miR-125b對(duì)過(guò)敏原刺激后支氣管上皮細(xì)胞凋亡和分泌炎癥因子的作用

肖惠玲 李艷紅 趙 申 李俊杰 （湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院，襄陽(yáng)市中心醫(yī)院兒科，襄陽(yáng) 441000）

支氣管哮喘是一種十分常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)炎癥性疾病，不同患者哮喘嚴(yán)重程度差距明顯，目前臨床上用于哮喘治療的藥物主要是糖皮質(zhì)激素等，部分患者經(jīng)這些藥物治療后癥狀明顯改善，但有些患者出現(xiàn)激素抵抗，治療效果不佳現(xiàn)象［1］。免疫-炎癥反應(yīng)、支氣管上皮細(xì)胞過(guò)度凋亡等是目前公認(rèn)的哮喘發(fā)病機(jī)制［2］。近年來(lái)，哮喘已被證實(shí)是由多種基因調(diào)控引起，且分子靶向治療也成為哮喘治療的潛在途徑［3］。miRNA 的長(zhǎng)度為20～24 nt，是一種內(nèi)源性的小分子RNA，沒(méi)有編碼蛋白質(zhì)的作用，其主要通過(guò)影響下游靶基因和信號(hào)通路發(fā)揮作用［4］。miRNA不僅與胚胎發(fā)育和機(jī)體穩(wěn)態(tài)維持有關(guān)，還與炎癥、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤等進(jìn)程關(guān)系密切［5］。miR-125b 為miR-125 家族成員，也是miR-125 家族中較為活躍的成員，miR-125b 在腫瘤、腦梗死、阿爾茨海默病等進(jìn)展中發(fā)揮調(diào)控作用［6］。既往研究顯示，miR-125b 與哮喘有關(guān)，在哮喘患者中發(fā)現(xiàn)miR-125b表達(dá)下調(diào)，且上調(diào)miR-125b能夠抑制塵螨誘導(dǎo)的哮喘小鼠氣道炎癥［7］。現(xiàn)階段仍不明確miR-125b在過(guò)敏原刺激后支氣管上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌中的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b 抵抗骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞炎癥分泌與下調(diào)NF-κB 信號(hào)有關(guān)［8］。NF-κB 信號(hào)通路在人體組織中廣泛存在，是典型的炎癥反應(yīng)樞紐，其激活能夠誘導(dǎo)下游炎癥因子釋放，促進(jìn)炎癥反應(yīng)［9］。另外，NF-κB 還參與調(diào)控細(xì)胞凋亡過(guò)程，是一個(gè)多功能信號(hào)通路［10］。本實(shí)驗(yàn)以塵螨抗原提取物刺激支氣管上皮細(xì)胞系16HBE 進(jìn)行體外研究，探討miR-125b 在哮喘支氣管上皮細(xì)胞凋亡和分泌炎癥因子中的作用和可能機(jī)制，為分子靶向治療哮喘提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料 支氣管上皮細(xì)胞系16HBE 購(gòu)自通派（上海）生物科技有限公司；mimics control、miR-125b mimics購(gòu)自百奧邁科生物技術(shù)有限公司；Lipo?fectamine2000 試劑盒購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；Bax 抗體、p65 抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz；Bcl-2抗體購(gòu)自美國(guó)BioVision；IL-29檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Abcam；IL-6 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Cayman Chemical；塵螨抗原提取物（安脫達(dá)）購(gòu)自丹麥ALK-Abello A/S。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理 支氣管上皮細(xì)胞接種于6 孔板，以不含青鏈霉素的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，24 h 后觀察細(xì)胞密度為80%，轉(zhuǎn)染mimics control、miR-125b mimics。轉(zhuǎn)染試劑為L(zhǎng)ipofectamine2000，轉(zhuǎn)染步驟按照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。支氣管上皮細(xì)胞分為Control 組、Model 組、miR-NC 組、miR-125b 組，miR-NC 組、miR-125b 組在用300 U/L 塵螨抗原提取物刺激前轉(zhuǎn)染mimics control、miR-125b mimics。Control 組、Model 組均為沒(méi)有轉(zhuǎn)染的正常支氣管上皮細(xì)胞，Model 組細(xì)胞用300 U/L 塵螨抗原提取物刺激。各組細(xì)胞培養(yǎng)24 h以后，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.2 qRT-PCR 分析miR-125b 表達(dá) 在Control組、Model 組、miR-NC 組、miR-125b 組細(xì)胞中添加1 ml TRIzol試劑，按照常規(guī)方法提取細(xì)胞RNA，RNA溶解于0.1%的DEPC 水。以微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260/OD280，分析RNA 的濃度和純度，RNA 置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。分別在EP 管內(nèi)添加如下試劑進(jìn)行cDNA 合成：2μl 5×PrimeScript Buffer、0.5μl PrimeScript RT Enzyme mixⅠ、0.5μl RT引物、300 ng總RNA，最后添加RNAse Free dH2O 至10 μl，cDNA合成條件為：37 ℃15 min，85 ℃5 s，4 ℃1 min。PCR 反應(yīng)體系為：5 μl SYBR Premix Ex Taq、0.2 μl ROX Reference DyeⅡ、1.0 μl cDNA、0.5 μl 正向引物和反向引物，最后添加ddH2O 至10μl。PCR 儀設(shè)置反應(yīng)程序?yàn)椋侯A(yù)變性（95 ℃30 s，1 個(gè)循環(huán)），PCR反應(yīng)（95 ℃5 s，60 ℃34 s，40 個(gè)循環(huán)）。根據(jù)反應(yīng)的Ct 值，以2-ΔΔCt法計(jì)算miR-125b 的表達(dá)變化。miR-125b F：5'-TGAAGAACTGTCCTTACGTGACC-3'，miR-125b R：5'-AGAGCACCAAGACTGGCTCT-3'；U6 F：5'-TTGGTATCGTGGAAGGACTCA-3'，U6 R：5'-TGT?CATCATATTTGGCAGGTT-3'。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡 在Control、Model、miR-NC、miR-125b組細(xì)胞中加入0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞，1 000 g 離心10 min，棄上清液，添加提前預(yù)冷的PBS 溶液洗滌細(xì)胞2 次。每組收集1×106個(gè)細(xì)胞，添加結(jié)合緩沖溶液400μl，吸取5μl PI和Annexin V-FITC溶液至細(xì)胞中，置于室溫、避光環(huán)境中結(jié)合15 min。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。

1.2.4 ELISA 分析IL-6、IL-29 水平 收集Control、Model、miR-NC、miR-125b組細(xì)胞培養(yǎng)液上清，ELISA法檢測(cè)上清中IL-6、IL-29 含量，步驟完全參照IL-6、IL-29檢測(cè)試劑盒。

1.2.5 Western blot 分析Bax、Bcl-2、p65 蛋白表達(dá)變化 在Control、Model、miR-NC、miR-125b 組細(xì)胞中加入以1∶99比例添加PMSF后的RIPA溶液，用移液器反復(fù)吹打混合后，冰上靜置20 min。收集裂解溶液，以14 000 g 離心10 min，將上清溶液吸取、分裝后置于-80 ℃冰箱中保存。按照BCA 方法檢測(cè)蛋白濃度。在蛋白樣品中添加5×SDS-PAGE 緩沖溶液，二者比例為4∶1，100 ℃孵育5 min，冷卻后4 ℃?zhèn)溆谩＿x擇10%的分離膠及4%的濃縮膠進(jìn)行SDSPAGE 電泳。每個(gè)孔中添加30μg蛋白樣品，上層膠采用80 V 電壓電泳20 min，下層膠采用110 V 電壓電泳90 min。根據(jù)目的蛋白分子量大小裁剪NC膜，設(shè)置300 mA 電流轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為90 min。以TBST 洗滌NC 膜，5 min/次，共洗滌3 次。將NC 膜置于封閉液（5%牛血清白蛋白）中，室溫反應(yīng)2 h。將NC 膜置于一抗溶液，4 ℃孵育8 h。然后將NC 膜置于二抗溶液，室溫結(jié)合2 h。Bax、Bcl-2 一抗按照1∶1 000 稀釋，p65 一抗按照1∶800 稀釋，二抗按照1∶4 000 稀釋。ECL 顯色試劑盒顯色。分析條帶灰度值，以GAPDH 為內(nèi)參，對(duì)目的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析。

1.2.6 激活NF-κB 信號(hào)對(duì)miR-125b 調(diào)控支氣管上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌作用檢測(cè) 取轉(zhuǎn)染miR-125b mimics后的支氣管上皮細(xì)胞，用含300 U/L塵螨抗原提取物和1 μmol/L NF-κB 信號(hào)激活劑PMA 的細(xì)胞培養(yǎng)液刺激24 h，記為miR-125b+PMA組，以miR-125b組為參照，按照1.2.3、1.2.4、1.2.5中流式細(xì)胞術(shù)、ELISA法、Western blot法分別檢測(cè)細(xì)胞凋亡和分泌IL-6、IL-29 的水平以及Bax、Bcl-2、p65蛋白表達(dá)變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以±s表示，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，多組差異比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-125b mimics 對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b表達(dá)的影響 Model組支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b 表達(dá)水平低于Control 組（P<0.05）。miR-125b組支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b表達(dá)水平高于miR-NC 組（P<0.05）。見(jiàn)表1。提示miR-125b mimics 提高過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b表達(dá)水平。

表1 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b水平（±s）Tab.1 Level of miR-125b in bronchial epithelial cells induced by allergens after miR-125b mimics trans?fection（±s）

表1 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b水平（±s）Tab.1 Level of miR-125b in bronchial epithelial cells induced by allergens after miR-125b mimics trans?fection（±s）

Note：Compared with Control group，1）P<0.05；compared with miRNC group，2）P<0.05.

miR-125b level 1.00±0.12 0.43±0.061）0.44±0.04 0.95±0.132）96.296<0.001 Groups Control Model miR-NC miR-125b FP

2.2 上調(diào)miR-125b對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡的影響 Model 組支氣管上皮細(xì)胞凋亡率升高，Bax 蛋白表達(dá)增多，Bcl-2 蛋白表達(dá)減少，與Con?trol組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miR-125b組支氣管上皮細(xì)胞凋亡率降低，Bax 蛋白表達(dá)減少，Bcl-2蛋白表達(dá)增加，與miR-NC組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖1、表2。提示上調(diào)miR-125b抑制過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡。

表2 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡率和Bax、Bcl-2蛋白水平（±s）Tab.2 Allergen-induced apoptosis rate and Bax and Bcl-2 protein levels of bronchial epithelial cells after miR-125b mimics transfection（±s）

表2 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡率和Bax、Bcl-2蛋白水平（±s）Tab.2 Allergen-induced apoptosis rate and Bax and Bcl-2 protein levels of bronchial epithelial cells after miR-125b mimics transfection（±s）

Note：Compared with Control group，1）P<0.05；compared with miR-NC group，2）P<0.05.

Bcl-2 0.65±0.05 0.29±0.041）0.30±0.04 0.38±0.032）154.364<0.001 Groups Control Model miR-NC miR-125b FP Apoptosis rate/%7.52±0.65 26.85±2.111）24.96±2.87 14.21±1.332）201.902<0.001 Bax 0.26±0.03 0.85±0.091）0.87±0.07 0.43±0.042）216.677<0.001

圖1 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡Fig.1 Allergen-induced apoptosis of bronchial epithelial cells after miR-125b mimics transfection

2.3 上調(diào)miR-125b 對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞炎癥因子分泌的影響 Model 組支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-29水平升高，與Control組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miR-125b 組支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-29 減少，與miR-NC 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表3。提示上調(diào)miR-125b抑制過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-29。2.4 上調(diào)miR-125b 對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中NF-κB 信號(hào)通路的影響 Model 組支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白表達(dá)水平升高，與Control組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miR-125b 組支氣管上皮細(xì)胞中p65 蛋白表達(dá)水平降低，與miR-NC 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖2、表4。提示上調(diào)miR-125b 抑制過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中NF-κB信號(hào)激活。

表4 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白水平（±s）Tab.4 Allergen-induced p65 protein level in bronchial epi?thelial cells after miR-125b mimics transfection（±s）

表4 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白水平（±s）Tab.4 Allergen-induced p65 protein level in bronchial epi?thelial cells after miR-125b mimics transfection（±s）

Note：Compared with Control group，1）P<0.05；compared with miRNC group，2）P<0.05.

p65 0.23±0.03 0.58±0.041）0.56±0.07 0.29±0.022）150.923<0.001 Groups Control Model miR-NC miR-125b FP

圖2 Western blot 檢測(cè)miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白表達(dá)水平Fig.2 Western blot detection of p65 protein expression in bronchial epithelial cells induced by allergens after miR-125b mimics transfection

表3 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-29水平（±s，pg/ml）Tab.3 Allergen-induced IL-6 and IL-29 levels of bronchial epithelial cells after miR-125b mimics transfection（±s，pg/ml）

表3 miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-29水平（±s，pg/ml）Tab.3 Allergen-induced IL-6 and IL-29 levels of bronchial epithelial cells after miR-125b mimics transfection（±s，pg/ml）

Note：Compared with Control group，1）P<0.05；compared with miR-NC group，2）P<0.05.

IL-29 52.69±4.72 169.85±15.481）167.55±16.27 83.74±6.392）223.777<0.001 Groups Control Model miR-NC miR-125b FP IL-6 99.52±10.23 315.24±25.691）310.86±29.97 189.47±14.202）208.955<0.001

2.5 NF-κB 信號(hào)激活劑PMA 促進(jìn)支氣管上皮細(xì)胞中NF-κB 信號(hào)激活 miR-125b+PMA 組支氣管上皮細(xì)胞中p65 蛋白表達(dá)水平升高，與miR-125b 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖3、表5。提示NF-κB信號(hào)激活劑促進(jìn)支氣管上皮細(xì)胞中NF-κB信號(hào)激活。

表5 PMA 處理和miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白水平（±s）Tab.5 Levels of p65 protein in bronchial epithelial cells induced by allergens after PMA treatment and miR-125b mimics transfection（±s）

表5 PMA 處理和miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白水平（±s）Tab.5 Levels of p65 protein in bronchial epithelial cells induced by allergens after PMA treatment and miR-125b mimics transfection（±s）

Note：Compared with miR-125b group，1）P<0.05.

p65 0.28±0.04 0.63±0.071）13.024<0.001 Groups miR-125b miR-125b+PMA tP

圖3 Western blot檢測(cè)miR-125b mimics和PMA對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞中p65蛋白表達(dá)的影響Fig.3 Western blot detection of effect of miR-125b mimics and PMA on expression of p65 protein in bronchial epithelial cells induced by allergens

2.6 NF-κB信號(hào)激活劑PMA 對(duì)miR-125b影響過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡和分泌炎癥因子的作用 miR-125b+PMA 組支氣管上皮細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞中Bax 蛋白表達(dá)增多，Bcl-2 蛋白表達(dá)減少，細(xì)胞分泌的IL-6、IL-29增多，與miR-125b組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖4、表6。提示NF-κB 信號(hào)激活劑逆轉(zhuǎn)miR-125b 影響過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡和分泌炎癥因子的作用。

表6 PMA 處理和miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡率和Bax、Bcl-2 蛋白水平及細(xì)胞分泌IL-6、IL-29水平（±s）Tab.6 Allergen-induced bronchial epithelial cell apoptosis，Bax and Bcl-2 protein levels，and cell secretion of IL-6 and IL-29 levels after treatment with PMA and miR-125b mimics transfection（±s）

表6 PMA 處理和miR-125b mimics 轉(zhuǎn)染后過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡率和Bax、Bcl-2 蛋白水平及細(xì)胞分泌IL-6、IL-29水平（±s）Tab.6 Allergen-induced bronchial epithelial cell apoptosis，Bax and Bcl-2 protein levels，and cell secretion of IL-6 and IL-29 levels after treatment with PMA and miR-125b mimics transfection（±s）

Note：Compared with miR-125b group，1）P<0.05.

IL-29/（pg·ml-1）84.17±6.69 142.01±12.741）12.059<0.001 Groups miR-125b miR-125b+PMA tP Apoptosis rate/%13.56±1.20 22.84±1.651）13.646<0.001 Bax 0.45±0.05 0.75±0.071）10.462<0.001 Bcl-2 0.37±0.04 0.26±0.031）6.600<0.001 IL-6/（pg·ml-1）190.25±15.58 276.39±20.851）9.929<0.001

圖4 miR-125b mimics和PMA對(duì)過(guò)敏原誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡的影響Fig.4 Effect of miR-125b mimics and PMA on allergeninduced apoptosis of bronchial epithelial cells

3 討論

哮喘有多種誘導(dǎo)因素，如氣候變化、感染、精神因素、過(guò)敏原、藥物等，塵螨是最常見(jiàn)的哮喘氣道炎癥誘導(dǎo)因子，也是氣道高反應(yīng)性發(fā)生的重要原因。塵螨刺激后的支氣管上皮細(xì)胞脫落，細(xì)胞凋亡水平增加，同時(shí)產(chǎn)生大量炎癥因子，這些炎癥因子又可進(jìn)一步刺激支氣管上皮細(xì)胞，加速細(xì)胞凋亡［11-12］。IL-29是常見(jiàn)的哮喘炎癥因子，其在哮喘患者中表達(dá)上調(diào)，IL-29具有促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分泌IL-6等炎癥因子的作用，放大單核細(xì)胞炎癥反應(yīng)［13］。IL-6 介導(dǎo)Th1/Th2 及Th17/Treg 平衡，是與哮喘氣道炎癥密切相關(guān)的促炎因子［14］。細(xì)胞凋亡是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，是細(xì)胞內(nèi)多種基因經(jīng)過(guò)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)呈現(xiàn)的最終表現(xiàn)，目前發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白家族主要有Bcl-2等，根據(jù)在細(xì)胞凋亡中的作用，將Bcl-2蛋白家族中的蛋白成員分為促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，Bax 是Bcl-2 蛋白家族中的促凋亡蛋白，其表達(dá)升高后促進(jìn)細(xì)胞凋亡；Bcl-2 是Bcl-2 蛋白家族中的抗凋亡蛋白，其表達(dá)升高后抑制細(xì)胞凋亡［15-16］。本實(shí)驗(yàn)顯示，塵螨抗原提取物誘導(dǎo)后的支氣管上皮細(xì)胞凋亡水平升高，細(xì)胞中Bax 蛋白表達(dá)增多，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，細(xì)胞分泌的IL-29、IL-6 水平升高，提示塵螨抗原提取物誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌，說(shuō)明成功構(gòu)建了體外哮喘支氣管上皮細(xì)胞模型。

哮喘的發(fā)生受細(xì)胞內(nèi)多種基因的調(diào)控，闡明基因在哮喘發(fā)生中的作用對(duì)于分子靶向治療哮喘具有重要意義［17］。miRNA 是研究較多的非編碼RNA，在人體的不同組織和器官中均有表達(dá)，并發(fā)揮極為重要的作用，miRNA 在組織中的表達(dá)具有時(shí)序性、組織特異性，這與miRNA 的功能有關(guān)［18］。miR-125b參與腫瘤、心血管系統(tǒng)疾病、關(guān)節(jié)炎等疾病進(jìn)程，在人體的不同組織中幾乎均有表達(dá)［6，19-20］。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b 在哮喘患者中表達(dá)降低，且可上調(diào)miR-125b 抑制塵螨誘導(dǎo)的哮喘小鼠氣道炎癥，改善氣道損傷［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，塵螨抗原提取物刺激后的支氣管上皮細(xì)胞中miR-125b表達(dá)水平降低，且可上調(diào)miR-125b 表達(dá)水平抑制塵螨抗原提取物誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡和IL-29、IL-6 分泌，提示miR-125b 可能具有抑制哮喘支氣管上皮細(xì)胞損傷的作用。

NF-κB是在B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種核因子，NF-κB以二聚體的形式存在于細(xì)胞內(nèi)，p65 是NF-κB 的關(guān)鍵亞單位，其表達(dá)水平高低與NF-κB 信號(hào)激活有關(guān)［21］。NF-κB 具有多種作用，如調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、分化、代謝、炎癥等［22-23］。既往研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB在哮喘中過(guò)度激活，NF-κB激活后誘導(dǎo)炎癥發(fā)生，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，造成氣道損傷，加重哮喘進(jìn)程［9，11］。有報(bào)道顯示，miR-125b 發(fā)揮抗炎作用與下調(diào)NF-κB 信號(hào)通路有關(guān)［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，塵螨抗原提取物刺激后的支氣管上皮細(xì)胞中p65 蛋白表達(dá)水平升高，而上調(diào)miR-125b 抑制p65 蛋白表達(dá)，NF-κB 信號(hào)激活劑逆轉(zhuǎn)miR-125b 對(duì)塵螨抗原提取物刺激后的支氣管上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌，提示miR-125b通過(guò)抑制NF-κB 信號(hào)參與哮喘支氣管上皮細(xì)胞損傷進(jìn)程。

綜上所述，miR-125b 可能是哮喘治療的分子靶點(diǎn)，上調(diào)miR-125b抑制塵螨抗原提取物誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌，其機(jī)制與下調(diào)NF-κB 信號(hào)通路有關(guān)。目前尚不清楚miR-125b 通過(guò)何種具體靶向機(jī)制影響NF-κB 信號(hào)進(jìn)而參與哮喘進(jìn)程，課題組在以后實(shí)驗(yàn)中會(huì)進(jìn)行深入研究。