GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性與缺血性腦卒中相關(guān)性研究

徐秀芝　祝鴻雁

摘要：目的：探討谷胱甘肽過氧化物酶（GPX-1）基因Pro198Leu多態(tài)性與缺血性腦卒中的相關(guān)性。方法：選取我院神經(jīng)內(nèi)科2020年6月～2021年6月收治的缺血性腦卒中患者100例作為觀察組，依據(jù)是否合并糖尿病分為合并糖尿病組（合并組）與未合并糖尿病組（未合并組），選取入院體檢的健康人群60例作為對照組，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-HFLP）技術(shù)檢測其GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性并對比各組Pro198Leu多態(tài)性基因型與等位基因分布情況。結(jié)果：觀察組與對照組Pro198Leu 多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。合并組、未合并組間Pro198Leu 多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險與GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性相關(guān)，與是否合并糖尿病無關(guān)。

關(guān)鍵詞：谷胱甘肽過氧化物酶;基因Pro198Leu多態(tài)性;缺血性腦卒中;糖尿病

缺血性腦卒中（acute ischemic stroke，AIS） 是臨床常見卒中類型，其發(fā)病率、致死率和致殘率在世界范圍內(nèi)均處于較高水平，嚴(yán)重危害人類生命安全。近年來，受飲食習(xí)慣改變、生活壓力增大和人口老齡化加劇等諸多因素影響，AIS的患病率呈明顯升高態(tài)勢，防控形勢日益嚴(yán)峻。如何有效降低AIS的發(fā)病率，改善患者生存質(zhì)量是當(dāng)前研究的熱點問題。氧化應(yīng)激是AIS發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，其中谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase-1，GPX-1）是一種重要的抗氧酶，可催化脂質(zhì)過氧化物、氨基酸氫過氧化物、蛋白質(zhì)的還原反應(yīng)發(fā)揮抗氧化作用。既往研究證實GPX-1的活性與多種心血管疾病密切相關(guān)，且受多種因素調(diào)節(jié)，GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性能通過影響紅細(xì)胞內(nèi)硒含量最終改變氧化應(yīng)激水平。但目前GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性與AIS的關(guān)系仍不明確。本研究旨在探討GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性與缺血性腦卒中的相關(guān)性，以期為為研究缺血性腦卒中的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制提供更多依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料? 選取我院神經(jīng)內(nèi)科2020年6月～2021年6月收治的缺血性腦卒中患者100例作為觀察組，其中男52例，女56例，年齡42～80歲，平均（54.69±9.48）歲。依據(jù)是否合并糖尿病分為合并糖尿病組（合并組，32例）與未合并糖尿病組（未合并組，68例），糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)1999年WHO發(fā)布的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》中診斷標(biāo)準(zhǔn)，且有明確AIS臨床癥狀或體征;②入院時均意識清楚，入院時間均發(fā)病至入院2周內(nèi);③經(jīng)頭顱CT排除腦出血。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;②病情危重、伴失語或存在嚴(yán)重認(rèn)知障礙者;③既往或當(dāng)前伴精神疾病（抑郁癥、精神分裂癥、癲癇等）者。選取入院體檢的健康人群60例作為對照組，其中男32例，女28例，年齡45～80歲，平均（53.98±9.62）歲。該研究經(jīng)醫(yī)學(xué)研究倫理委員會審核同意，入選者簽署知情同意書。

1.2 研究方法? 采用PCR-HFLP技術(shù)檢測各組GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性并對比Pro198Leu多態(tài)性基因型與等位基因分布情況。實驗步驟：制備基因組DNA→PCR擴(kuò)增目的基因片→擴(kuò)增產(chǎn)物限制性內(nèi)切酶→酶切產(chǎn)物電泳測序（將酶切結(jié)果顯示為不同基因型并各取2分，行PCR擴(kuò)增，每份總體系20μl，共6份，后聯(lián)同引物測序）。

1.3 ?統(tǒng)計學(xué)方法? 采用SPSS20.0分析，計量資料呈正態(tài)分布時以（）表示，組間采用t檢驗，不符合正態(tài)分布時采用中位數(shù)和四分位數(shù)表示，組間比較采用MannWhitney U檢驗，分類計數(shù)資料以例數(shù)及百分比表示，采用χ檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1GPX-1基因Pro198Leu測序結(jié)果? GPX-1基因Pro198Leu測序結(jié)果顯示在觀察組中檢出CC基因型56例，CT基因型33例，TT基因型11例，在對照組中檢出CC基因型46例，CT基因型9例，TT基因型5例。

2.2觀察組與對照組基因型及等位基因頻率比較觀察組與對照組Pro198Leu 多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3合并組與未合并組基因型及等位基因頻率比較合并組、未合并組間Pro198Leu 多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3 討論

AIS發(fā)病與多種因素有關(guān)，其具體發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。結(jié)合臨床實踐我們發(fā)現(xiàn)，部分病程較長病情較差者未并發(fā)并發(fā)癥，但病程較短且病情較好者卻在早期出現(xiàn)相關(guān)并發(fā)癥，提示基因調(diào)控可能在AIS發(fā)病過程中發(fā)揮作用。現(xiàn)有研究認(rèn)為遺傳、環(huán)境等因素可能在AIS發(fā)病中發(fā)揮重要作用，其中氧化應(yīng)激可能與AIS發(fā)病密切相關(guān)，對抗氧化相關(guān)基因的研究可能為AIS的治療中提供新的方向。

目前人類已發(fā)現(xiàn)5種GPX同工酶，其中GPX-1（細(xì)胞質(zhì)GPX）、GPX-4被證實與多種慢性疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。GPX-1是一種關(guān)鍵的抗氧化酶，在同工酶超家族中分布最為廣泛。正常情況下人體內(nèi)氧化代謝會產(chǎn)生一定量的活性氧自由基，GPX等抗氧化酶系統(tǒng)能通過清除活性氧自由基使其處于相對較低水平。但在特定病理狀態(tài)下會破壞體內(nèi)氧化與抗氧化平衡，誘發(fā)硬化應(yīng)激反應(yīng)，造成機(jī)體組織及細(xì)胞損傷，提高GPX-1活性可有效抑制細(xì)胞凋亡，減輕DNA損傷。GPX-1基因處于3號染色體斷臂上，包括1個內(nèi)含子與2個外顯子，目前發(fā)現(xiàn)該基因存在多個多態(tài)性位點，其中有關(guān)Pro198Leu的研究相對較多，198位點上包括CC、CT、TT三種等位基因型。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組（AIS患者）與對照組GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性基因型與等位基因分布有明顯差異，其中觀察組CT、TT基因型和T等位基因頻率均明顯高于對照組，提示上述個體可能存在較高的AIS發(fā)生風(fēng)險。本研究還發(fā)現(xiàn)，GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性與AIS患者是否合并糖尿病無關(guān)，GPX-1基因Pro198Leu測序可能在評估AIS是否并發(fā)糖尿病中無明顯作用，其原因可能與GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性受多種因素影響有關(guān)。

綜上所述，缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險與GPX-1基因Pro198Leu多態(tài)性相關(guān)，即GPX-1基因Pro198LeuCT、TT基因型個體者較其他人群更易發(fā)生缺血性卒中，而與是否合并糖尿病無關(guān)。

基金項目：黑龍江省衛(wèi)生健康委課題：課題編號2019-151

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