百合利咽茶治療肺腎陰虛型慢喉痹的療效及其網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制探討

李逸雪， 劉恒瑞， 付文洋

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院，深圳市中醫(yī)院，廣東深圳 518000；2.深圳市逗點(diǎn)生物有限公司，廣東深圳 518000）

慢喉痹即是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的“慢性咽炎”[1-2]，其臨床表現(xiàn)主要為咽部異物感、疼痛感、干燥感、癢感等癥狀，咽喉部查體可見咽后壁色暗紅，伴隨不同程度的腫脹[3]。病情時(shí)輕時(shí)重，且易因言語過多、飲食不當(dāng)、胃食管反流[4]、空氣污染[5]等刺激性因素誘發(fā)反復(fù)。目前，西醫(yī)在急性期使用抗生素治療，效果較好，但對于慢性期的遺留癥狀，暫無明確的特效靶向藥，其療效存在一定的局限性[6-7]。而中醫(yī)基于臨床辨證論治理論，在慢性期使用中醫(yī)藥治療，不僅能改善患者的口干、異物感等癥狀，提高患者生活質(zhì)量，還能減少復(fù)發(fā)率[8]。

喉痹在臨床很常見[9]。根據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查，慢喉痹的患病人群正日益擴(kuò)大，且有越來越年輕化的趨勢。慢喉痹中的“慢”字體現(xiàn)了該病患病日久，非一日之功，易使肺腎兩臟虛損，其中肺為標(biāo)，腎為本。腎陰不足不僅不能上行滋補(bǔ)肺陰，還致使虛火上犯，耗氣傷津；而咽喉為上焦，屬肺之門戶，邪氣來襲，首當(dāng)其沖，導(dǎo)致肺臟陰虛更甚；而金水相生，肺陰虧虛累及腎陰，導(dǎo)致肺腎陰虛，日久而發(fā)為慢喉痹?；?020年深圳市中醫(yī)院耳鼻喉科門診患者的慢喉痹辨證觀察，發(fā)現(xiàn)肺腎陰虛型患者占慢喉痹患者總數(shù)的絕大部分。因此，本研究選取85例肺腎陰虛型慢喉痹患者作為研究對象進(jìn)行百合利咽茶的臨床療效觀察。但由于百合利咽茶的藥效成分和療效機(jī)制尚未明確，為了解百合利咽茶的潛在治療機(jī)制，本研究還進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，運(yùn)用系統(tǒng)生物信息學(xué)理論來預(yù)測中藥配伍作用機(jī)制[10-14]，以便更好地指導(dǎo)臨床工作?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象及分組選取2021年4月至2021年7月在深圳市中醫(yī)院耳鼻咽喉科門診就診且明確診斷為肺腎陰虛型慢喉痹的患者，共85例。由非本研究的其他人員應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字，根據(jù)就診先后順序，將患者隨機(jī)分為2組，其中觀察組45例，對照組40例。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求并通過深圳市中醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)；同時(shí)，所有入選患者均在本研究開始前簽署了知情同意書。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)內(nèi)科病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中有關(guān)慢喉痹（慢性咽炎）的中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[15]。①以口咽干，咽部異物感但不伴有吞咽困難，伴或不伴咽痛、咽癢等為主要癥狀；②病程較長，至少半年以上的慢喉痹病史，且咽部不適癥狀時(shí)輕時(shí)重；③常有慢喉痹急性反復(fù)發(fā)作史，常因使用嗓音過度或不當(dāng)、飲食不當(dāng)、胃食管反流、空氣污染等導(dǎo)致發(fā)??；④咽部檢查：咽后壁黏膜腫脹，或有暗紅色斑塊狀、樹枝狀充血，以及淋巴濾泡增生。肺腎陰虛型的辨證標(biāo)準(zhǔn)：咽干口干，頻頻求飲，伴或不伴有咽部灼熱感，多言之后口干、咽痛等癥狀加重，伴或不伴有腰酸乏力，午后及黃昏時(shí)癥狀更甚。咽部充血呈暗紅色，黏膜較干燥，或有淋巴濾泡增生，色偏暗紅。舌紅，苔薄黃，脈細(xì)數(shù)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合上述慢喉痹（慢性咽炎）的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②中醫(yī)證型為肺腎陰虛型；③經(jīng)過西藥治療后，病情仍有反復(fù)發(fā)作；④入選本研究時(shí)處于慢性咽炎發(fā)作期；⑤依從性好，自愿參加本研究并簽署知情同意書的患者。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)①平時(shí)需要使用激素及其他可能影響療效觀察的藥物治療的患者；②合并有其他咽喉部疾病的非單純性慢喉痹患者；③已知有重大全身性嚴(yán)重疾?。ㄈ缟窠?jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼疾病和自身免疫性疾病），以及需對嚴(yán)重慢性疾?。ㄈ绨┌Y）進(jìn)行持續(xù)治療的患者；④依從性差，未按規(guī)定進(jìn)行治療的患者。

1.5 治療方法對照組在第1 周至第4 周給予口服養(yǎng)陰清肺湯的中藥湯劑（方藥組成：生地黃20 g、麥冬15 g、玄參15 g、貝母15 g、牡丹皮15 g、白芍15 g、甘草10 g、薄荷10 g）治療，每日1 劑，煎取400 mL，分2 次于早晚飯后20～30 min服用，每次200 mL，共治療4 周；在第5 周至第8 周不再進(jìn)行任何藥物治療和干預(yù)。觀察組在第1 周至第4 周給予口服養(yǎng)陰清肺湯中藥湯劑（湯劑的組成、用法與對照組相同），并加上口服百合利咽茶（方藥組成：百合2 g，菊花1 g，陳皮1 g，甘草1 g）治療，每日1劑，每次用300 mL開水沖泡后服用，每日3 次，于早中晚飯后1 h 服用；在第5 周至第8 周，停用養(yǎng)陰清肺湯，繼續(xù)使用百合利咽茶治療（使用方法及劑量不變）。2組患者均在治療8 周后評價(jià)療效。

1.6 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法為了獲得可靠的慢喉痹病理基因列表，我們對比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫（CTD）及GeneCards 數(shù)據(jù)庫中慢喉痹相關(guān)基因交叉應(yīng)用得到基因集G1，其中相關(guān)分?jǐn)?shù)＞80，P值＜0.05。同時(shí)，對百合利咽茶的中藥成分，基于BATMAN-TCM 數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行活性成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測分析，得到基因集G2，G1 和G2 交集后得到G3，即為百合利咽茶治療慢喉痹的基因靶點(diǎn)，再將G3 導(dǎo)入String 網(wǎng)站，構(gòu)建治療靶基因的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖；與此同時(shí)，對G3 在GO 和KEGG 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行富集分析，以分析百合利咽茶的主要分子生物過程或信號通路，并繪制高級氣泡圖、輸出基因-概念網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7 臨床療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)局部癥狀與體征量化計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)（見表1），在患者首次治療前、治療第4 周和治療第8周后進(jìn)行臨床癥狀與體征量化評分，計(jì)算出治療前、治療第4周和治療第8周后的各項(xiàng)癥狀與體征評分及總積分，再根據(jù)治療前后癥狀與體征總積分的變化情況判定療效。計(jì)算公式如下：癥狀與體征總積分減少率（療效指數(shù)）=（治療前總積分-治療后總積分）/治療前總積分×100%。顯效：療效指數(shù)≥80%；有效：40%≤療效指數(shù)＜80%；無效：療效指數(shù)＜40%。總有效率=（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總病例數(shù)×100%。

表1 慢喉痹癥狀與體征具體量化計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Specific quantitative scoring criteria for symptoms and signs of chronic pharyngitis

1.8 統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)（即采用GraphPad Prism 8 中的Contingency 方法計(jì)算組間差異）。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者基線資料比較觀察組45例患者中，男27例，女18例；年齡24～67歲，平均（45.07±10.96）歲；病程6 個(gè)月～5年。對照組40例患者中，男23例，女17例；年齡24～66歲，平均（37.9±10.30）歲；病程8 個(gè)月～4年。2組患者的性別、年齡、病程、嚴(yán)重程度等基線資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明2組患者的基線特征基本一致，具有可比性。

2.2 2組患者治療4周后和治療8周后臨床療效比較表2結(jié)果顯示：治療4周后，觀察組的總有效率為82.2%（37/45），高于對照組的65.0%（26/40），但組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療8 周后，觀察組的總有效率為91.1%（41/45），明顯高于對照組的70.0%（28/40），組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 2組慢喉痹患者治療4周后和治療8周后的臨床療效比較Table 2 Comparison of clinical efficacy between the two groups of patients with chronic pharyngitis after 4 and 8 weeks of treatment [例（%）]

2.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果在CTD 及GeneCards數(shù)據(jù)庫找到慢喉痹病理基因1008個(gè)，在BATMANTCM 中篩選了153 個(gè)與百合利咽茶相關(guān)的基因靶點(diǎn)，兩者交集后有21 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)（見圖1-A）；將21 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)提交至String 網(wǎng)站，生成蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。圖中節(jié)點(diǎn)表示蛋白質(zhì)，兩個(gè)節(jié)點(diǎn)之間，線條越密集則表示關(guān)聯(lián)度越大，其中GGT1和GSR、PGR和ESR1、CHRNA5和CHRNA7的關(guān)聯(lián)度較大（見圖1-B），在KEGG 和GO 富集結(jié)果中，百合利咽茶的顯著治療靶點(diǎn)在細(xì)胞修飾的氨基代謝通路和谷胱甘肽代謝。在KEGG富集結(jié)果中，基因及通路相關(guān)的基因放射比主要集中在0.23左右，最顯著的值約為0.35；在GO 富集結(jié)果中，基因及通路相關(guān)的基因放射比主要集中在0.25，最顯著的值是0.30。結(jié)果見圖2～圖3。

圖1 慢喉痹與百合利咽茶的基因韋恩圖（A）和相交靶點(diǎn)的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（B）Figure 1 Gene Venn diagram and protein-protein interaction network of intersecting targets of chronic pharyngitis and Baihe Liyan Tea

圖2 GO和KEGG富集氣泡分析圖Figure 2 GO and KEGG enrichment bubble analysis graph

圖3 GO和KEGG輸出基因-概念網(wǎng)絡(luò)圖Figure 3 GO and KEGG output gene-concept network diagram

2.4 百合利咽茶的中藥性能分析結(jié)果中藥都具有一定的藥性和藥味，即四氣五味，這是藥物性能的一個(gè)重要方面。對百合利咽茶中的藥物進(jìn)行分析，得出該方四氣以寒為主，占60.0%，五味以甘為主，占70.0%，歸經(jīng)以歸肺經(jīng)為主，占45.0%。結(jié)果見圖4。

圖4 百合利咽茶中藥成分的四氣五味歸經(jīng)圖Figure 4 Graphs of four properties，five flavors and meridian tropism of Chinese herbal ingredients of Baihe Liyan Tea

2.5 不良反應(yīng)2組患者在治療過程中均未發(fā)生相關(guān)的任何不良事件。

3 討論

3.1 中醫(yī)對慢喉痹病因病機(jī)的認(rèn)識痹者，閉也，指阻塞不暢的意思[16]?！端貑枴り庩杽e論》最早提出喉痹的概念，曰：“一陰一陽結(jié)，謂之喉痹”?！秹凼辣Ｔ穭t曰：“一陰者，手少陰君火，心之脈氣也。一陽者，手少陽相火，三焦之脈氣也。二脈并絡(luò)于喉，氣熱則內(nèi)結(jié)，結(jié)甚即腫脹，腫脹甚則痹?！盵17]這里明確提出了喉痹的概念。而該病日久，反復(fù)發(fā)作，則可導(dǎo)致“慢喉痹”。有關(guān)慢喉痹的病因病機(jī)，《景岳全書》曰：“格陽喉痹，由火不歸元，則無根之火客于咽喉而然，其證則上熱下寒，全非火證?！盵18]意思即肺為標(biāo)，腎為本，腎陰不足，腎水不能制火，則虛火上犯咽喉而發(fā)為喉痹；且腎陰不足，不僅不能上行滋補(bǔ)肺陰，還可致虛火上犯，耗氣傷津，而咽喉為上焦，屬肺之門戶，邪氣來襲，首當(dāng)其沖，導(dǎo)致肺臟陰虛更甚，而金水相生，肺陰虧虛累及腎陰不足，日久則發(fā)而為慢喉痹。

3.2 研究結(jié)果分析

3.2.1 臨床療效結(jié)果分析 本研究結(jié)果顯示，治療4 周后，觀察組的總有效率較對照組有所提高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明百合利咽茶在慢喉痹急性發(fā)作時(shí)的療效有限，具有一定的治療局限性，但第1～4周的治療并不影響第5～8周的治療結(jié)果，第5～8 周的治療結(jié)果偏差較小，可信度較高。治療8周后，觀察組的總有效率較對照組明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明在慢喉痹急性發(fā)作治療后還遺留的口干、異物感等癥狀，用百合利咽茶作為輔助治療，可以大大提高患者的生活質(zhì)量，減少患者的疾病痛苦。

3.2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果分析 在CTD及GeneCards數(shù)據(jù)庫找到慢喉痹的病理基因和在BATMAN-TCM中篩選與百合利咽茶相關(guān)的基因靶點(diǎn)，兩者交集后有21 個(gè)顯著相關(guān)靶點(diǎn)，說明百合利咽茶極有可能通過此21 個(gè)顯著的相關(guān)靶點(diǎn)，對慢喉痹起到輔助治療作用和日常咽喉保健作用；再通過百合利咽茶復(fù)方化合物-靶點(diǎn)-慢喉痹疾病網(wǎng)絡(luò)與GO、KEGG富集分析，顯示出“細(xì)胞修飾的氨基代謝通路”和“谷胱甘肽代謝”是顯著的治療通路和靶點(diǎn)。有研究[19]表明，谷胱甘肽是一種小分子活性肽，在生物體內(nèi)具有顯著的抗氧化功能，在對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)展和緩解方面發(fā)揮重要作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是一種細(xì)胞狀態(tài)，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中未折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白的超載引起，如果未正確解決，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡[20]。雖然暫未有研究表明慢喉痹疾病與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有顯著相關(guān)，但通過本研究，可預(yù)測百合利咽茶治療慢喉痹可能是通過影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)展和緩解而發(fā)揮作用。由此可見，本研究可進(jìn)一步揭示百合利咽茶對慢喉痹的輔助治療效果和日常咽喉保健療效的具體機(jī)制，以及從生物基因水平論證了中醫(yī)藥在治療復(fù)雜疾病方面的有效性，為中醫(yī)藥治療慢喉痹提供了新的思路與方法[21]。

3.2.3 百合利咽茶的中藥性能結(jié)果分析 從古至今的中醫(yī)文獻(xiàn)，在論述每一種藥物時(shí)，首先標(biāo)明其性味與歸經(jīng)，這有助于我們認(rèn)識各種藥物的共性和個(gè)性，以此來指導(dǎo)臨床用藥。本研究結(jié)果顯示，百合利咽茶的四氣中寒性占比為60.0%，雖寒性占比最大，但還有40.0%是溫性和平性，寒溫并用，溫能制寒，故百合利咽茶中剩余的寒性，只有寥寥；五味中，甘的占比最大，達(dá)70.0%，甘性溫補(bǔ)，但又過于平和，只能緩緩發(fā)之，不適用于急性期的治療；歸經(jīng)中，肺經(jīng)占比最大，占45.0%。本研究中，除肺陰虧虛外，腎陰亦虧損，而該方在治療時(shí)未能兼顧先天之本，故百合利咽茶在慢喉痹急性發(fā)作時(shí)，只能起到輔助治療作用，而待急性期治療過后，堅(jiān)持繼續(xù)服用，取其甘性以緩緩補(bǔ)之，對咽喉的保健作用具有顯著療效。

3.3 結(jié)論百合利咽茶在肺腎陰虛型慢喉痹的輔助治療及治療后的預(yù)防保健中可發(fā)揮顯著的療效?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，百合利咽茶活性成分對慢喉痹疾病相關(guān)的多個(gè)靶點(diǎn)和多條信號通路的調(diào)控是提高慢喉痹治療有效率的重要作用機(jī)制，由此可見，百合利咽茶治療慢喉痹具有一定的生物學(xué)理論基礎(chǔ)。

（致謝：感謝劉毅先生提供的計(jì)算機(jī)語言支持?。?/p>