黃顙魚(yú)養(yǎng)殖中遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌的抗生素、生物防治試驗(yàn)

簡(jiǎn)康

（濟(jì)寧市漁業(yè)發(fā)展和資源養(yǎng)護(hù)中心，山東 濟(jì)寧 272115）

黃顙魚(yú)（），俗稱昂刺魚(yú)（黃骨魚(yú)，黃拉丁，嘎魚(yú)），屬鯰形目，鲿科，黃顙魚(yú)屬，是常見(jiàn)的底棲雜食性魚(yú)類，在我國(guó)大部分地區(qū)的天然水體中均有分布。其肉質(zhì)嫩、細(xì)刺少、味鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，在日本、韓國(guó)、東南亞等國(guó)家有巨大的市場(chǎng)，是出口創(chuàng)匯的優(yōu)良品種，也是濟(jì)寧地區(qū)近幾年主要推廣品種之一。黃顙魚(yú)在自然水域中生長(zhǎng)速度緩慢，上市規(guī)格小，無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求,因而黃顙魚(yú)市場(chǎng)售價(jià)高，養(yǎng)殖效益較好。在養(yǎng)殖過(guò)程中，黃顙魚(yú)體常感染遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌，出現(xiàn)“紅頭病”癥狀，給漁業(yè)養(yǎng)殖戶造成了損失。濟(jì)寧市漁業(yè)發(fā)展和資源養(yǎng)護(hù)中心于2015年對(duì)黃顙魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中出現(xiàn)的主要病害“紅頭病”，進(jìn)行了致病菌的鑒定以及抗生素、生物防治試驗(yàn)，旨在解決黃顙魚(yú)“紅頭病”難防難治的問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 池塘

試驗(yàn)地位于濟(jì)寧市水產(chǎn)良種繁育基地3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化池塘，分別為1—3號(hào)，其中3號(hào)池塘為對(duì)照池塘。面積均約0.1 hm，水深均約1.5 m，底泥厚均約25 cm，其進(jìn)水排水方便，水質(zhì)良好，每個(gè)池塘均符合標(biāo)準(zhǔn)化池塘相關(guān)要求。

放魚(yú)前15 d，對(duì)池塘干法清塘消毒，每667 m使用生石灰75～90 kg全池潑灑。每個(gè)池塘中心位置安裝1臺(tái)3 kW的增氧機(jī)。池塘消毒后第2 d，加注水至0.8～1.0 m深；第3 d，按4 500 kg/hm投入發(fā)酵好的腐熟有機(jī)肥，培育水體天然餌料；第10天，加注水至1.5 m深，再用225 kg/hm漂白粉全池潑灑；第16天投放魚(yú)苗。

1.2 苗種放養(yǎng)

試驗(yàn)苗種符合檢驗(yàn)檢疫要求，體格健壯，規(guī)格為20～40 g/尾，無(wú)出血、爛鰓、腸炎等疫病現(xiàn)象。于4月30日投放，密度為30 000尾/hm。

1.3 日常管理

于每日早、中、晚巡塘，認(rèn)真觀察魚(yú)類活動(dòng)、攝食與生長(zhǎng)情況，遇到問(wèn)題及時(shí)處理。池塘每隔10 d注入20～30 cm新水，陰雨悶熱高溫天氣要及時(shí)開(kāi)啟增氧機(jī)。飼料投喂按照“定質(zhì)、定時(shí)、定位、定量”要求，投飼量以1 h內(nèi)吃完為宜。黃顙魚(yú)開(kāi)口料以粒徑2.0～5.0 mm顆粒飼料為主，成魚(yú)料以5.0 mm顆粒飼料為主，一般以浮性餌料為主。池水的pH值為7.0～8.0，以保證魚(yú)類正常生長(zhǎng)。每隔15 d，用300 kg/hm生石灰全池潑灑消毒1次，改善水質(zhì)。

2 試驗(yàn)

2.1 儀器與試劑

恒溫培養(yǎng)箱、無(wú)菌工作臺(tái)、生物顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、18 mm×180 mm試管、高壓滅菌鍋、100～1 000μL移液槍及槍頭。

MHA培養(yǎng)基、0.65%無(wú)菌生理鹽水、PCA培養(yǎng)基。

2.2 魚(yú)種

8月中旬，黃顙魚(yú)魚(yú)種生長(zhǎng)至體長(zhǎng)（12±1）cm時(shí)，可以開(kāi)始池塘內(nèi)致病菌潑灑感染試驗(yàn)。

2.3 菌液灑

2.3.1 潑灑濃度

遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌的菌液在37℃下培養(yǎng)48 h后，經(jīng)過(guò)血球計(jì)數(shù)板稀釋后計(jì)數(shù)，濃度達(dá)到10cfu/mL。每個(gè)池塘各潑灑2 000 mL發(fā)酵后的菌液。

2.3.2 潑灑劑量

菌液潑灑劑量3個(gè)池塘均一樣。

2.3.3 觀察池塘

觀察周期為4周，遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌潑灑到池塘之后，時(shí)刻關(guān)注3個(gè)池塘內(nèi)黃顙魚(yú)的吃食、活動(dòng)、水質(zhì)情況等。池塘中的黃顙魚(yú)如果出現(xiàn)明顯吃食量下降、巡邊獨(dú)游、在水中旋轉(zhuǎn)等現(xiàn)象，需詳細(xì)記錄。發(fā)現(xiàn)死魚(yú)，撈出后進(jìn)行無(wú)害化處理。每次投喂需定量并記錄。

2.3.4 水質(zhì)檢測(cè)

試驗(yàn)開(kāi)始前1 d，檢測(cè)1次池塘水樣，參數(shù)為pH值、水溫、化學(xué)需氧量（COD）、氨氮、亞硝態(tài)氮；感染致病菌之后24 h、96 h各檢測(cè)水質(zhì)1次。魚(yú)體出現(xiàn)明顯癥狀后，每隔5 d檢測(cè)1次，連續(xù)28 d，水質(zhì)采樣依照《水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)》（HJ 494—2009）要求執(zhí)行。

2.3.5 治療方案

菌液灑潑灑3個(gè)池塘，其中3號(hào)池為對(duì)照池塘，潑灑之后不采取任何防治措施，1號(hào)池、2號(hào)池塘在潑灑遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌的同時(shí)進(jìn)行病害防治處理。試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)池塘魚(yú)回捕。

2.3.5.1 生物防治

1號(hào)池塘選擇益生菌（益生菌為實(shí)驗(yàn)室從土壤中分離的枯草芽孢桿菌）進(jìn)行生物防治。開(kāi)始感染時(shí)，池塘同時(shí)潑灑致病菌和益生菌；此后每隔5 d潑灑1次益生菌，持續(xù)4周，每日記錄池塘情況。試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)池塘魚(yú)回捕，記錄捕獲的健康黃顙魚(yú)數(shù)量。

2.3.5.2 抗生素治療

2號(hào)試驗(yàn)池選擇諾氟沙星、恩諾沙星進(jìn)行綜合治療（因?yàn)檫t鈍愛(ài)德華細(xì)菌容易對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性）。藥物拌在飼料中，配比為1 kg飼料中加入1 g恩諾沙星和1 g諾氟沙星。拌藥飼料每天定時(shí)定點(diǎn)投喂，分別于11：00、17：00各投喂1次。發(fā)病癥狀出現(xiàn)之后，治療持續(xù)2周，然后對(duì)魚(yú)類回捕，統(tǒng)計(jì)存活試驗(yàn)魚(yú)數(shù)量，計(jì)算死亡率。

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)果

采用不同處理方案的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，1號(hào)池塘采用益生菌進(jìn)行生物防治，發(fā)病魚(yú)最少；2號(hào)池塘在發(fā)病時(shí)及時(shí)采取敏感抗生素治療，疫情也得到了有效控制；不采取任何防治措施的3號(hào)池塘發(fā)病情況嚴(yán)重。

表1 采用不同處理方案的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)果

3.2 池塘水質(zhì)參數(shù)

水體pH值、水溫、COD值的監(jiān)測(cè)持續(xù)了4周，測(cè)定了7次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水體pH值沒(méi)有明顯變化，池塘水溫維持在25～26℃，也沒(méi)有明顯變化。1號(hào)池塘的COD值為0.25～0.53 mg/L，隨時(shí)間的變化持續(xù)降低；2號(hào)池塘COD值為0.40～0.51 mg/L，先降低后逐步升高。3號(hào)池塘COD值為0.52～0.76 mg/L，隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，反映出水體在噴灑致病菌后，水質(zhì)有惡化趨勢(shì)，見(jiàn)表2。

表2 不同處理方案的池塘COD監(jiān)測(cè)結(jié)果 mg/L

不同處理方案的池塘氨氮監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，1號(hào)池7次測(cè)定的氨氮值為1.77～0.98 mg/L，呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)；2號(hào)池的氨氮值為1.72～1.99 mg/L，呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)；3號(hào)池氨氮為1.74～2.57 mg/L，升高幅度大于2號(hào)池。

表3 不同處理方案的池塘水質(zhì)氨氮監(jiān)測(cè)結(jié)果 mg/L

不同處理方案的池塘水質(zhì)亞硝態(tài)氮監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，1號(hào)池的亞硝態(tài)氮值隨時(shí)間的變化持續(xù)降低，從0.220 mg/L降低到0.091 mg/L。2號(hào)池亞硝態(tài)氮值變化較小。3號(hào)池塘亞硝態(tài)氮值隨時(shí)間變化略有升高，水質(zhì)有惡化趨勢(shì)。

表4 不同處理方案的池塘水質(zhì)亞硝態(tài)氮監(jiān)測(cè)結(jié)果 mg/L

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后黃顙魚(yú)回捕結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可見(jiàn)，1號(hào)池塘無(wú)發(fā)病情況，且捕撈率達(dá)到94.2%；2號(hào)池塘回捕率也達(dá)到了83.3%；3號(hào)池塘回捕率只有19.6%，回捕率遠(yuǎn)低于1號(hào)池塘、2號(hào)池塘，差距非常明顯。

表5 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后黃顙魚(yú)回捕結(jié)果

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果證明，1號(hào)池噴灑的枯草芽孢桿菌能夠明顯抑制遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌的生長(zhǎng)，而且在池塘感染試驗(yàn)過(guò)程中，明顯抑制池塘內(nèi)黃顙魚(yú)的發(fā)病。2號(hào)池塘在出現(xiàn)發(fā)病癥狀之后第一時(shí)間進(jìn)行抗生素的拌料投喂，雖然有魚(yú)發(fā)病死亡，但是經(jīng)過(guò)25 d的治療，魚(yú)未發(fā)病死亡，基本遏制了遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌造成的損失。3號(hào)池塘為對(duì)照池塘，感染之后出現(xiàn)大批持續(xù)死亡現(xiàn)象，說(shuō)明在池塘內(nèi)的遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌濃度在持續(xù)增長(zhǎng)，黃顙魚(yú)自身的免疫力可能降低，池塘持續(xù)有病魚(yú)、死魚(yú)出現(xiàn)。

池塘的COD、氨氮、亞硝態(tài)氮3個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的變化趨勢(shì)相近，均表現(xiàn)為1號(hào)池水質(zhì)改善，2號(hào)池略有變化，3號(hào)池水質(zhì)惡化的趨勢(shì)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌對(duì)致病菌生長(zhǎng)具有拮抗作用，能有效預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物病害發(fā)生。

枯草芽孢桿菌菌體生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的許多活性物質(zhì)，如枯草菌素、制霉菌素、多黏菌素和短桿菌肽等，對(duì)致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用。

5 結(jié)語(yǔ)

試驗(yàn)表明，采用生物防治方法，定期定量噴灑益生菌能夠明顯抑制致病菌遲鈍愛(ài)德華細(xì)菌繁殖，進(jìn)而抑制黃顙魚(yú)“紅頭病”的發(fā)生。養(yǎng)殖生產(chǎn)中，如果池塘管理不善，不慎發(fā)生了黃顙魚(yú)“紅頭病”，應(yīng)采用多種組合治療方案，一方面噴灑益生菌，抑制病菌生長(zhǎng)，改善水質(zhì)，提高存塘魚(yú)的免疫力；另一方面，采用恩諾沙星和諾氟沙星等敏感抗生素，及時(shí)治療，減少損失。