野生沙杵菇菌株篩選試驗(yàn)

鮑紅春，賈博淵，李小雷，何瑞超，李 慧，賈曉東，賈學(xué)宇，吳小燕 ( .內(nèi)蒙古自治區(qū)園藝研究院，內(nèi)蒙古呼和浩特 000；.內(nèi)蒙古漠菇生物科技有限公司，內(nèi)蒙古鄂爾多斯 07000；.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特 0005 )

沙杵菇[(JIA)]又稱“沙棒槌菇”“沙錘子菇”,隸屬于菌傘綱，傘菌亞目，蘑菇科，鬼傘屬。因其形似沙槌而得名，是一種珍稀的藥食兼用野生真菌，廣泛分布于內(nèi)蒙古鄂爾多斯市準(zhǔn)格爾旗部分地區(qū)，在雨后的沙蒿地、草沙地、楊樹林及沙漠腐草灘地較為常見。近年來由于野生蘑菇含有多種氨基酸及生物活性酶類，有助消化、降血壓、抗腫瘤、降血脂等功效，使其備受人們青睞。野生沙杵菇因其綠色無污染、味道鮮美、營養(yǎng)豐富，深受人們喜愛，市場(chǎng)需求越來越大，由于利益的驅(qū)使，導(dǎo)致人們掠奪性采摘，使得當(dāng)?shù)卣滟F野生沙杵菇資源瀕臨滅絕。目前關(guān)于沙杵菇人工栽培研究甚少，因此，選育質(zhì)優(yōu)、高產(chǎn)新菌種進(jìn)行人工栽培，是保護(hù)野生沙杵菇資源的一項(xiàng)有效措施，對(duì)當(dāng)?shù)匾吧秤镁Y源的開發(fā)利用將具有巨大意義。

野生菌株是優(yōu)良菌種選育和馴化的基礎(chǔ)材料之一。筆者以采集到的野生沙杵菇菌絲團(tuán)與菌蕾為試驗(yàn)材料，經(jīng)組織分離得到菌株，對(duì)分離菌株進(jìn)行菌絲生長情況觀察評(píng)估，并對(duì)2個(gè)優(yōu)選菌株進(jìn)行栽培試驗(yàn)，以期選育出適合大面積推廣的優(yōu)良菌株，為最終實(shí)現(xiàn)沙杵菇人工規(guī)?；耘嗟於ɡ碚摶A(chǔ)。

1 材料與方法

試驗(yàn)所用的沙杵菇菌絲團(tuán)與菌蕾，采集于內(nèi)蒙古鄂爾多斯市準(zhǔn)格爾旗布爾陶亥鄉(xiāng)爾圪濠村附近沙蒿地，經(jīng)組織分離培養(yǎng)得到原始菌株。

母種采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL)；原種培養(yǎng)料配方：玉米秸絲35.0%，玉米芯35.0%，羊糞28.5%，石膏粉1.5%，含水量50.0%～55.0%；栽培料配方：玉米秸30.0%，玉米芯30.0%，沙蒿粉10.0%，羊糞26.2%，石膏粉2.0%，石灰粉1.8%，含水量65.0%，pH 7.5～8.0。

野生沙杵菇菌絲體的分離。將野外采集的沙杵菇菌絲團(tuán)和菌蕾置于0～5 ℃條件下低溫處理。待菌絲團(tuán)緊縮致密，菌蕾變小而圓整、質(zhì)硬時(shí)，取出28個(gè)菌絲團(tuán)，分別編號(hào)為SHCHG(S)01～SHCHG(S)28， 43個(gè)菌蕾編號(hào)為SHCHG(L)01～SHCHG(L)43。迅速清除干凈外圍的腐草土，分別放入無菌培養(yǎng)皿中。在超凈工作臺(tái)上，先用0.1%的HgCl溶液消毒10 min，再用無菌水沖洗，然后剝離外圍物質(zhì)，直到露出菌絲團(tuán)的核心和單一菌蕾，再用無菌水反復(fù)沖洗，剝?nèi)〖s1 mm組織分別接入裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。在溫度18 ℃、濕度80%～85%的生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)150 h，備用。

野生沙杵菇再生菌絲體的提純。從28個(gè)菌絲團(tuán)培養(yǎng)皿中，通過趨中優(yōu)選原則，選取3組。為防止菌絲體感染病毒，在培養(yǎng)基中加入0.35‰的5%EDTA抑毒劑脫毒，采用先端菌絲體分離提純菌絲，變換培養(yǎng)基復(fù)壯菌種，利用“適培基”馴化。選取較好的菌絲體轉(zhuǎn)接到試管斜面中。同樣，從43個(gè)菌蕾培養(yǎng)皿中選取10組較好菌絲體進(jìn)行轉(zhuǎn)接。

原種、栽培種制作和出菇試驗(yàn)。按上述配方配料，將230 g原種發(fā)酵料裝入250 mL三角瓶，常壓滅菌后接入已活化的 PDA菌種。栽培種發(fā)酵料采用17 cm×33 cm×0.06 cm聚丙烯袋。常溫滅菌后接種，置于25 ℃生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀測(cè)菌絲形態(tài)特征、長勢(shì)，比較各處理菌絲生長速度。出菇試驗(yàn)采用內(nèi)徑規(guī)格為42 cm×42 cm×18 cm 塑料筐，試驗(yàn)以優(yōu)選的2個(gè)菌株進(jìn)行原種培養(yǎng)及出菇比較試驗(yàn)，每個(gè)處理設(shè)10個(gè)重復(fù)。設(shè)置3個(gè)處理，分別為T100%未經(jīng)堆腐發(fā)酵的培養(yǎng)料，T2發(fā)酵料與未發(fā)酵料各占50%，T3 100%經(jīng)堆腐發(fā)酵的培養(yǎng)料。

菌絲長勢(shì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：5分為菌絲長勢(shì)濃密，均勻；4分為菌絲長勢(shì)濃密，較均勻；3分為菌絲長勢(shì)較濃密，較均勻；2分為菌絲長勢(shì)較稀疏，較均勻；1分為菌絲長勢(shì)稀疏，不均勻。

2 結(jié)果與分析

在同種平板PDA培養(yǎng)基上，供試菌株菌絲均能夠正常生長，但各菌株菌絲顏色、菌絲濃密度、均勻度、菌絲長勢(shì)存在一定差異。通過觀察比較，采用趨中優(yōu)選原則，從28個(gè)菌絲團(tuán)中，優(yōu)選出3個(gè)菌株，分別為SHCHG(S)02、SHCHG(S)09、SHCHG(S)23。 同樣從43個(gè)菌蕾中，優(yōu)選出10個(gè)菌株，分別為SHCHG(L)07、SHCHG(L)09、SHCHG(L)22、SHCHG(L)24、SHCHG(L)25、SHCHG(L)31、SHCHG(L)34、SHCHG(L)36、SHCHG(L)40、SHCHG(L)42。13個(gè)菌株的菌絲生長情況見表1，SHCHG(S)02與SHCHG(L)07菌株菌絲濃白粗壯、均勻濃密、長勢(shì)強(qiáng)，經(jīng)過反復(fù)優(yōu)選確定SHCHG(S)02和SHCHG(L)07為最佳菌株。

表1 部分野生沙杵菇菌株的菌絲在PDA培養(yǎng)皿中的生長情況(18 ℃)

從表2可以看出，在相同處理下SHCHG(J)02菌株菌絲生長速度均優(yōu)于SHCHG(L)07。2個(gè)菌株菌絲生長速度為5.0～7.5 mm/d。在T3處理下SHCHG(J)02和SHCHG(L)07菌株菌絲萌發(fā)時(shí)間最短，分別為20和21 h；菌絲生長速度最快，為7.5和6.5 mm/d。T2處理下菌絲生長情況次之，T1處理下2個(gè)菌株菌絲萌發(fā)時(shí)間長，生長速度慢，菌絲體長勢(shì)弱。由此可知，在經(jīng)過堆腐發(fā)酵的栽培料上，2個(gè)沙杵菇菌株表現(xiàn)為生長速度快，菌絲體粗壯且濃白、長勢(shì)強(qiáng)；未經(jīng)堆腐發(fā)酵的培養(yǎng)料，不利于野生沙杵菇菌絲正常生長。

表2 2個(gè)菌株菌絲體在不同栽培料中的生長情況Table 2 The mycelium growth of the 2 strains in different cultivated cultures

由表3可知，2個(gè)沙杵菇菌株在栽培料3個(gè)處理中均出菇。在T3處理下SHCHG(J)02菌株岀菇所需時(shí)間為66 d，平均每筐產(chǎn)量為2 387 g，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為39.78%；SHCHG(L)07菌株岀菇所需時(shí)間為71 d，平均每筐產(chǎn)量為2 123 g，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為35.38%，均優(yōu)于其他2個(gè)處理。在T3、T1處理下，SHCHG(J)02菌株平均每筐產(chǎn)量、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均優(yōu)于SHCHG(L)07；T2處理下SHCHG(L)07菌株平均每筐產(chǎn)量、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率則優(yōu)于SHCHG(J)02。由此可知，2個(gè)菌株在堆腐發(fā)酵的栽培料上栽培均表現(xiàn)為出菇所需時(shí)間短、產(chǎn)量高、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率高；在未經(jīng)堆腐發(fā)酵的栽培料上栽培出菇晚、產(chǎn)量低、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率低。

3 結(jié)論與討論

在食用菌生產(chǎn)中，菌種的作用是首要的，其質(zhì)量直接影響食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而菌絲生長特性是衡量菌種質(zhì)量的重要指標(biāo)，菌絲生長迅速、長勢(shì)強(qiáng)且濃密的食用菌菌種是實(shí)際生產(chǎn)中優(yōu)質(zhì)菌株的表現(xiàn)之一。該試驗(yàn)采用組織分離法得到的71個(gè)菌株，通過比較各菌株菌絲體的菌絲顏色、菌絲濃密度、均勻度、菌絲長勢(shì)，優(yōu)選出10個(gè)菌株，對(duì)10個(gè)菌株進(jìn)行反復(fù)優(yōu)選，最終確定SHCHG(S)02和SHCHG(L)07為最佳菌株。SHCHG(S)02和SHCHG(L)07與其他菌株相比菌絲生長最佳，萌發(fā)時(shí)間短，菌絲生長濃密且均勻，長勢(shì)評(píng)分為5分，是具有開發(fā)潛力的沙杵菇優(yōu)良菌株，可作為遺傳改良目標(biāo)菌株，并進(jìn)一步觀察鑒定，以培育成產(chǎn)量高、質(zhì)優(yōu)的沙杵菇菌株。

表3 沙杵菇不同菌株的產(chǎn)量比較Table 3 Comparison of yields of different strains of Coprinus comatus

筆者結(jié)合多年試驗(yàn)結(jié)果及該地區(qū)的原料特點(diǎn)，以玉米芯、玉米秸、沙蒿粉、羊糞為主料，這些原料在當(dāng)?shù)刭Y源豐富，成本低廉，而且非常適合沙杵菇栽培。該試驗(yàn)以玉米秸30%、玉米芯30%、沙蒿粉10%、羊糞26.2%、石膏粉2.0%、石灰粉1.8%為配方，同種原料設(shè)置3個(gè)不同的堆腐發(fā)酵處理。結(jié)果表明，100%熟料栽培2個(gè)沙杵菇菌株生長勢(shì)強(qiáng)，生長速度快，菌絲體粗壯且濃白，產(chǎn)量高，岀菇時(shí)間短，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率高。