血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與HBV復(fù)制及肝功能的相關(guān)性研究

彭思璐，劉 冰，劉仁偉，寇 丹，林 劍

四川綿陽四○四醫(yī)院感染科，四川綿陽 621000

肝癌是最常見的惡性腫瘤之一。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國每年肝癌的發(fā)病人數(shù)約為36.6萬，死于肝癌的患者多達(dá)32.1萬[1]，死亡例數(shù)僅次于肺癌，位居惡性腫瘤死亡病例數(shù)的第二位，成為嚴(yán)重威脅我國居民健康和生命的重大疾病之一。各分型的肝癌中，以原發(fā)性肝癌的發(fā)病率最高，約占肝癌的90%以上[2]。研究顯示，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與慢性肝炎密切相關(guān)，其中慢性乙型肝炎(簡稱乙肝)與丙型肝炎(簡稱丙肝)是肝癌最主要的誘因[3]。我國是慢性乙肝發(fā)病率最高的國家，乙型肝炎病毒(HBV)感染-慢性乙肝-肝纖維化-肝硬化-肝細(xì)胞癌是慢性乙肝患者的疾病進(jìn)展過程。乙肝相關(guān)肝癌患者預(yù)后極差，5年生存率低于20%[4]，所以探討慢性乙肝病程進(jìn)展中有價(jià)值的標(biāo)志物對肝功能損傷和肝癌的早期診斷和預(yù)防具有重要意義。本研究對不同疾病進(jìn)程(包括慢性乙肝、肝硬化、肝癌)的患者血清白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、趨化因子-13(CXCL-13)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)水平進(jìn)行了分析，旨在探討上述指標(biāo)對判斷HBV復(fù)制水平及肝功能損傷程度的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2018年8月至2020年8月共97例確診為慢性乙肝的患者納入研究。研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。根據(jù)患者疾病進(jìn)展情況將其分為慢性乙肝組(41例)、肝硬化組(35例)、肝癌組(21例)，各組年齡、性別構(gòu)成比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病程比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。納入研究者對本研究知情同意并簽署知情同意書。

表1 各組一般資料比較

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)2015年版《慢性乙型肝炎防治指南》[5]中HBV感染診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)心、肺、腎功能異常者；(2)近兩周接受過抗菌藥物或免疫調(diào)節(jié)劑治療者；(3)合并其他肝炎病毒感染者；(4)妊娠及哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1分組標(biāo)準(zhǔn) 慢性乙肝組：HBV陽性，肝功能指標(biāo)有1或2項(xiàng)異常，有乏力、腹脹、食欲減退等肝炎癥狀，且未進(jìn)展至肝硬化或肝癌者；肝硬化：HBV陽性，發(fā)生肝硬化者；肝癌：HBV陽性，經(jīng)臨床病理檢查確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌者。

1.3.2檢測指標(biāo) HBV-DNA載量采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)進(jìn)行檢測，儀器為7300型熒光定量分析儀(Applied Biosystem公司)，檢測試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司的HBV-DNA試劑盒。肝功能主要指標(biāo)包括血清總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)，檢測設(shè)備為AU2700全自動(dòng)生化分析儀(日本奧林巴斯株式會(huì)社)及配套試劑。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測IL-1β、CXCL-13、VEGF水平。

2 結(jié) 果

2.1各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA載量比較 各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平，HBV-DNA載量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組間IL-1β、CXCL-13、VEGF水平兩兩比較：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)；各組間HBV-DNA載量兩兩比較：肝癌組、肝硬化組均低于慢性乙肝組(P<0.05)，肝硬化組、肝癌組HBV-DNA載量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA載量比較

2.2各組肝功能主要指標(biāo)比較 各組ALT、AST水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；TBIL、ALP水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組間ALT、AST水平兩兩比較：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組肝功能指標(biāo)比較

2.3IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與HBV-DNA載量及肝功能主要指標(biāo)的關(guān)系 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與AST水平均呈正相關(guān)(r分別為0.429、0.387、0.354，P<0.05)，IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與ALT水平均呈正相關(guān)(r分別為0.411、0.356、0.377，P<0.05)；IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與TBIL、ALP水平、HBV-DNA載量均無相關(guān)性(P>0.05)。見表4。

表4 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與HBV-DNA載量及肝功能主要指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

ALT、AST是反映肝損傷程度的重要指標(biāo)之一，但脂肪肝、藥物等也可能造成肝損傷，同樣會(huì)引起ALT、AST水平升高，所以要判斷HBV對慢性乙肝患者造成的肝損傷及嚴(yán)重程度僅通過ALT、AST水平的檢測是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。研究顯示，肝癌與肝臟慢性炎癥所致的肝細(xì)胞增生和損傷密切相關(guān)，其分子機(jī)制包括抑癌基因失活、癌基因激活及癌細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的過度活化[6-7]。我國是HBV感染率較高的國家，大部分肝癌與HBV感染導(dǎo)致的慢性乙肝有關(guān)。既往研究認(rèn)為，乙肝E抗原(HBeAg)陽性是評價(jià)慢性乙肝患者病毒復(fù)制是否活躍的主要指標(biāo)，但近年來的研究卻發(fā)現(xiàn)，部分HBeAg轉(zhuǎn)陰的患者HBV的復(fù)制并未停止[8-10]。同時(shí)有研究證明，乙肝造成的肝細(xì)胞損傷與HBV復(fù)制無直接關(guān)系[11-12]。本研究顯示，肝硬化組與肝癌組患者HBV-DNA載量明顯低于慢性乙肝組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說明慢性乙肝造成的肝損傷不是由HBV病毒直接造成的，肝細(xì)胞損傷與HBV復(fù)制無直接關(guān)系。同時(shí)本研究顯示，隨著肝臟損傷的加重，HBV-DNA載量逐漸降低。分析肝損傷的原因可能與HBV感染激發(fā)的肝細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)有關(guān)。

IL-1是一種復(fù)雜的多功能炎癥細(xì)胞因子,IL-1β是其中重要的家族成員之一，主要作用是促進(jìn)炎癥反應(yīng)和T、B淋巴細(xì)胞的活化、增殖、分化。近年來國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，IL-1β在多種炎癥疾病及多器官惡性腫瘤中呈高表達(dá)[13-14]。本研究顯示，各組IL-1β水平：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示，IL-1β與AST、ALT均呈正相關(guān)(P<0.05)，提示血清IL-1β超過某一水平可能預(yù)示著肝癌的發(fā)生，但仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。

趨化因子是指一類可吸引白細(xì)胞遷移募集到炎癥部位的分泌蛋白，根據(jù)其結(jié)構(gòu)可分為CXC、CC、C、CX3C 4個(gè)家族。有研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子及其受體在慢性肝炎的初始階段即參與其中，在疾病進(jìn)展后期亦可促進(jìn)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。趨化因子-5(CXCL-5)是調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)的重要因子，PARK等[16]研究發(fā)現(xiàn)，晚期胃癌患者中CXCL-5表達(dá)明顯高于慢性胃炎患者與健康體檢者，但目前CXCL-5在慢性乙肝患者中的表達(dá)情況鮮有報(bào)道。CXCL-13主要分布于肝臟和淋巴結(jié)組織中，是CXCR-5的唯一配體，血清CXCL-l3水平升高可能提示患某種自身免疫性疾病。RIOJA等[17]研究發(fā)現(xiàn)，乙肝疫苗注射后無特異性抗體產(chǎn)生與CXCL-l3的基因多態(tài)性相關(guān)。本研究顯示，各組CXCL-13水平：由高至低依為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示，CXCL-13與AST、ALT均呈正相關(guān)(P<0.05)，提示血清CXCL-13超過某一水平可能預(yù)示著肝癌的發(fā)生，但仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。

VEGF是一種可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的特異性蛋白，主要作用是調(diào)節(jié)和刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，使血管的通透性增加并對血管再生的多個(gè)環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在肝實(shí)質(zhì)與非實(shí)質(zhì)細(xì)胞分裂再生過程中起著重要作用[18-19]，所以理論上講，HBV感染后慢性乙肝病程中血清VEGF水平應(yīng)隨著病情進(jìn)展而升高，但VEGF水平是否可用于判斷慢性乙肝患者肝功能損傷程度尚不清楚。本研究顯示，各組VEGF水平由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示，VEGF表達(dá)與AST、ALT均呈正相關(guān)(P<0.05)。隨著慢性乙肝病程的遷延，肝血管炎癥日益嚴(yán)重，對肝細(xì)胞的破壞加重，肝臟阻塞病變愈加明顯，致肝細(xì)胞進(jìn)一步缺氧缺血，誘導(dǎo)VEGF合成增加并導(dǎo)致新生血管生成。同時(shí)隨著VEGF水平升高，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移能力及血管通透性增加，肝臟組織局部有效血容量下降，缺氧缺血現(xiàn)象進(jìn)一步加重，形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致病情加重和肝癌的發(fā)生。

綜上所述，慢性乙肝患者血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平隨著病情進(jìn)展而升高，與肝細(xì)胞損傷程度相關(guān)，提示IL-1β、CXCL-13、VEGF參與了慢性乙肝病程的進(jìn)展，可作為慢性乙肝病情嚴(yán)重程度判斷指標(biāo)之一，但對判斷HBV復(fù)制水平無指導(dǎo)意義。