhì)比為4∶1。包封率與脂質(zhì)載體總用量呈正比，但達(dá)到一定程度后繼續(xù)增加后者則會(huì)對(duì)載藥量、粒徑等產(chǎn)生不利影響，最終確定藥脂比為1∶20。較高濃度的表面活性劑由于增溶作用，可使藥物進(jìn)入水相，從而減少被包載藥物量，導(dǎo)致其包封率、載藥量降低［8］，并會(huì)影響體系的乳化效果，進(jìn)而影響粒徑［9］，最終確定表面活性劑用量為1.0%。為確保納米制劑的穩(wěn)定性，其Zeta 電位絕對(duì)值應(yīng)大于30 mV，課題組前期只采用泊洛沙姆188 作為乳化劑，所制得納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體Zeta 電位絕對(duì)值在20 mV 左右，而聯(lián)合應(yīng)用泊洛沙姆188、大豆磷脂時(shí)其數(shù)值有所升高，可能是由于磷脂額外提供負(fù)電荷屏障，協(xié)同泊洛沙姆的空間位阻作用，有助于增加粒子之間的排斥力［13］，從而改善穩(wěn)定性。

大鼠灌胃給藥后，納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體tmax顯著延長(zhǎng)，可能是它具有較強(qiáng)的粘附性，易附著于胃腸道壁，從而增加滯留時(shí)間。文獻(xiàn)［5-6］報(bào)道，厚樸酚PLGA 納米粒、磷脂復(fù)合物、固體分散體、固體脂質(zhì)納米粒相對(duì)口服生物利用度提高至1.38～3.45倍，而本實(shí)驗(yàn)所制得納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體可提高至4.06倍［14］，可能是由于它可增加厚樸酚溶出度、體內(nèi)滯留時(shí)間、藥物與胃腸道接觸面，從而有助于藥物充分吸收［15-16］，并且處方中液態(tài)脂質(zhì)也有該作用［14］。

另外，采用泊洛沙姆188、磷脂作為乳化劑時(shí)，兩者可附著于粒子表面。由于泊洛沙姆188 具有親水性，磷脂同時(shí)具有親脂性和親水性，推測(cè)它們可能會(huì)對(duì)納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體透膜吸收進(jìn)入血液循環(huán)產(chǎn)生積極影響［16］。