Ki-67、表皮生長(zhǎng)因子受體在室管膜瘤中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系

王文濤，曹寧，張國(guó)來(lái)

1西北大學(xué)附屬醫(yī)院/西安市第三醫(yī)院神經(jīng)外科，西安710021

2延安大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 延安7160000

室管膜瘤是一種低度惡性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，該腫瘤生長(zhǎng)速度較慢，由于其發(fā)病部位較為特殊，可嚴(yán)重影響患者的身體功能和生命安全。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，室管膜瘤發(fā)生率較低，可見于各年齡層中，特別是兒童和青少年[1]。室管膜瘤的癥狀主要包括顱內(nèi)壓增高及不同生長(zhǎng)部位相應(yīng)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如頭痛、吞咽困難、聽力減退等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)顱內(nèi)出血、腦水腫及神經(jīng)功能缺損等癥狀，且患者的預(yù)后相對(duì)較差。目前關(guān)于室管膜瘤的發(fā)病機(jī)制尚未明確，隨著研究的不斷深入，有研究發(fā)現(xiàn)，室管膜瘤與多種因子密切相關(guān)[2]。其中Ki-67蛋白作為腫瘤細(xì)胞增殖活性評(píng)估的重要指標(biāo)，腫瘤的惡性程度越高，Ki-67 表達(dá)水平也就越高[3]。表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）作為跨膜糖蛋白，作用于細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和分化過程，在多種實(shí)體瘤中過表達(dá)。但目前臨床對(duì)Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中表達(dá)的相關(guān)研究較少見[4-6]。因此，本研究旨在探討Ki-67、EGFR在室管膜瘤中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至2020 年1 月西安市第三醫(yī)院收治的室管膜瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前行影像學(xué)檢查證實(shí)存在顱內(nèi)占位病變，經(jīng)病理學(xué)檢查確診為室管膜瘤；②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心理障礙或精神疾病，不能正常溝通交流；②隨訪資料不完整；③合并凝血功能異常；④合并其他顱內(nèi)腫瘤。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入84 例室管膜瘤患者，其中男56 例，女28 例；年齡24～55 歲，平均（32.71±2.53）歲；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ級(jí)45 例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)39 例。取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織（距腫瘤組織＞3 cm）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測(cè)Ki-67、EGFR蛋白的表達(dá)情況

取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織，石蠟包埋連續(xù)切片，厚度為5 mm，抗原修復(fù)，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。滴加鼠抗人Ki-67 單克隆抗體、兔抗人EGFR單克隆抗體，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染后封片。

結(jié)果判定：Ki-67 主要定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性；EGFR 主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色判定為陽(yáng)性。每張切片隨機(jī)觀察5 個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，取平均值。Ki-67、EGFR均采用半定量積分法進(jìn)行評(píng)估。依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分：未見陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≤25%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為26%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為51%～75%計(jì)3 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞75%計(jì)4 分；依據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：黃色染色計(jì)1 分，棕黃色染色計(jì)2 分，棕褐色染色計(jì)3 分；將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘，0 分為陰性（-），l～4 分為弱陽(yáng)性（+），5～8 分為中度陽(yáng)性（++），9～12 分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）；（-）（+）判定為陰性表達(dá)，（++）（+++）判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 資料收集和隨訪方法

收集84 例室管膜瘤患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、術(shù)后放療情況、術(shù)后化療情況等。采用到院復(fù)查的方式對(duì)所有患者進(jìn)行為期2 年的隨訪，每3 個(gè)月復(fù)查1 次，依據(jù)影像學(xué)檢查結(jié)果、腦神經(jīng)受損體征評(píng)估患者的預(yù)后，腦干受侵犯判定為預(yù)后不良，腦干未侵犯、無(wú)復(fù)發(fā)判定為好轉(zhuǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；室管膜瘤患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic 回歸模型分析；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67、EGFR 的表達(dá)情況

室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)率為64.29%（54/84），EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率為67.86%（57/84），均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 室管膜瘤患者腫瘤組織和癌旁組織中Ki-67、EGFR表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同組織學(xué)分級(jí)室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 表達(dá)情況的比較

組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表2）

表2 不同組織學(xué)分級(jí)室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的單因素分析

隨訪2 年，84 例室管膜瘤患者預(yù)后好轉(zhuǎn)68 例，預(yù)后不良16 例。預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良患者年齡、性別、腫瘤直徑、術(shù)后放療情況、術(shù)后化療情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良室管膜瘤患者腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67

表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的單因素分析

2.4 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況作為自變量，室管膜瘤患者的預(yù)后作為因變量，納入多元Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表4）

表4 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的多元Logistic 回歸分析

3 討論

Ki-67 是增殖細(xì)胞相關(guān)核抗原，在腫瘤患者的病理報(bào)告中，Ki-67 表達(dá)水平可提示細(xì)胞的增殖活躍程度，Ki-67 的表達(dá)水平越高表示細(xì)胞增殖越活躍，惡性程度也會(huì)越高，越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[7]。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌患者中Ki-67 的表達(dá)明顯上調(diào)，且Ki-67 高表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率較高，總生存率明顯降低，預(yù)后不佳，因此，認(rèn)為Ki-67 高表達(dá)患者手術(shù)治療后仍需積極進(jìn)行輔助治療[8]。Jensen等[9]的研究認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞的分化程度與其抗原抗體反應(yīng)中Ki-67 的陽(yáng)性檢出率呈負(fù)相關(guān)。EGFR 具有酪氨酸激酶活性，可與表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合并在細(xì)胞核內(nèi)啟動(dòng)相關(guān)因子，從而促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖[10]。EGFR 表達(dá)異?？蓪?dǎo)致下游信號(hào)增強(qiáng)，尤其是突變型EGFR 蛋白表達(dá)增強(qiáng)，可導(dǎo)致其持續(xù)激活[11]。但多項(xiàng)研究在胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了EGFR 異常表達(dá)[12-13]。本研究通過比較室管膜瘤腫瘤組織及癌旁組織中Ki-67、EGFR 表達(dá)情況，結(jié)果顯示，室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，且組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)患者。表明Ki-67、EGFR 表達(dá)情況可能與室管膜瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，或可作為評(píng)估細(xì)胞增殖的指標(biāo)，患者的組織學(xué)分級(jí)越高，Ki-67、EGFR 的陽(yáng)性表達(dá)率越高，表明Ki-67、EGFR 可能與組織學(xué)分級(jí)存在共線性關(guān)系。這可能是因?yàn)镵i-67 是細(xì)胞周期重要的調(diào)節(jié)因子，其高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，而EGFR 高表達(dá)與基因擴(kuò)增密切相關(guān)[14]。

研究顯示，室管膜瘤患者的總體預(yù)后較差，5年生存率約為15%，目前臨床關(guān)于室管膜瘤患者預(yù)后的影響因素尚無(wú)統(tǒng)一定論，通常與腫瘤部位、病理類型、復(fù)發(fā)情況等因素有關(guān)[15-16]。本研究單因素分析結(jié)果顯示，預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良患者腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；多元Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），表明Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均是室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且預(yù)后不良患者機(jī)體免疫功能損傷程度更高，機(jī)體免疫功能亢進(jìn)引發(fā)的病理?yè)p傷可能會(huì)促進(jìn)室管膜瘤的發(fā)生發(fā)展。但影響室管膜瘤患者預(yù)后的因素較多，尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行多中心研究驗(yàn)證。

綜上所述，Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率較高，腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。