黏質(zhì)沙雷氏菌與農(nóng)藥混配增效作用

梁佳梅 鄒 悅 蘇貴洪 張 樂(lè) 吳正偉

（廣東海洋大學(xué)濱海農(nóng)業(yè)學(xué)院 廣東湛江 524088）

草地貪夜蛾（Spodoptera frugiperda）屬鱗翅目（Lepidoptera）夜 蛾 科（Noctuidae），是 一 種 具 有 多 食性、飛行能力強(qiáng)、適生性廣、無(wú)滯育現(xiàn)象等特點(diǎn)，分布于世界各國(guó)的遷飛性農(nóng)業(yè)重大害蟲[1]。其寄主植物達(dá)73科350多種，主要為害谷類和禾本科，其中包括多種經(jīng)濟(jì)作物，如玉米、水稻、甘蔗、煙草等[2]。

我國(guó)對(duì)草地貪夜蛾的防治經(jīng)驗(yàn)較少，為了能有效地控制該蟲的擴(kuò)散，目前以化學(xué)防治為主。由于高頻率使用或大量使用化學(xué)農(nóng)藥，草地貪夜蛾種群已產(chǎn)生不同程度的抗藥性[3]，同時(shí)帶來(lái)了環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留的問(wèn)題。因此，探索新的草地貪夜蛾防治方法，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全具有重要意義。生物農(nóng)藥具有不易產(chǎn)生抗藥性的特點(diǎn)。黏質(zhì)沙雷氏菌作為一種昆蟲病原微生物，已經(jīng)有多年的研究。單一使用黏質(zhì)沙雷氏菌相較于化學(xué)殺蟲劑效率低、作用慢，極大限制了該菌的應(yīng)用。黏質(zhì)沙雷氏菌與殺蟲劑混配使用防治草地貪夜蛾的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。為此，本研究以草地貪夜蛾2齡幼蟲為試驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)測(cè)定黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9與10種農(nóng)藥單用及混配對(duì)草地貪夜蛾的殺蟲活性，確定菌藥混用對(duì)草地貪夜蛾的聯(lián)合作用，為科學(xué)防治草地貪夜蛾提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源和菌株

草地貪夜蛾種群采自湛江玉米地，經(jīng)室內(nèi)多代飼養(yǎng)，挑選大小一致、健康的2齡幼蟲作為試驗(yàn)蟲源。供試菌株為廣東海洋大學(xué)海洋微生物實(shí)驗(yàn)室保存的黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9[4]。

1.2 供試藥劑

本試驗(yàn)選用10種殺蟲劑：6%乙基多殺菌素懸浮劑（SC），美國(guó)陶氏益農(nóng)公司；0.5%苦參堿水劑（WG），河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司；20%蟲酰肼懸浮劑（SC），山西奇星農(nóng)藥有限公司；1.8%阿維菌素乳油（EC），河北金德倫生化科技有限公司；10%蟲螨腈懸浮劑（SC），巴斯夫歐洲公司；32 000 IU/mg蘇云金桿菌可濕性粉劑（WP），武漢科諾生物科技股份有限公司；10億PIB/mL斜紋夜蛾核型多角體病毒懸浮劑（SC），湖南澤豐農(nóng)化有限公司；10%虱螨脲懸浮劑（SC），山東中石藥業(yè)有限公司；5%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽乳油（EC），山東中石藥業(yè)有限公司；90%殺蟲單可溶粉劑（SP），安徽華星化工有限公司。

1.3 黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9及殺蟲劑對(duì)草地貪夜蛾的殺蟲活性測(cè)定

黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9菌液通過(guò)接種2%種子液在30℃、200 r/min的搖床上發(fā)酵5 d獲得，在NA培養(yǎng)皿涂抹計(jì)數(shù)，用無(wú)菌的0.01%吐溫80將發(fā)酵液稀釋為濃度1.00×108CFU/mL備用。乙基多殺菌素、苦參堿、蟲酰肼、阿維菌素、蟲螨腈、蘇云金桿菌、斜紋夜蛾核型多角體病毒、虱螨脲、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（簡(jiǎn)稱甲維鹽）、殺蟲單10種殺蟲劑用無(wú)菌的0.01%吐溫80按10倍梯度稀釋104、105、106倍備用。殺蟲活性測(cè)定采用葉片浸漬法：將草地貪夜蛾2齡幼蟲單頭置于開孔的2 mL離心管進(jìn)行饑餓處理2 h，玉米葉片在稀釋后的菌液或藥液中充分浸泡10 s，待自然晾干進(jìn)行喂食，設(shè)無(wú)菌的0.01%吐溫80為對(duì)照，各處理3次重復(fù)，每重復(fù)10頭。飼毒后的蟲子置于28℃恒溫箱中，每2 d更換一次處理過(guò)的玉米葉片。統(tǒng)計(jì)3 d后的校正死亡率。

死亡率（%）=死亡蟲數(shù)/試驗(yàn)蟲數(shù)×100。

校正死亡率（%）=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）×（1-對(duì)照組死亡率）×100。

用SPSS 21.0進(jìn)行差異顯著性分析。進(jìn)行各處理校正死亡率的方差分析時(shí)，先對(duì)百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行平方根反正弦轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行方差分析和Duncan法多重比較。

1.4 黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9與農(nóng)藥混配的殺蟲活性測(cè)定

選擇校正死亡率不足100%的農(nóng)藥濃度進(jìn)行混配試驗(yàn)。先與黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9進(jìn)行1∶1體積比混合，按上述葉片浸液法生測(cè)。通過(guò)共毒因子法來(lái)評(píng)價(jià)黏質(zhì)沙雷氏菌與農(nóng)藥混配兩者之間是否存在增效作用。

共毒指數(shù)=（實(shí)測(cè)死亡率－理論死亡率）/理論死亡率×100。

實(shí)測(cè)死亡率為混配的校正死亡率，理論死亡率=單用藥劑A的校正死亡率×藥劑A在混合藥劑的所占比（%）+單用藥劑B的校正死亡率×藥劑B在混合藥劑的所占比（%）。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：共毒指數(shù)≥20、-20～20、≤-20分別表示增效、相加和拮抗作用。選擇增效作用且共毒指數(shù)最高的殺蟲劑繼續(xù)進(jìn)行1∶9、3∶7、7∶3、9∶1不同比例混配試驗(yàn)。記錄每日死亡蟲數(shù)和試蟲生命活動(dòng)，計(jì)算各處理1 d、3 d、5 d對(duì)草地貪夜蛾的校正死亡率和共毒指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9及10種農(nóng)藥單劑和混配后的殺蟲效果

采用葉片浸漬法喂食黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9后1 d、3 d、5 d、7 d，校正死亡率為6.67%～42.59%，而在處理3 d時(shí)只有7.04%。10種殺蟲劑單劑的校正死亡率在51.58%～96.67%，其中甲維鹽最高且濃度最低，但與乙基多殺菌素、蟲螨腈、斜紋夜蛾核型多角體病毒和殺蟲單差異不顯著，相對(duì)最為高效。按照等體積混配后，乙基多殺菌素、蘇云金桿菌、斜紋夜蛾核多角體病毒、虱螨脲和甲維鹽均表現(xiàn)出增效作用并且甲維鹽的共毒指數(shù)最高（表1）。

表1 黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9及10種農(nóng)藥單劑和混配后的殺蟲效果

2.2 甲維鹽和黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9不同比例混配的殺蟲效果

進(jìn)一步的黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9與甲維鹽不同比例混配試驗(yàn)中，混配比7∶3、3∶7、1∶9處理后5 d的校正死亡率均達(dá)到100%且高于甲維鹽單劑校正死亡率（96.67%）。混配比9∶1的處理校正死亡率較低且明顯低于其他配比。在處理后1 d，各混配比均表現(xiàn)為拮抗作用。在處理后3 d、5 d，混配比1∶9、3∶7、5∶5、7∶3對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲均有增效作用，共毒指數(shù)最大的均為混配比7∶3的處理，分別達(dá)到130.33和70.03（表2）。

表2 黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9和甲維鹽不同比例混配殺蟲效果

3 結(jié)論與討論

昆蟲病原微生物與低劑量化學(xué)藥劑混配具有提高昆蟲病原微生物的藥效、縮短作用時(shí)間等特點(diǎn)，發(fā)揮協(xié)同增效作用[5]。黏質(zhì)沙雷氏菌產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶等能破壞昆蟲的腸圍食膜、上皮等結(jié)構(gòu)[6-7]，對(duì)昆蟲的消化系統(tǒng)和腸道菌群造成影響。有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，生物農(nóng)藥的混配制劑比單一使用生物農(nóng)藥對(duì)草地貪夜蛾的防治效果更好[8]，通過(guò)室內(nèi)生測(cè)和田間試驗(yàn)全面測(cè)定蘇云金桿菌G033A分別與5%甲維鹽、200 g/L氯蟲苯甲酰胺和15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺減量75%、50%和25%及常規(guī)用量聯(lián)合使用對(duì)草地貪夜蛾的防治效果，結(jié)果表明，不僅草地貪夜蛾的死亡率明顯上升，而且顯著提高了低劑量化學(xué)農(nóng)藥的殺蟲速率。在生產(chǎn)實(shí)踐中具有減少化學(xué)農(nóng)藥施用同時(shí)提升防治效果的潛力。

本試驗(yàn)中，草地貪夜蛾取食1.00×108CFU/m L的黏質(zhì)沙雷氏菌后3 d，死亡率僅為7.04%，胃毒活性很慢。但將其與乙基多殺菌素、蘇云金桿菌、斜紋夜蛾核多角體病毒、虱螨脲和甲維鹽混配均表現(xiàn)出增效作用且甲維鹽增效最高。表明黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9與殺蟲劑混配使用可提高對(duì)草地貪夜蛾的殺蟲活性。分析其原因可能有兩點(diǎn)：一方面可能是殺蟲劑降低了害蟲對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌的抵抗力，從而加快了該菌的感染速度；另一方面則可能是黏質(zhì)沙雷氏菌感染害蟲后，該菌及其代謝產(chǎn)物可影響蟲體內(nèi)的相關(guān)酶系，如解毒代謝相關(guān)的蛋白[9]。再者，喂食黏質(zhì)沙雷氏菌后可能破壞蟲體內(nèi)微生物種群多樣性，進(jìn)而導(dǎo)致害蟲自身抗逆性下降，從而影響了害蟲對(duì)殺蟲劑的敏感程度。已有報(bào)道顯示，消除棉鈴蟲部分中腸微生物可對(duì)Cry1Ac的毒力產(chǎn)生影響[10]。

在與甲維鹽的混配試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)混配比7∶3時(shí)，共毒指數(shù)最高，處理5 d校正死亡率達(dá)到100%。由于本試驗(yàn)是在室內(nèi)穩(wěn)定的環(huán)境下進(jìn)行的，而田間環(huán)境中的溫度、濕度、光照等因子顯然會(huì)影響實(shí)際效果。因此，田間環(huán)境下黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9與甲維鹽的混配效果如何，還需進(jìn)一步探究。本研究證實(shí)了黏質(zhì)沙雷氏菌ZJ9可以與乙基多殺菌素、蘇云金桿菌、斜紋夜蛾核多角體病毒、虱螨脲和甲維鹽等殺蟲劑聯(lián)合使用，且與甲維鹽7∶3混配時(shí)室內(nèi)效果最好。