血清YWHAΗ與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者部分炎癥因子、骨代謝指標(biāo)及并發(fā)骨質(zhì)疏松的關(guān)系

王明敬，趙宗強(qiáng)，薛艷菊，劉青青

山東省臨沂市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂 276400

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性全身性自身免疫性疾病，以慢性對稱性和進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎，伴關(guān)節(jié)疼痛、僵硬和腫脹為特征，隨著病情進(jìn)展可導(dǎo)致不可逆的關(guān)節(jié)畸形和功能喪失，致殘率高達(dá)50%。據(jù)統(tǒng)計(jì)，RA患者中15%～36%在疾病發(fā)作后2年并發(fā)骨質(zhì)疏松，骨質(zhì)疏松會(huì)增加局部和全身性骨侵蝕，患者骨密度降低，骨折的風(fēng)險(xiǎn)增加[1-2]。炎癥因子可調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞和免疫系統(tǒng)細(xì)胞之間的相互作用，影響骨穩(wěn)態(tài)[3]。酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶激活蛋白eta(YWHAΗ)是一種與RA密切相關(guān)的炎癥蛋白，被認(rèn)為是RA診斷的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[4]。但是，其與RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的關(guān)系鮮有報(bào)道。鑒于此，本研究擬檢測RA患者血清YWHAΗ水平，分析其與部分炎癥因子、骨代謝指標(biāo)及骨質(zhì)疏松的關(guān)系，以期為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年7月至2021年6月本院風(fēng)濕免疫科收治的120例RA患者作為RA組，男38例、女82例，年齡41～62歲、平均(53.12±6.09)歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2010年《類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南》中RA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)年齡18歲以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并干燥綜合征、皮肌炎、系統(tǒng)性血管炎等自身免疫疾??；(2)有甲狀腺功能亢進(jìn)、慢性腎臟疾病、胃腸疾病、營養(yǎng)不良、血液疾病等引起的骨質(zhì)疏松；(3)有血液系統(tǒng)疾?。?4)有關(guān)節(jié)炎、脊柱炎、骨質(zhì)增生。根據(jù)反映疾病活動(dòng)度的28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度(DAS28)評(píng)分[5]將RA患者分為低度組(2.6～<3.3分)39例，中度組(3.3～5.1分)46例，高度組(>5.1分)35例。根據(jù)是否發(fā)生骨質(zhì)疏松將RA患者分為骨質(zhì)疏松組(49例)和無骨質(zhì)疏松組(71例)，骨質(zhì)疏松的診斷符合2017版《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南》[6]。另外，選取57例同期于本院體檢的健康志愿者作為對照組，男19例、女38例，年齡40～65歲、平均(53.39±6.17)歲。RA組和對照組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已經(jīng)獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。受試者及其家屬均對本研究知情同意并簽署同意書。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室檢測 采集上述人群清晨空腹靜脈血3 mL注入促凝管，待血液凝固，以4 ℃ 3 000 r/min離心15 min(半徑10 cm)取血清標(biāo)本于-70 ℃保存，待檢。采用酶鏈免疫吸附法(ELISA)檢測血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、YWHAΗ、Ⅰ型膠原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、骨堿性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前膠原氨基端前肽(PⅠNP)水平，試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司，檢測儀器為Varioskan LUX多功能酶標(biāo)儀(美國賽默飛公司)。

1.2.2骨密度測量 采用美國Hologic Discovery A型雙能X線骨密度儀測定髖關(guān)節(jié)、大轉(zhuǎn)子、股骨頸、胸腰椎的骨密度值，取4處測量部位3次測量結(jié)果的平均值。

1.2.3組間比較 (1)比較RA組和對照組血清YWHAΗ、炎癥因子(IL-6、CRP)、骨代謝標(biāo)志物(β-CTX、B-ALP、PⅠNP和骨密度)。(2)對不同疾病活動(dòng)度RA患者的上述指標(biāo)進(jìn)行比較。(3)比較骨質(zhì)疏松組和無骨質(zhì)疏松組年齡、性別、吸煙史、飲酒史、鈣劑攝入、活性維生素D3攝入、骨折病史、RA病程、疾病活動(dòng)度、糖皮質(zhì)激素持續(xù)時(shí)間、抗風(fēng)濕藥物使用[免疫抑制劑、非甾體抗炎藥、生物制劑、聯(lián)合用藥(兩種或以上)]等臨床資料。

2 結(jié) 果

2.1RA組和對照組血清YWHAΗ、炎癥因子、骨代謝標(biāo)志物水平及骨密度比較 RA組血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于對照組(P<0.05)，B-ALP、PⅠNP水平及骨密度低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 RA組和對照組血清YWHAΗ、炎癥因子、骨代謝標(biāo)志物水平和骨密度指標(biāo)差異

2.2不同疾病活動(dòng)度RA患者血清YWHAΗ、炎癥因子、骨代謝標(biāo)志物水平和骨密度指標(biāo)比較 重度組血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于中度和低度組(P<0.05)，B-ALP、PⅠNP、骨密度低于中度和低度組(P<0.05)；中度組血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于低度組(P<0.05)，B-ALP、PⅠNP、骨密度低于低度組(P<0.05)。見表2。

表2 不同疾病活動(dòng)度RA患者血清YWHAΗ、炎癥因子、骨代謝標(biāo)志物水平和骨密度指標(biāo)差異

2.3RA患者血清YWHAΗ與炎癥因子、骨代謝、骨密度的相關(guān)性 RA患者血清YWHAΗ水平與IL-6、CRP、β-CTX水平呈正相關(guān)(r=0.584、0.506、0.265，P<0.05)，與B-ALP、PⅠNP、骨密度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.595、-0.473、-0.657，P<0.05)。

2.4骨質(zhì)疏松組和無骨質(zhì)疏松組臨床資料及檢測指標(biāo)比較 骨質(zhì)疏松組年齡、RA病程及血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于無骨質(zhì)疏松組(P<0.05)，維生素D3攝入比例、鈣劑攝入比例、B-ALP、PⅠNP、骨密度低于無骨質(zhì)疏松組(P<0.05)，見表3。

2.5RA患者發(fā)生骨質(zhì)疏疏松的危險(xiǎn)因素分析 選取表3中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床資料[年齡、RA病程、維生素D3攝入(賦值：0=是，1=否)、鈣劑攝入(賦值：0=是，1=否)]及YWHAΗ水平作為自變量，以RA患者是否發(fā)生骨質(zhì)疏松為因變量(賦值：0=否，1=是)，經(jīng)Logistic回歸分析得出RA病程長、無鈣劑攝入、高YWHAΗ水平是RA患者發(fā)生骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

表3 RA患者發(fā)生骨質(zhì)疏疏松的單因素分析結(jié)果

表4 RA患者發(fā)生骨質(zhì)疏疏松的Logistic回歸分析

2.6YWHAΗ診斷RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的價(jià)值 YWHAΗ診斷RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的臨界值為2.50 ng/mL，曲線下面積為0.806(95%CI：0.719～0.892)，靈敏度為77.55%，特異度為83.10%，見圖1。

圖1 YWHAΗ診斷RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的ROC曲線圖

3 討 論

RA是最常見的骨骼系統(tǒng)自身免疫性疾病，可發(fā)生于任何年齡，發(fā)病高峰在50～60歲，女性患病率是男性的2～3倍。RA最突出的特征是手、手腕、腳和膝蓋的對稱性疼痛和腫脹，部分患者可出現(xiàn)間質(zhì)性肺病、心包炎、胸腔積液或支氣管擴(kuò)張等其他器官受累表現(xiàn)[7]。骨量流失和骨質(zhì)疏松是RA常見的并發(fā)癥，據(jù)報(bào)道RA患者骨質(zhì)疏松的患病率大約是普通人群的2倍，RA患者中有高骨質(zhì)疏松性骨折風(fēng)險(xiǎn)者的比例達(dá)33.4%～61%，年齡、糖皮質(zhì)激素應(yīng)用劑量和病程是RA患者骨質(zhì)疏松性骨折的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[8]。炎癥反應(yīng)與RA并發(fā)骨質(zhì)疏松密切相關(guān)，滑膜嚴(yán)重炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致白細(xì)胞介素-1(IL-1)、IL-6、腫瘤壞死因子-α等大量細(xì)胞因子產(chǎn)生，腫瘤壞死因子-α刺激核因子kappa B受體活化因子配體(RANKL)的受體激活，RANKL與破骨細(xì)胞前體上的受體結(jié)合，誘導(dǎo)破骨細(xì)胞成熟和活化，導(dǎo)致骨吸收增加，骨生成減少，導(dǎo)致全身性骨丟失[9]。

血清酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶激活蛋白(YWHA)是一組高度保守的蛋白質(zhì)家族，能與激酶、磷酸酶、跨膜受體和轉(zhuǎn)錄因子等多種蛋白質(zhì)靶標(biāo)結(jié)合，參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞增殖、生長和凋亡、代謝調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和壓力反應(yīng)等大量生理過程[10]。有研究顯示，YWHAΗ可促進(jìn)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2的磷酸化，促使肝細(xì)胞癌和瘤內(nèi)血管生長[11]，還可通過與二聚體磷酸絲氨酸結(jié)合，在壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的心力衰竭過程中抑制心臟重塑，減少心肌細(xì)胞凋亡[12]。YWHAΗ在耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中高度表達(dá)并維持細(xì)胞存活，YWHAΗ突變可促使凋亡線粒體功能障礙和細(xì)胞凋亡，引起耳蝸毛細(xì)胞退化和聽覺障礙[13]。YWHAΗ在垂體嗜酸細(xì)胞瘤中高表達(dá)，通過哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路與PRAS40蛋白相互作用參與促進(jìn)垂體嗜酸細(xì)胞瘤的發(fā)生[14]。

YWHAΗ與RA也存在密切關(guān)系，現(xiàn)有報(bào)道顯示，與健康個(gè)體相比，YWHAΗ在RA患者中的表達(dá)水平更高，高水平Y(jié)WHAΗ與自身抗體陽性、關(guān)節(jié)進(jìn)行損傷，更嚴(yán)重的關(guān)節(jié)侵蝕和更差的治療結(jié)果相關(guān)，RA患者血清YWHAΗ濃度高于其他類型的風(fēng)濕性疾病，YWHAΗ可用于區(qū)分早期RA和其他風(fēng)濕性疾病[15-16]。本研究中，RA組血清YWHAΗ水平明顯高于對照組，且YWHAΗ水平隨著RA疾病活動(dòng)度的增加而增高，表明YWHAΗ參與RA發(fā)病和進(jìn)展過程。本研究發(fā)現(xiàn)，RA患者血清YWHAΗ與RA繼發(fā)骨質(zhì)疏松也存在密切關(guān)系，YWHAΗ水平升高是RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)因素之一。有研究報(bào)道，YWHAΗ水平在骨量正常、骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松的RA患者中依次升高，血清YWHAΗ水平與腰椎和股骨的骨密度呈負(fù)相關(guān)[17]，以上結(jié)果表明YWHAΗ增高可能加速RA骨量流失進(jìn)程。分析原因：YWHAΗ是唯一劑量依賴性增強(qiáng)黑色素瘤分化相關(guān)基因5依賴性干擾素β啟動(dòng)子活性的異構(gòu)體，可激活先天免疫反應(yīng)，激活絲裂原活化蛋白激酶/細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路，誘導(dǎo)炎癥基因轉(zhuǎn)錄，促使白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、IL-6釋放，參與關(guān)節(jié)損傷過程[18]，進(jìn)而導(dǎo)致骨量流失和骨質(zhì)疏松的發(fā)生。本研究顯示，YWHAΗ與血清IL-6、CRP、β-CTX水平呈正相關(guān)，與B-ALP、PⅠNP、骨密度呈負(fù)相關(guān)，表明YWHAΗ可能通過誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，影響正常骨代謝，導(dǎo)致骨形成減少和骨吸收增加，引起骨密度下降。

本研究的ROC曲線分析顯示，YWHAΗ診斷RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的曲線下面積為0.806，說明YWHAΗ可作為RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的診斷指標(biāo)。Logistic回歸分析顯示，RA病程、是否攝入鈣劑與RA并發(fā)骨質(zhì)疏松也存在密切關(guān)系，分析原因：RA病程越長，關(guān)節(jié)損傷越嚴(yán)重，骨質(zhì)破損和流失的概率越大。LINDNER等[19]的報(bào)道也指出，病程>10年的RA患者骨質(zhì)疏松患病率在20%～28%，遠(yuǎn)高于病程2年及以下患者。正常鈣平衡和維生素D狀態(tài)對維持骨代謝平衡十分重要，一項(xiàng)薈萃分析表明，補(bǔ)充鈣劑使總骨折風(fēng)險(xiǎn)降低15%，髖部骨折風(fēng)險(xiǎn)降低30%[20]，提示臨床對于病程較長的RA患者應(yīng)注重鈣劑和維生素D3的補(bǔ)充，以降低RA患者并發(fā)骨質(zhì)疏松的概率。

綜上所述，RA患者血清YWHAΗ水平增高，高水平Y(jié)WHAΗ與疾病活動(dòng)度增加、血清炎癥因子水平增加、骨代謝紊亂及骨質(zhì)疏松的發(fā)生均有關(guān)。YWHAΗ可能通過誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)參與RA發(fā)病及骨質(zhì)疏松過程，可作為診斷RA并發(fā)骨質(zhì)疏松的潛在指標(biāo)。