溪黃草的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展

蔡幸婷，任搏文，李達(dá)諒

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350117）

1 引言

溪黃草[Isodon serra（Maxim.）Hara]，是唇形科香茶菜屬的一種多年生草本植物，長(zhǎng)期以來(lái)一直被用作民間中藥治療黃疸、肝炎、急性膽囊炎和腸炎[1]。目前人們認(rèn)為溪黃草具有多種藥理作用，除具保肝作用外，還具有抗病毒、抗腫瘤、抑菌、抗炎等作用。本文主要對(duì)溪黃草的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了綜述。

2 溪黃草

名為“溪黃草”的植物來(lái)源有四種，包括線紋香茶菜Isodon lophanthoides(Buch.-Ham.ex D. Don)Hara、細(xì)花線紋香茶菜Isodon lophanthoidesh var.graciliflorus(Benth.)H.Hara、狹基線紋香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus(Benth.)H.Hara和溪黃草Isodon serra(Maxim.) Kudo[2]，同屬植物溪黃草，又名溪溝草，常生于山坡、田邊、溪旁等地，其味苦，廣東北部地區(qū)稱其為苦溪黃[3]。該植物葉片揉搓并沒(méi)有黃色汁液，這與古代中草藥典籍上記載的溪黃草特征有所不同，且其植株高大，可至2～3米，產(chǎn)量頗高[2,3]。溪黃草莖紫色，具四凹槽，無(wú)腺點(diǎn)；葉片形狀多樣，沿葉柄下延成翅狀，葉邊緣具鋸齒，粗大且內(nèi)彎；花冠唇形，分為上下唇，上唇4開(kāi)裂，下唇為凹狀，花色為紫色；雄蕊和雌蕊均藏于花冠內(nèi)；花序類型為圓錐花序，頂生；果實(shí)的特征是小堅(jiān)果，具4枚，也稱之為種子狀果實(shí)；果實(shí)的顏色為黃棕色，表面具白色髯毛，遇水后無(wú)黏液質(zhì)出現(xiàn)[4,5,6]。該植物的種子繁育多在秋季，也可進(jìn)行扦插或分株繁殖；對(duì)于南方地區(qū)而言，溪黃草播種后的90天即可采收，一年可采收2至3次[7]。

溪黃草是長(zhǎng)日照植物，分布范圍廣泛，主要產(chǎn)地在廣東省東部地區(qū)，也適宜生長(zhǎng)在雨水豐富的福建、廣西、海南等地[7]。香茶菜屬作為唇形科的一個(gè)重要屬，涵蓋灌木、多年生草本等約150種植物分布在世界各地，其中有不少植物在我國(guó)民間醫(yī)藥上有著悠久的使用歷史，包括溪黃草[8]。其味苦，性寒，歸肝、膽、大腸經(jīng)，具有消腫、退黃、清熱、解毒等功效，可用于治療跌打傷痛、濕熱黃疸，膽囊炎、瘡腫等，現(xiàn)今已有其沖劑、袋泡茶等保健品和消炎利膽片、復(fù)方膽通等中成藥[9]。

3 化學(xué)成分

溪黃草的主要活性成分包括揮發(fā)油、萜類、黃酮類、酚酸類、多糖類、香豆素類等，本文將按該分類進(jìn)行介紹。

3.1 揮發(fā)油類

溪黃草中揮發(fā)油類含量最多（圖1）。葉其馨等[10]采用水蒸氣蒸餾法、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)提取和分析了溪黃草中的揮發(fā)油，其中含十六碳酸占比例最多，達(dá)78.89%；其次為Cis—桃拓酚，為5.24%；6,10,14—三甲基十五酮為4.82%以及一些其他揮發(fā)油成分。黃浩等[11]也對(duì)溪黃草的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，共鑒定出51種成分，主要由單萜、氧化單萜、氧化倍半帖組成，主要包括1,8－桉葉素（34.99%）、金合歡醇（9.46%）、樅油烯（6.57%）、異甲基苯（5.01%）和葎草烯（4.97%），占揮發(fā)油總組分的90.97%。

圖1 溪黃草揮發(fā)油成分結(jié)構(gòu)式

3.2 二萜類

溪黃草中二萜類化合物含量豐富（圖2），其包含了貝殼杉烷型、對(duì)映—貝殼杉烷型、松香烷型和對(duì)映－松香烷型二萜等，其中以對(duì)映－貝殼杉烷型二萜居多[12]。主要包括冬凌草甲素、延命素、諾多星、拉西多寧、冬凌草素乙、香茶菜B等成分[13]，超聲波工藝的總二萜提取率可達(dá)99.86%[14]。最近，Xing等[15]人從溪黃草地上部分獲得了10種新的對(duì)映－貝殼杉烷型二萜，并用LPS刺激的BV-2細(xì)胞去評(píng)價(jià)其炎癥因子NO的抑制活性，發(fā)現(xiàn)化合物1和9具有明顯的NO生成抑制作用，表現(xiàn)出一定的抗炎作用。

圖2 溪黃草二萜類成分結(jié)構(gòu)式

3.3 三萜類

吳澤青等[16]人采用高效液相色譜方法對(duì)不同基源溪黃草中的主要三萜類化合物進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示它們的平均回收率分別為97.72%、97.08%、97.46%，其中以溪黃草中科羅索酸和齊墩果酸的含量最高，熊果酸含量最低,它們均具有較好的抗病毒作用。此外，溪黃草還含有β-谷甾醇、胡蘿卜苷、豆甾醇等三萜類成分，植物固醇具有良好的降低膽固醇能力[17]。

圖3 溪黃草三萜類成分結(jié)構(gòu)式

3.4 黃酮類

黃酮類成分主要為槲皮素、異鼠李素和蘆丁[13]，具有抗氧化、抗癌、抗炎等生物活性[18]。流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸水溶液的RP-HPLC法測(cè)定的蘆丁和槲皮素平均加樣回收率分別為98.78%和102.05%[18]。溪黃草葉中的黃酮類物質(zhì)含量比莖和全草的高[19]。當(dāng)用蘆丁為對(duì)照品，在紫外可見(jiàn)分光光度257 nm處時(shí)，測(cè)得先鮮切段后陰干的溪黃草總黃酮含量為3.224%[20]。

圖4 溪黃草黃酮類成分結(jié)構(gòu)式

3.5 酚酸類

酚酸類物質(zhì)是溪黃草發(fā)揮抗炎、抗病毒作用的主要成分，主要含有綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、迷迭香酸，其中咖啡酸和迷迭香酸在不同產(chǎn)地溪黃草中含量差異顯著，可作為區(qū)分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一[21]。李臻[22]等研究發(fā)現(xiàn)溪黃草多酚具有明顯的DPPH自由基清除能力，具有較好的抗氧化作用，在Folin-Ciocalteu法最佳工藝條件下，多酚提取率可達(dá)（6.81±0.11）%。

圖5 溪黃草酚酸類成分結(jié)構(gòu)式

3.6 多糖類

據(jù)報(bào)道，溪黃草多糖含量為4.18%，且對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草桿菌有一定的抑菌效果[23]。Lin等[24]研究結(jié)果表明，溪黃草水溶性多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，其中以葡萄糖和半乳糖居多。ORAC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示溪黃草葉和莖中多糖具有中等的抗氧化能力。

3.7 香豆素類

陳德金[25]從溪黃草甲醇提取物中分離得到7-甲氧基香豆素和傘形花內(nèi)酯兩種香豆素成分，為首次從香茶菜屬植物中分離得到。

圖6 溪黃草多糖成分單體結(jié)構(gòu)式

圖7 溪黃草香豆素類成分結(jié)構(gòu)式

3.8 其他成分

周文婷等[26]從溪黃草醇提物中鑒定得到苯丙素類、大柱香波龍烷類、生物堿類和烷基糖苷類共9個(gè)化合物成分，其中的迷迭香酸甲酯和(-)-黑麥草內(nèi)酯在溪黃草的保肝、免疫抑制、抗炎、抗腫瘤中具有一定作用。此外，溪黃草還含有鈣、鐵、鋅、銅、鎂、鉬、鉛、鎳、鍶等微量元素[27]。

圖8 溪黃草其他成分結(jié)構(gòu)式

4 藥理作用

4.1 保肝作用

慢性肝病的特點(diǎn)是傷口愈合反應(yīng)延長(zhǎng)，往往進(jìn)展為晚期纖維化和肝硬化，病毒性肝炎、酒精性和非酒精性脂肪性肝炎是其主要的病因[28]。中藥治療便是抗肝纖維化的治療手段之一。黃莎等[29]通過(guò)建立高通量篩選模型、測(cè)定大鼠肝星狀細(xì)胞（HSCT6）的增殖率去篩選抗肝纖維化的作用部位，發(fā)現(xiàn)溪黃草等乙醇提取物能明顯降低HSC-T6的增殖率，其乙酸乙酯萃取部位是抑制HSC-T6細(xì)胞增殖的有效部位，具有一定的保肝作用。鄭玉峰等[30]探討了溪黃草黃酮對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝纖維化的影響及其作用機(jī)制，結(jié)果顯示溪黃草黃酮能夠降低TIMP-1蛋白、TGF-β因子，升高M(jìn)MP-9蛋白、PPARγ受體，以抑制肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。溪黃草水提物能夠降低小鼠脾臟和血清中轉(zhuǎn)氨酶及丙二醛（MDA）含量，增加SOD活性，發(fā)揮對(duì)酒精引起的肝損傷的保護(hù)作用[31]。此外，溪黃草二萜類化合物也具有肝臟保護(hù)作用，母核上取代基團(tuán)的位置和類型的不同決定了貝殼杉烷型和松香烷型二萜保肝活性的差異，保肝作用與肝臟線粒體、抗氧化酶系統(tǒng)的保護(hù)和調(diào)控有關(guān)[32,33]。

4.2 抗癌作用

溪黃草提取物具有抗多種癌癥作用，例如抗鼻咽癌、肝癌、食管癌、結(jié)腸癌等。Lin等[34]將從溪黃草乙醇提取物的乙酸乙酯層分離鑒定得到的化合物lasiodin作用于人鼻咽癌（NPC）細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)它能激活A(yù)paf-1/Caspase信號(hào)通路誘導(dǎo)NPC細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)AKT/MAPK和COX-2/NF-kB信號(hào)通路抑制NPC細(xì)胞的增殖，從而發(fā)揮抗癌作用。同年，其研究組還發(fā)現(xiàn)來(lái)自溪黃草的化合物effusanin E也能通過(guò)NF-κ B和COX-2信號(hào)通路抑制人鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[35]。王佐等[36]發(fā)現(xiàn)溪黃草乙酸乙酯提取物oridonin在體外對(duì)肝癌細(xì)胞（Hepa1c1c7）具有升高NQO1基因mRNA和蛋白表達(dá)、調(diào)控PI3K和ERK信號(hào)通路以誘導(dǎo)QR（醌還原酶）活性增加的作用，oridonin濃度為0.94μg/mL時(shí)QR活性明顯倍增。羅瑩等[37]采用表達(dá)譜芯片技術(shù)研究表明溪黃草水提取物也可以抑制肝癌細(xì)胞（HepG2），其通過(guò)改變HepG2細(xì)胞多個(gè)基因的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗肝癌作用。

從溪黃草中分離出來(lái)的Rabdocoestin B（Rabd-B）通過(guò)誘導(dǎo)食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）細(xì)胞中G2/M期停滯并抑制ATM/ATR-BRCA1活性、Akt和NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而表現(xiàn)出抗腫瘤活性。此外，Rabd-B組治療與DDP組相當(dāng)，有效抑制了小鼠腫瘤生長(zhǎng)，且對(duì)小鼠無(wú)明顯損傷。結(jié)果表明了Rabd-B是一種相對(duì)有效和安全的ESCC化療藥物[38]。Bae Eun Seo等[39]發(fā)現(xiàn)來(lái)自溪黃草的對(duì)映貝殼杉烯型二萜Nodosin可顯著抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT116）的增殖活性，結(jié)果表明Nodosin能有效下調(diào)βcatenin/ T細(xì)胞因子（TCF）的過(guò)度激活轉(zhuǎn)錄活性、誘導(dǎo)G2/M細(xì)胞周期停滯引發(fā)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而抑制Axin2、cyclin D1、survivin等Wnt靶基因的表達(dá)，這可能與Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的調(diào)控有關(guān)。

此外，溪黃草提取物的抗癌活性還會(huì)因提取溶劑不同而有所差異。孫藝等[40]分析了溪黃草醇提取物和水提取物對(duì)三種癌細(xì)胞（人肝癌細(xì)胞HepG2、人胃癌細(xì)胞MKN-45、人食管癌細(xì)胞TE-1）的抗癌效果，結(jié)果顯示溪黃草醇提物對(duì)細(xì)胞的抗增殖作用明顯優(yōu)于水提物。

4.3 抗菌作用

據(jù)報(bào)道，溪黃草的抗菌活性部位是氯仿部位，主要含二萜類、黃酮類等成分[41]。葉光斌等[42]研究表明乙醇為溪黃草中抑菌物質(zhì)的優(yōu)選浸提劑，并確定了以70%乙醇、料液比1∶30（m∶V）、超聲提取25 min為最優(yōu)提取工藝。溪黃草醇提物在瓊脂糖平板內(nèi)對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)白色念珠菌、釀酒酵母、產(chǎn)黃青霉真菌具有一定的抑制作用，而對(duì)供試的革蘭氏陰性菌抑制作用較弱或無(wú)抑制作用[43]。溪黃草水提物與頭孢曲松等抗菌藥聯(lián)用后可以增強(qiáng)其抗菌效力，但也可能存在配伍禁忌，降低藥物療效，增強(qiáng)毒副作用[44]。溪黃草水煎提取物對(duì)供試G+菌中的表皮葡萄球菌的抑菌效果最好，其與五倍子、金銀花、大青葉等組成的復(fù)方中大部分對(duì)大腸桿菌的抑制作用有所增強(qiáng)[45]。

4.4 抗炎作用

炎癥是機(jī)體對(duì)病原體感染、外來(lái)物質(zhì)和促炎性物質(zhì)產(chǎn)生的一種自然的生理反應(yīng)。有研究顯示，大多數(shù)“清熱性”草藥具有抗炎活性，且作用于多條信號(hào)通路，這很可能與草藥多化學(xué)成分的性質(zhì)有關(guān)，這些成分的確定可以進(jìn)一步發(fā)展成為抗炎癥藥物[46]。溪黃草所含的isodocarpin、carpalasionin、enmein、nodosin等二萜類成分就具有抗炎作用。其中化合物Nodosin可通過(guò)下調(diào)促炎細(xì)胞因子IL-2的表達(dá)，阻斷細(xì)胞有絲分裂周期從G1期向S期的轉(zhuǎn)移，并抑制T淋巴細(xì)胞的過(guò)度產(chǎn)生，發(fā)揮抗炎作用[47]。

4.5 抗病毒作用

乙型肝炎病毒（HBV）可引起嚴(yán)重性疾病乙型肝炎的產(chǎn)生，感染HBV的患者可發(fā)展為急性或慢性感染，導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭甚至肝癌或死亡。研究表明，溪黃草有抗乙型肝炎病毒活性，Chen等用石油乙醚、乙酸乙酯、丁醇對(duì)溪黃草進(jìn)行提取分離，所獲得的提取物分別進(jìn)行了抗病毒與抗腫瘤的活性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溪黃草乙酸乙酯有效分離物可抑制HepG2.2.15細(xì)胞中的HBsAg（乙型肝炎表面抗原）和HBeAg（乙型肝炎e抗原）的分泌，具有較強(qiáng)的抗HBV活性[48]。

4.6 抗氧化作用

段志芳等[49]發(fā)現(xiàn)溪黃草提取物可明顯抑制離體組織中MDA的生成，且呈劑量依賴關(guān)系，具有較好的脂質(zhì)過(guò)氧化抵抗能力，其中以水提取物對(duì)SD大鼠體外腎、肝臟的抑制效果最好。Lin等[50]用不同溶劑對(duì)溪黃草莖和葉進(jìn)行提取并采用HPLC-PDA法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示了溪黃草60%乙醇提取物具有較強(qiáng)的自由基清除能力和亞鐵離子螯合能力，可作為溪黃草中提取抗氧化劑的最佳溶劑；其莖葉中富含迷迭香酸，是溪黃草發(fā)揮體外抗氧化能力的重要成分之一。通過(guò)比對(duì)溪黃草乙醇提取物中四個(gè)部位（石油醚、氯仿、正丁醇、水）的抗氧化活性，張洪利等[51]人發(fā)現(xiàn)石油醚部位對(duì)DPPH自由基的清除效果最好，也體現(xiàn)了溪黃草中脂溶性成分的高抗氧化作用。

4.7 免疫調(diào)節(jié)作用

Hu 等[52]通過(guò)探究來(lái)自溪黃草的對(duì)映-貝殼杉烷型二萜冬凌草甲素（Oridonin）對(duì)CD4+/CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、Th1/Th2平衡和抗炎靶點(diǎn)HO-1的影響，探討其免疫抑制機(jī)制。結(jié)果表明，Oridonin在大鼠脾淋巴細(xì)胞中可通過(guò)誘導(dǎo)HO-1促進(jìn)T細(xì)胞向CD4+/CD25+ Tregs分化，抑制促炎細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ并誘導(dǎo)抗炎細(xì)胞因子IL-10、TGF-β分泌以逆轉(zhuǎn)Th1極化調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，從而發(fā)揮免疫抑制作用。此外，Oridonin還可在轉(zhuǎn)錄水平上抑制小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中B細(xì)胞活化因子（BAFF）啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄激活；在MRLlpr/LPR小鼠模型中減少特異性自身抗體的產(chǎn)生、減緩腎損傷、下調(diào)BAFF表達(dá)等以減輕MRLlpr/LPR小鼠狼瘡癥狀和組織損傷[53]。

4.8 治療阿爾茨海默病

乙酰膽堿的缺失是阿爾茨海默氏病的關(guān)鍵致病性因素，這一疾病可通過(guò)乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物來(lái)緩解[54]。據(jù)報(bào)道[54]，溪黃草乙酸乙酯提取物能較強(qiáng)抑制乙酰膽堿酯酶（AChE）活性，其作用濃度為1.0 mg/mL時(shí)抑制率可達(dá)89.59%，提取物濃度為0.1 mg/mL時(shí)抑制率為30.78%，這一結(jié)果可為AChE抑制劑篩選以防治阿爾茨海默氏病提供借鑒意義。

4.9 臨床上溪黃草復(fù)方的應(yīng)用

郝大林[56]研究發(fā)現(xiàn)，與派羅欣治療對(duì)照組相比，加用十味溪黃草顆粒治療具有濕熱蘊(yùn)脾證的慢性乙型肝炎患者比單一的α-干擾素西醫(yī)治療效果好。利用水煎煮法提取的溪黃草浸膏制成的消炎利膽片、復(fù)方膽通膠囊和復(fù)方膽通片制劑，可用于治療膽囊炎、膽管炎、膽結(jié)石等疾病[27]。

5 總結(jié)與展望

從相關(guān)研究的整理來(lái)看，溪黃草在保肝、抗癌、抗菌、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用，且發(fā)揮作用的主要是萜類化合物。此外，溪黃草在化妝品方面也具有一定的發(fā)展?jié)摿?，其所含的黑麥草?nèi)酯成分具有減緩皮膚衰老作用；以溪黃草丙二醇提取物、精油而開(kāi)發(fā)的化妝產(chǎn)品具有較好的祛痘作用[55]，因此，溪黃草在藥用和保健方面的發(fā)展前景廣闊。但是關(guān)于溪黃草靶向相關(guān)位點(diǎn)，通過(guò)信號(hào)通路發(fā)揮抗炎、免疫調(diào)節(jié)等作用方面的研究相對(duì)較少，而近年來(lái)通過(guò)中草藥提取研發(fā)新藥已成為研究的熱點(diǎn)，因此溪黃草靶向新藥還有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。同時(shí)，溪黃草作為廣式?jīng)霾璧闹匾煞?，是我?guó)南方五嶺以南地區(qū)居民較常飲用的涼茶之一，但在其飲用方面的安全性問(wèn)題鮮有報(bào)道研究。我們期望在未來(lái)可以看到溪黃草在靶向新藥、飲用安全性問(wèn)題、來(lái)源規(guī)范化等方面有進(jìn)一步的突破發(fā)展，使其更好地應(yīng)用于醫(yī)療和食品。