多巴胺預(yù)處理根管內(nèi)壁對AH-plus糊劑粘接效果的影響

根管治療是治療牙髓病和根尖周病最常用的治療方法，根管充填是根管治療的終末關(guān)鍵環(huán)節(jié)，充填質(zhì)量不佳是治療失敗的常見原因之一

。有研究表明根管充填質(zhì)量對根尖周區(qū)健康的影響遠(yuǎn)大于冠修復(fù)質(zhì)量

，因此在臨床上常通過應(yīng)用不同根管沖洗液、沖洗方式來增強根充材料與根管內(nèi)壁的粘接性能，研究也證實該處理可改善環(huán)氧樹脂基封閉劑與根部牙本質(zhì)間的抗脫落性能

，但無論是在冠修復(fù)體還是粘接的封閉材料中，樹脂與牙本質(zhì)間界面總是存在聚合收縮，并隨著時間的推移而產(chǎn)生微滲漏。研究表明AH-plus 根管糊劑也存在聚合收縮的弊端

，它自身的疏水性使其在濕潤環(huán)境中滲入牙本質(zhì)小管的能力下降，無法實現(xiàn)與牙本質(zhì)的有效粘接

。為了減少微滲漏，抵抗樁道預(yù)備時機械應(yīng)力造成粘接界面破壞，提高樹脂類根管封閉劑的粘接性具有重要意義。

近年來，因火災(zāi)引起的車輛事故時有發(fā)生，按照起火原因，汽車火災(zāi)大致分為自燃、引燃、碰撞起火、爆炸和雷擊五種類型，這五種類型的前三項，成為了司法鑒定的重點。本文結(jié)合一起實際案例，利用激光拉曼光譜法對現(xiàn)場殘留物進行成分分析，使用“排除法”確證了現(xiàn)場起火的根本原因。保險公司的理賠工作提供了法律依據(jù)。[1-3]

貽貝是一種海洋貝殼類生物，它們的足絲可以在海底潮濕底物上強附著，可使貽貝承受波浪的沖擊力

。這種獨特的耐濕粘接性歸因于貽貝分泌的一種特殊蛋白，即貽貝粘附蛋白（mussel foot protein，MFP），它含有高濃度L-3,4-二羥基苯丙氨酸，其鄰苯二酚基團可以與水下的物體表面形成化學(xué)性粘接，從而抵抗水的沖擊

。研究者從仿生角度出發(fā)，獲得了一個與MFP 含有相同鄰苯二酚和氨基兩種特征基團的白色晶體化合物——多巴胺。多巴胺作為一種交聯(lián)劑，其中的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)可以增強與底物的結(jié)合。目前多巴胺在口腔粘接、頜面部軟組織損傷、口腔種植及成骨修復(fù)等領(lǐng)域的粘附作用均有研究，其具有良好生物相容性和粘接性能

。目前臨床上根管充填前常采用紙尖干燥，然而紙尖并不能使根管內(nèi)牙本質(zhì)小管達(dá)到完全干燥狀態(tài)，根管內(nèi)殘留的水分對不同樹脂類根管糊劑粘接性可產(chǎn)生影響，有研究顯示AH-plus 根管糊劑在根管潮濕狀態(tài)下粘接性較差，為此需要尋找改善AH-plus 糊劑粘接性的新方法。本實驗利用多巴胺對根管內(nèi)壁進行預(yù)處理，引入多巴胺中鄰苯二酚基團，并使其氨基與AHplus 糊劑中環(huán)氧基進行交聯(lián)，探討其提高AH-plus糊劑的粘接性能、改善AH-plus 糊劑微滲漏的效果。

1 材料和方法

1.1 樣本選擇與收集

經(jīng)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審核通過［批號：2019JS16（研201935）］，經(jīng)患者知情同意下，收集單根管離體恒牙32 顆（20 ～45 歲）。納入標(biāo)準(zhǔn)：新鮮無齲壞，牙根及根尖孔發(fā)育完全，未經(jīng)根管治療，牙根無折裂的單根管牙，根管彎曲度＜10°（Schneider 法）。

1.2 主要試劑與儀器

2.5% NaClO 溶 液、17% EDTA 根 管 潤 滑 液、EDTA 凝膠（朗力生物醫(yī)藥有限公司，中國）；AHplus 封閉劑（Dentsply，美國）；牙膠尖（Dentsply，美國）；Tris-HCl 緩沖液（PHygege 公司，中國）；多巴胺（Sigma-Aldrich 公司，美國）；羅丹明B（上海展云化工有限公司，中國）；熒光素鈉（中科行，中國）；低速切片機（SYJ150，沈陽科晶公司，中國）；萬能材料試驗機（AG-X plus，島津公司，日本）；體視顯微鏡（LEICA 公司，德國）；掃描電鏡（SEM SU 5000，日立公司，日本）；激光共聚焦顯微鏡（LSM880，Zeiss，德國）。

1.3 樣本制備及實驗分組

使用低速切片機在距離根管樣本根尖3 mm 及6 mm 處水平向切割根管，制備成厚度為1 ～2 mm的根管切片。排除根管橫截面形狀為橢圓形樣本（最長徑/最短徑≥2）、橫斷面存在明顯氣泡的樣本。

不同解剖部位的糊劑粘接強度差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（

=3.001，

＜0.05）。根中1/3 組糊劑粘接強度明顯高于根尖1/3 組；在根尖1/3組中，0 mg/mL組與1 mg/mL 組（

= 15.667，

＜0.05）、2 mg/mL 組（

= 26.500，

＜0.05）間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，3 mg/mL 組與2 mg/mL 組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（

= 18.333，

＜0.05）。在根中1/3 組中，1 mg/mL組與2 mg/mL 組具有顯著性差異，0 mg/mL 組與2 mg/mL 組具有顯著性差異。無論根尖1/3 組還是根中1/3 組，濃度為2 mg/mL 粘接強度最大（

＜0.05），見圖5。

1.3.3 根管充填 0.1 wt%熒光素鈉染料與AHplus 糊劑以質(zhì)量比1：1 000 混合。冷牙膠側(cè)方加壓技術(shù)進行根管充填，X 線片檢查充填質(zhì)量，暫封膏封閉根冠部，指甲油封閉根尖部。保存于37 ℃、100%濕度的電熱恒溫培養(yǎng)箱中10 d 使AH-plus 根管糊劑固化。

1.3.1 離體牙根管預(yù)備 使用低速切割機去除牙冠部，得到牙根。記錄#15 K 銼疏通根管至根尖孔的長度，此時根尖孔處可見銼尖，該長度減去1.0 mm 確定工作長度。ProTaper 機用鎳鈦系統(tǒng)根備至F2（30#）。每更換一次器械均用2.5% NaClO 和17% EDTA 交替沖洗根管，預(yù)備完成后用10 mL 蒸餾水作終末沖洗。

1.4 實驗觀察指標(biāo)

通過掃描電鏡可以觀察到對照組0 mg/mL 多巴胺溶液處理24 h 后，牙本質(zhì)小管大部分呈現(xiàn)開放狀態(tài)，有少量碎屑?xì)埩?；?jīng)1 mg/mL 多巴胺溶液處理24 h 后，根中1/3 和根尖1/3 處根管內(nèi)壁牙本質(zhì)小管表面有少量多巴胺顆粒分布疏松不均勻；當(dāng)在2 mg/mL 的多巴胺溶液中處理24 h，可觀察到大部分牙本質(zhì)小管被多巴胺顆粒覆蓋，且多巴胺層均勻致密；當(dāng)牙根經(jīng)3 mg/mL 多巴胺溶液處理后，牙本質(zhì)小管管口沉積大量多巴胺顆粒，但不均勻分布（圖2）。

1.4.2 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察AH-plus 糊劑滲透情況 所有切片表面使用1 200 目和600 目砂紙拋光。在激光共聚焦顯微鏡下分析對應(yīng)根中部（距根尖孔6 mm 處）和根尖三分之一（距根尖孔3 mm 處）的切片。為了正確顯示所有圖像，觀察多巴胺在牙本質(zhì)小管內(nèi)的滲透情況，用Image J 軟件測量牙本質(zhì)小管內(nèi)熒光素鈉標(biāo)記的AH-plus 糊劑的滲透面積百分比。滲透面積指測量AH-plus 糊劑沿根管壁的穿透面積（圖1），計算公式為：（A2-A1）/T×100%；A1：根管壁面積；A2：AH-plus 糊劑沿根管壁的穿透面積；T：牙根的總面積。

采用SPSS 26.0 及Graphpad Prism 8.0 軟件對滲透面積百分比和粘接強度進行統(tǒng)計分析及繪圖，研究數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布時，采用秩和檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩組測定結(jié)果采用Mann-Whitney 秩和檢驗進行比較，多組測定結(jié)果采用Kruskal-Wallis

秩和檢驗進行比較，雙側(cè)檢驗水準(zhǔn)

=0.05。研究數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時，采用方差分析進行多組比較，雙側(cè)檢驗水準(zhǔn)

=0.05。當(dāng)方差齊時，進一步兩兩比較采用LSD 法，方差不齊時，兩兩比較采用Dunnett 法，當(dāng)

＜0.05，表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

首席執(zhí)行官Ghomas Ingenlath先生在車展現(xiàn)場還表示：“Polestar 2將會一輛純電動汽車，會是Polestar品牌成功邁向電氣化的基石，也將帶動Polestar品牌銷量的迅速提升?！?在未來18個月內(nèi)，Polestar將會在全球主要城市建立全新的零售網(wǎng)絡(luò)—Polestar Space，中國首家Polestar Space的選址將于2019年公布。

本實驗使用不同濃度多巴胺對根管內(nèi)壁預(yù)處理，通過掃描電鏡可以看到隨著多巴胺濃度的升高，其附著在牙本質(zhì)小管表面的形貌由疏松逐漸形成均勻致密的涂層，其中2 mg/mL 多巴胺涂層更為均勻致密，這是多巴胺氧化聚合后形成聚多巴胺的薄膜層；而1 mg/mL 多巴胺尚未形成連續(xù)的薄膜層，有研究表明多巴胺自發(fā)氧化聚合沉積過程時間較久，需24 h 才能形成一定厚度的、較穩(wěn)定的聚多巴胺薄膜

，因此本研究將樣本處理時間選擇為24 h。研究表明，在單一反應(yīng)步驟中產(chǎn)生的聚多巴胺膜的最大厚度約為50 nm，而時間過長導(dǎo)致薄膜過厚，再加上在掃描電鏡觀察前需要經(jīng)過一系列干燥脫水，從而出現(xiàn)裂紋。根據(jù)本實驗結(jié)果可見多巴胺單體的濃度高于2 mg/mL 可在牙根上形成聚多巴胺膜，通過調(diào)節(jié)多巴胺單體濃度，可以控制聚多巴胺膜的厚度。

我國計劃生育政策從“獨生子女”到“全面二孩”的變遷歷程中，最關(guān)鍵的政策調(diào)整出現(xiàn)在2005-2015年之間。通過對十年間傳統(tǒng)媒體和新媒體的話語進行定量分析發(fā)現(xiàn)，新媒體時代到來后，媒體話語與政策變遷軌跡趨同，一定程度上證明了在媒介融合的背景下，媒體對計劃生育政策變遷確實產(chǎn)生了影響效果，推動了獨生子女政策走向全面二孩政策的變遷。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

王老師在課上就曾說過：“研究教育問題，不能只是單純的關(guān)注教育，要看社會的各個方面，因為教育不是孤立存在的。”正因如此，我拜讀了這本書。讀完之后感觸頗深，深感某些研究經(jīng)濟學(xué)的方法，與研究教育學(xué)的方法是互通的，并且對于我以后進行教育學(xué)研究幫助頗多，且使我更加深入的了解了教育學(xué)研究方法。

2 結(jié) 果

2.1 根管牙本質(zhì)表面沉積物形貌分析

1.4.1 掃描電鏡觀察多巴胺與根管牙本質(zhì)壁的結(jié)合狀況 將牙根縱剖面切片經(jīng)25%、50%、75%及無水乙醇依次梯度脫水各20 min，真空干燥24 h，噴金60 s，采用掃描電鏡，觀察多巴胺與根管牙本質(zhì)壁的結(jié)合狀況。

通過激光共聚焦掃描顯微鏡下可觀察到縱剖面根管內(nèi)壁多巴胺（圖3a）。多巴胺在根管牙本質(zhì)小管內(nèi)沉積，并且覆蓋大部分牙本質(zhì)小管管口（圖3b）。圖3c 為根管橫斷面牙本質(zhì)小管內(nèi)多巴胺和AH-plus 糊劑合成圖，顯示了多巴胺和AH-plus 糊劑可以同時滲入牙本質(zhì)小管。

2.2 滲透面積百分比結(jié)果

不同解剖部位的AH-plus 糊劑滲透面積百分比有顯著性差異（

= 31.084，

＜0.05）；其中根中1/3 處滲透面積百分比均值大于根尖1/3；多巴胺濃度及濃度解剖部位兩者之間的交互作用差異無統(tǒng)計學(xué)意義（

=1.065，

＞0.05），見圖4。

2.3 粘接強度結(jié)果分析

1.3.2 多巴胺溶液的配制及根管預(yù)處理分組0.06 g 多巴胺加入20 mL pH 值為8.5、10 mM 的Tris-HCl 緩沖液配成3 mg/mL 多巴胺溶液，再分別加入40 mL 和10 mL Tris-HCl 緩沖液分別稀釋至1 mg/mL、2 mg/mL。加入羅丹明B 熒光染料，使其終濃度為0.1 mmol/L，避光保存。將離體牙浸泡在配制好的不同濃度多巴胺溶液中，室溫下避光保存24 h取出，取出樣品用蒸餾水超聲清洗2 次，每次5 min，自然干燥以去除沒有結(jié)合的多巴胺。將得到的樣本分為4 組，每組8 顆：0 mg/mL 多巴胺組（空白對照組）、1 mg/mL 多巴胺組、2 mg/mL 多巴胺組、3 mg/mL 多巴胺組。干燥后隨機每組抽取2個牙根，沿冠根方向縱向劈開根管，顯露根管內(nèi)壁后用激光共聚焦顯微鏡觀察根管內(nèi)壁縱剖面多巴胺沉積情況。采用掃描電鏡，在3 kV、2 000 倍條件下觀察牙根縱剖面多巴胺在根管牙本質(zhì)內(nèi)壁的沉積。剩余樣本用紙尖蘸干根管，直到最后一個紙尖干燥為止，進行根管充填。

3 討 論

本研究利用多巴胺預(yù)處理根管內(nèi)壁后，在牙本質(zhì)小管側(cè)壁及管口形成納米薄膜聚多巴胺層，根管充填后，AH-plus 根管糊劑中環(huán)氧苯環(huán)和氨基與聚多巴胺中鄰苯二酚官能團形成共價、非共價結(jié)合

，同時多巴胺也為根管內(nèi)壁表面引入羧基，氨基等活性基團從而提高糊劑的表面能，形成更具有粘接性的界面，促進化學(xué)性結(jié)合。

鮑老師的研究方向是教育財政問題，說得簡單一點，就是研究國家財政在教育上的投入，在公立大學(xué)和民辦大學(xué)以及農(nóng)村教育和城市教育在資源上的分配問題，實際上這也是教育的公平問題，它關(guān)系到我們每一個人的切身利益。

3.1 掃描電鏡形貌分析

1.4.3 萬能試驗機粘接強度推出實驗 將實驗切片就位后使用尖端直徑為1.00 mm、0.80 mm、0.40 mm的工作加載頭，匹配根中6 mm、根尖3 mm 兩個部位的根充物直徑（工作加載頭的直徑最大范圍接觸充填物并避免碰觸根管側(cè)壁），從根尖方至根冠方垂直向持續(xù)加壓，加載速度為0.5 mm/min。加載頭的尖端置于切片根充物的上方，保證其在加壓過程中只與牙膠接觸。

參照Qi H等[15]的方法并作一定調(diào)整，試管中加入1 mL樣液和3 mL pH 8.2的50 mmol/L的Tris-HCl緩沖液，混勻后25 ℃水浴平衡8 min，加入35 mmol/L的鄰苯三酚200 μL，兩者混合均勻，加入8 mmol/L鹽酸1 mL終止反應(yīng)，325 nm處測定吸光值。

3.2 激光共聚焦顯微鏡下滲透面積百分比分析

通過激光共聚焦顯微鏡下測得AH-plus 糊劑滲透面積百分比結(jié)果可以看到，解剖部位對糊劑的滲透面積產(chǎn)生影響，而多巴胺濃度并未對糊劑滲透面積百分比有明顯的影響。這可能是因為多巴胺屬于小分子化合物，沿著牙本質(zhì)小管側(cè)壁沉積納米涂層，因此在一定濃度范圍內(nèi)并不會堵塞牙本質(zhì)小管通道。雖然封閉劑在牙本質(zhì)小管中的滲透范圍是評估其與牙本質(zhì)相互作用的方法之一，但玷污層的去除效果、根管的充填方法、封閉劑的理化性質(zhì)等也會導(dǎo)致滲透深度不同

。本實驗中根中1/3 處滲透面積大于根尖1/3 處，這與牙本質(zhì)小管直徑和分布密度從冠部向根尖部逐漸變小、數(shù)量也逐漸變少有關(guān)，其次由于根管預(yù)備過程，根管預(yù)備器械無法到達(dá)這些狹小區(qū)域，使得玷污層無法完全去除，根尖處牙膠尖充填后易導(dǎo)致根尖糊劑無法滲入而回流到根管中上段部位，滲透入根尖部牙本質(zhì)小管的糊劑減少。本實驗僅選擇了解剖結(jié)構(gòu)相對簡單的單直根管，封閉劑在彎曲或扁平根管中對牙本質(zhì)小管的滲透可能與本實驗不同。封閉劑滲透率可以僅作一個參考現(xiàn)象，不應(yīng)將封閉劑滲透率作為反映臨床結(jié)果的絕對指標(biāo)［15］。

3.3 推出粘接強度

本實驗中，2 mg/mL 多巴胺推出粘接強度均值最高，這可能與掃描電鏡下觀察到的均勻的多巴胺薄膜有關(guān)，AH-plus 根充糊劑的粘接原理是糊劑中環(huán)氧樹脂的環(huán)氧基及氨基與根管壁牙本質(zhì)中的氨基基團交聯(lián)固化形成化學(xué)結(jié)合

，多巴胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)包含了許多官能團，其中鄰苯二酚和氨基兩種特征基團可作為化學(xué)共價鍵結(jié)合位點，其在牙本質(zhì)小管內(nèi)壁沉積后也可以與AH-plus 糊劑化學(xué)結(jié)合，形成粘接界面；研究表明通過掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)用17%EDTA 溶液沖洗根管后，牙本質(zhì)小管的孔徑增大，進而導(dǎo)致大量的管周牙本質(zhì)和管間牙本質(zhì)的喪失，牙本質(zhì)表面的膠原纖維也完全喪失，而多巴胺具有抑制降解膠原纖維的作用，可以提高根管牙本質(zhì)粘接性能

。

本實驗可以觀察到多巴胺在牙本質(zhì)小管內(nèi)并未阻礙AH-plus 糊劑的滲透范圍，使糊劑與多巴胺之間形成更大面積的粘接位點；不同解剖部位對AH-plus 糊劑粘接強度結(jié)果有顯著性差異，根中1/3高于根尖1/3，這與此類研究得到結(jié)果一致，根尖1/3一直被認(rèn)為是較難清理的部位，同時根尖1/3 處牙本質(zhì)小管的數(shù)量和直徑較低，封閉性能有限

。

臨床上環(huán)氧樹脂類材料的聚合收縮一直有待解決

，受貽貝濕粘接現(xiàn)象啟發(fā)的多巴胺化合物因具有獨特的性能，在牙科領(lǐng)域逐步受到青睞。但其臨床轉(zhuǎn)化仍存在兩個實際問題有待解決，即鄰苯二酚基團的氧化保護和臨床應(yīng)用的可行性

。本實驗發(fā)現(xiàn)多巴胺可提高AH-plus 糊劑的粘接性能，鑒于實驗條件與口腔真實環(huán)境有差異，未來仍需繼續(xù)探究其在齒科領(lǐng)域的應(yīng)用價值及機制。

【

】 Xu ZY peformed the experiments, analyzed the data and wrote the article. Zhang X revised the article. Pan S designed the study. All authors read and approved the final manuscript as submitted.

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