高效液相色譜法測定小油菜中阿維菌素的殘留量

曲悠揚(yáng)，勇艷華，于 洋，季 磊，陳 博，李婷婷

(大連市檢驗(yàn)檢測認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連 116000 )

阿維菌素(Abamectin)是一種廣譜殺蟲劑[1]，屬于大環(huán)內(nèi)酯類化合物，在農(nóng)業(yè)種植中應(yīng)用廣泛，可以殺滅小菜蛾、青蟲、棉鈴蟲、夜蛾、蚜蟲。阿維菌素殘留一旦富集于食物鏈，容易造成人類運(yùn)動(dòng)失調(diào)、呼吸緩慢等癥狀，過量會(huì)導(dǎo)致昏迷甚至死亡[2～6]。

小油菜又名上海青、青江菜、瓢兒白等，屬于普通白菜的一種[7]。目前，阿維菌素的檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜熒光法、高效液相色譜紫外法、液相色譜質(zhì)譜法[8～12]。水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測定液相色譜紫外法主要使用的國家標(biāo)準(zhǔn)為GB 23200.19-2016[13]，此方法提取液為丙酮，屬于易制毒物品，普通實(shí)驗(yàn)室不以獲取[14]。本方法雜質(zhì)分離度、回收率較好，適合日常使用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈甲醇(色譜純)；甲醇(色譜純)；氯化鈉(分析純)； C18凈化柱 3cc 200mg安捷倫；小油菜市售。

1.2 儀器與設(shè)備 超高效液相色譜(alliance e2695配UV檢測器) 沃特世；純水機(jī)(arium pro型號) 德國賽多利斯；全動(dòng)力專業(yè)型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R-300)德國步琦；天平(BSA224S)德國賽多利斯。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別精確吸取10mg/L標(biāo)準(zhǔn)中間工作液20、50、100、200、500μL、分別用初始流動(dòng)相定容至1mL，得到濃度為0.2、0.5、1、2、5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)工作溶液。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)步驟 提 ?。簻?zhǔn)確稱取粉碎均勻的試樣20.0g于離心管，加入20mL乙腈，混合混勻之后振搖30min，加6g氯化鈉，劇烈震蕩，將樣品放于離心機(jī)中4℃，10 000r/min離心5min，取上層溶液全部取出于磨口圓底燒瓶，于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2～3mL，加入5mL水混勻，待凈化。

凈 化：用3mL甲醇活化凈化柱，再用5mL水沖洗凈化柱，待液體流至篩板處，加入待凈化溶液，再用5mL水淋洗，去掉淋洗液。最后用5mL甲醇洗脫，洗脫液用氮?dú)獯抵两伞?zhǔn)確加入1mL 50%甲醇水溶液渦旋1min，用0.22μm濾膜過濾待上機(jī)。

1.3.3 色譜條件的確定

色譜柱：迪馬(Diamonsil 5μm C18， 250 × 4.6mm)； 檢測器：紫外檢測器； 檢測波長245 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：50μL。流動(dòng)相：A相為水，B相為乙腈。流速采用梯度方式(表1)。

表1 流速梯度表

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相梯度的選擇 菜為基質(zhì)時(shí)，小油菜中的雜質(zhì)較多，目標(biāo)物與雜質(zhì)容易分不開，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)與調(diào)試，表1所示流動(dòng)相梯度能較好地分離，同時(shí)也適用于大多數(shù)蔬菜基質(zhì)[15]。陽性樣品圖譜(圖1)所示。

圖1 小油菜中阿維菌素陽性樣品液相色譜圖

圖2 小油菜中阿維菌素加標(biāo)樣品液相色譜圖

圖3 小油菜空白樣品液相色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性 以阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)做線性回歸方程，得到相關(guān)系數(shù)：A： -3.162 890e+003; B： 9.648 061e+004; R2： 0.999 948。標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4)。

圖4 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線

阿維菌素在質(zhì)量濃度在0.2 ～ 5mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)出較好地線性關(guān)系。

2.3 方法定量限、回收率和精密度 經(jīng)過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，小油菜基質(zhì)中阿維菌素的方法定量限為0.01mg/kg。在小油菜試樣中添加0.01、0.025、0.1、0.25mg/kg 4個(gè)不同濃度水平進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行四組平行樣品的檢測，算出RSD，結(jié)果(表2)。

表2 阿維菌素的小油菜中添加回收率(n=4)

3 結(jié)論與討論

本方法于食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.19-2016相比，采用乙腈做提取液，比丙酮簡單易得，同時(shí)提取率相同，前處理過程不易出錯(cuò)，在日常實(shí)驗(yàn)中不同基質(zhì)中都顯示出了不錯(cuò)的回收率和精密度。

在試樣的提取過程中，振搖和混合要足夠，以保證回收率。同時(shí)在旋蒸和氮吹時(shí)一定要保證近干，阿維菌素為大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)，如果全干回收率會(huì)有所折損。