納米硒對(duì)熱應(yīng)激虹鱒血清抗氧化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的影響

盧軍浩，李蘭蘭，權(quán)金強(qiáng)，趙桂研，孫 軍，林橋榮，劉 哲

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

虹鱒(Oncorhynchusmykiss)屬鮭科大麻哈魚(yú)屬，適宜生長(zhǎng)水溫為12～18 ℃，是一種典型的冷水性魚(yú)類[1]。然而，全球變暖使我國(guó)虹鱒養(yǎng)殖業(yè)一直在遭受夏季高溫的威脅，很容易造成減產(chǎn)或大面積死亡[2]。有研究表明，網(wǎng)箱養(yǎng)殖模式下，22 ℃的水溫已經(jīng)對(duì)虹鱒產(chǎn)生了不利影響，24 ℃已經(jīng)達(dá)到了虹鱒耐受的臨界點(diǎn)，水溫高于25 ℃虹鱒會(huì)開(kāi)始逐漸死亡[3]。因此，在高溫來(lái)臨前，提升虹鱒機(jī)體抗氧化和免疫能力具有重要生產(chǎn)實(shí)踐意義。熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)變性，錯(cuò)誤折疊率升高[4]?；钚匝?ROS)是細(xì)胞正常的代謝產(chǎn)物，當(dāng)機(jī)體受到持續(xù)熱應(yīng)激時(shí)，ROS含量會(huì)大幅增加，ROS積累會(huì)產(chǎn)生大量的丙二醛(Malondialdehyde，MDA)，破壞細(xì)胞器的正常結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，釋放大量血清腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)等炎癥因子[5]。動(dòng)物機(jī)體具有一套完整的酶類抗氧化體系，其中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)等抗氧化酶在清除ROS、緩解機(jī)體氧化受損方面發(fā)揮著重要作用[6]，免疫球蛋白和補(bǔ)體系統(tǒng)也參與了機(jī)體的抗氧化防御，保障機(jī)體的免疫健康[7-8]。納米硒屬單質(zhì)硒，粒徑在80 nm內(nèi)，具有高表面-體積比，有高活性、低毒性的特點(diǎn)，在免疫和抗氧化防御方面發(fā)揮著重要作用[9-10]。Rotruck等[11]研究發(fā)現(xiàn)，硒是GSH-Px的活性中心；史孟娟[12]發(fā)現(xiàn)，相比于同濃度的亞硒酸鈉和硒代蛋氨酸，納米硒具有更低的毒性；Yu等[13]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加納米硒能顯著提高低氧脅迫下草魚(yú)(Ctenopharyngodonidella)GSH-Px活性，降低MDA含量；Dawood等[14]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加納米硒能顯著提高尼羅羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)抗氧化酶活性和肝臟、脾臟中TNF-α和IL-1β基因表達(dá)量；李彥紅等[15]發(fā)現(xiàn)，添加納米硒能提高齊口裂腹魚(yú)(Schizothoraxprenanti)生長(zhǎng)性能、肌肉硒含量和血清抗氧化指標(biāo)。通過(guò)膳食補(bǔ)充納米硒緩解魚(yú)類氧化應(yīng)激已經(jīng)成為一種有效的方法，但關(guān)于納米硒在虹鱒抗熱應(yīng)激上的研究鮮有報(bào)道。

本研究以納米硒為飼料添加劑，測(cè)定虹鱒在攝入納米硒后血清抗氧化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的變化，旨在探討納米硒在虹鱒抗熱應(yīng)激上的機(jī)制，為抗熱應(yīng)激飼料的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選取遺傳背景一致、體格健康、平均體質(zhì)量約80 g的8月齡虹鱒600尾。虹鱒飼料選用北京漢業(yè)科技有限公司市售虹鱒稚魚(yú)配合飼料(主要原料：魚(yú)粉、豆粕、小麥粉、磷酸二氫鈣、玉米蛋白粉、谷朊粉、啤酒酵母粉、魚(yú)油、復(fù)合維生素、復(fù)合微量元素等；飼料成分：粗蛋白質(zhì)≥48%，粗脂肪≥10%，粗纖維≤5%，粗灰分≤14%，水分≤12%，賴氨酸≥2.6%，總磷≥0.9%)。納米硒由廣州市博士奧生化技術(shù)研究有限公司提供，納米硒濃度為0.5%，粒徑80%集中在60～80 nm，由武漢百仟度生物科技有限公司測(cè)定。以羧甲基纖維素鈉(CMC)為增稠劑，每千克飼料中添加5 g，與水按1∶30的比例溶解納米硒，制備納米硒含量為5，10 mg/kg的虹鱒飼料，對(duì)照組飼料只加入增稠劑，不添加納米硒，自然條件下晾干，4 ℃冷藏保存，分別抽樣采用國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼料中硒元素濃度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 飼料中硒元素含量測(cè)定Tab.1 Determination results of selenium content in feed mg/kg

1.2 試驗(yàn)方法

挑選體格大小一致的虹鱒600尾隨機(jī)分為3組，每組200尾，飼養(yǎng)在3個(gè)室內(nèi)循環(huán)流水養(yǎng)殖槽(6 000 L)中，微流水養(yǎng)殖。(18.0±0.2)℃暫養(yǎng)7 d后進(jìn)入試驗(yàn)期，對(duì)照組繼續(xù)飼喂基礎(chǔ)日糧，處理組飼喂納米硒含量分別為5，10 mg/kg的日糧，繼續(xù)在(18.0±0.2)℃飼喂9 d。第9天結(jié)束后，使用冷暖水機(jī)和加熱棒使水溫在30 min升至(24.0±0.2)℃并維持，熱應(yīng)激處理48 h。分別在熱應(yīng)激前(18 ℃)0，3，6，9 d和熱應(yīng)激后(24 ℃)4，8，12，24，48 h 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組隨機(jī)取10尾魚(yú)，快速轉(zhuǎn)入MS-222(50 mg/L)深度麻醉后用一次性醫(yī)用注射器(2 mL)尾靜脈采血，將血液置于4 ℃冰箱靜置2 h，于4 ℃、3 500 r/min離心10 min制備血清，收集血清并置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩吼B(yǎng)期和試驗(yàn)期內(nèi)每天投喂試驗(yàn)飼料3次，時(shí)間為8：00，12：00，18：00，日投喂量為魚(yú)體質(zhì)量的3%，投喂完成30 min后觀察并記錄攝食情況，然后用虹吸管吸取殘餌和糞便，并在8：30，12：30，18：30測(cè)量溶氧量、氨氮濃度，試驗(yàn)期間保持光照12 h/黑暗12 h。試驗(yàn)期間保持溶氧量(9.0±0.5)mg/L，氨氮濃度(0.10±0.05)mg/L，pH值7.5±0.2，亞硝酸鹽濃度(0.01±0.001)mg/L。水溫利用深圳市安晟電子有限公司生產(chǎn)的數(shù)顯溫度計(jì)(CX-WDJ200LCD)測(cè)定，溶氧、pH值、亞硝酸鹽和氨氮濃度利用杭州陸恒生物有限公司檢測(cè)試劑盒測(cè)定。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

按照白蛋白(Albumin，ALB)試劑盒、總蛋白(Total protein，TP)試劑盒操作說(shuō)明書測(cè)定血清中ALB和TP含量，球蛋白(GLO)含量=TP含量-ALB含量。按照谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒、過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒操作說(shuō)明測(cè)定GSH-Px、SOD、CAT、MDA指標(biāo)。按照魚(yú)類免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)Elisa試劑盒、魚(yú)補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒、魚(yú)白介素-1β(IL-1β)ELISA試劑盒、魚(yú)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELISA試劑盒操作說(shuō)明，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定IgM、C3、IL-1β、TNF-α指標(biāo)。測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，其中吸光度值用酶標(biāo)儀(AWARENESS Stat Fax 2100，美國(guó))測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清蛋白的影響

納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清蛋白含量的影響見(jiàn)圖1，熱應(yīng)激前，飼喂9 d，處理組TP含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。熱應(yīng)激降低了TP的含量，熱應(yīng)激后3個(gè)試驗(yàn)組的TP含量均呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢(shì)，對(duì)照組和5 mg/kg納米硒組在24 h達(dá)到最高，10 mg/kg納米硒組在12 h達(dá)到最高，且5 mg/kg納米硒組TP含量顯著高于其他組(P<0.05)(圖1-A)。

不同小寫字母表示同一時(shí)間點(diǎn)下不同處理組間酶活性差異顯著(P<0.05)。圖2，3同。Different lowercase letters indicate significant difference of enzyme activity between different treatment groups at the same time(P<0.05).The same as Fig.2，3.

添加納米硒提高了虹鱒血清ALB的含量，飼喂6，9 d，10 mg/kg納米硒組ALB含量顯著高于5 mg/kg納米硒組和對(duì)照組(P<0.05)。熱應(yīng)激降低了ALB的含量，熱應(yīng)激后添加納米硒組ALB含量逐漸上升，對(duì)照組ALB含量則是先上升后趨于穩(wěn)定。熱應(yīng)激24 h，5 mg/kg納米硒組ALB含量顯著高于其他組(P<0.05)，10 mg/kg納米硒組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，熱應(yīng)激48 h，5 mg/kg和10 mg/kg納米硒組ALB含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(圖1-B)。

熱應(yīng)激前，飼喂9 d添加5 mg/kg納米硒組球蛋白(Globulin，GLB)含量顯著高于其他組，10 mg/kg納米硒組GLB含量低于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05)。熱應(yīng)激降低了GLB的含量，熱應(yīng)激后3個(gè)試驗(yàn)組均呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢(shì)，5 mg/kg納米硒組在8 h達(dá)到最大值，10 mg/kg納米硒組在12 h達(dá)到最大值，對(duì)照組則在24 h達(dá)到最大值。熱應(yīng)激后，除48 h外，其他時(shí)間點(diǎn)添加納米硒組GLB含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(圖1-C)。

2.2 納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清抗氧化酶的影響

納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清抗氧化酶的影響見(jiàn)圖2，熱應(yīng)激前，3個(gè)試驗(yàn)組的GSH-Px含量均呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，飼喂9 d，添加納米硒組GSH-Px含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。熱應(yīng)激降低了GSH-Px的含量，熱應(yīng)激后，對(duì)照組GSH-Px活性呈現(xiàn)先上升后保持穩(wěn)定趨勢(shì)；5 mg/kg納米硒組GSH-Px活性呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，在4，48 h顯著高于其他組(P<0.05)；10 mg/kg納米硒組GSH-Px活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在24 h達(dá)到最大值，在8，12，24 h顯著高于其他組(P<0.05)(圖2-A)。

圖2 納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清抗氧化酶的影響(n=10)Fig.2 Effects of nano-selenium on antioxidant enzymes in serum of rainbow trout under heat stress(n=10)

熱應(yīng)激前，在飼喂第9天，10 mg/kg納米硒組SOD含量顯著高于其他組(P<0.05)。熱應(yīng)激降低了SOD的含量，熱應(yīng)激后5 mg/kg納米硒組SOD活性呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，在4，24，48 h顯著高于其他組(P<0.05)；10 mg/kg納米硒組SOD含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且在12 h達(dá)到最大值，顯著高于其他組(P<0.05)；對(duì)照組SOD含量也呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在12 h達(dá)到最大值(圖2-B)。

熱應(yīng)激前，飼喂6，9 d，添加納米硒顯著提高了血清CAT的含量(P<0.05)。熱應(yīng)激提高了血清CAT的含量，熱應(yīng)激后，對(duì)照組CAT的含量呈現(xiàn)先上升后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)，添加納米硒組CAT含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且均在12 h達(dá)到最大值，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(圖2-C)。

熱應(yīng)激前，3個(gè)試驗(yàn)組血清MDA含量均無(wú)顯著變化。熱應(yīng)激使MDA含量升高。熱應(yīng)激后，對(duì)照組MDA含量呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì)，而納米硒添加組在熱應(yīng)激后均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。5 mg/kg納米硒組MDA含量在熱應(yīng)激4，8，24，48 h顯著低于其他組(P<0.05)，12 h相對(duì)對(duì)照組顯著升高(P<0.05)；10 mg/kg納米硒組MDA含量在熱應(yīng)激4，8，12，48 h顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，在24 h與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖2-D)。

2.3 納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清免疫酶的影響

納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清相關(guān)免疫酶的影響見(jiàn)圖3，熱應(yīng)激前，添加納米硒對(duì)血清TNF-α含量無(wú)顯著影響。熱應(yīng)激后5 mg/kg納米硒組TNF-α含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，10 mg/kg納米硒組和對(duì)照組均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。熱應(yīng)激4 h，5 mg/kg納米硒組TNF-α含量相比對(duì)照組升高，10 mg/kg納米硒組相比對(duì)照組降低，且差異顯著(P<0.05)；熱應(yīng)激12 h，5 mg/kg納米硒組TNF-α含量相比對(duì)照組無(wú)顯著差異，10 mg/kg納米硒組相比對(duì)照組升高，且差異顯著(P<0.05)(圖3-A)。

熱應(yīng)激前，添加納米硒對(duì)血清IL-1β含量無(wú)顯著影響。熱應(yīng)激后5 mg/kg納米硒組IL-1β含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，10 mg/kg納米硒組呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，對(duì)照組則呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。5 mg/kg納米硒組和10 mg/kg納米硒組IL-1β含量在熱應(yīng)激4 h相比對(duì)照組顯著升高 (P<0.05)；熱應(yīng)激12 h，比對(duì)照組顯著降低(P<0.05)(圖3-B)。

熱應(yīng)激前，添加納米硒對(duì)血清IgM含量無(wú)顯著影響。熱應(yīng)激后3個(gè)試驗(yàn)組IgM含量呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。熱應(yīng)激4 h，5 mg/kg納米硒組IgM含量顯著高于其他2組(P<0.05)；熱應(yīng)激12 h，10 mg/kg納米硒組IgM含量顯著高于其他2組 (P<0.05)(圖3-C)。

熱應(yīng)激前，飼喂第9 天，添加納米硒提高了血清C3含量，差異顯著(P<0.05)。熱應(yīng)激后3個(gè)試驗(yàn)組C3含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，添加納米硒顯著提高了血清C3含量。熱應(yīng)激4，12 h，5 mg/kg納米硒組IgM含量顯著高于其他2組，差異顯著(P<0.05)(圖3-D)。

圖3 納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒血清免疫相關(guān)酶的影響(n=10)Fig.3 Effects of nano-selenium on immune related enzymes in rainbow trout serum under heat stress(n=10)

3 結(jié)論與討論

血清中的TP由ALB和GLB組成[16]。ALB是血漿滲透調(diào)節(jié)的載體，在改善細(xì)胞膜方面具有關(guān)鍵作用，GLB能修復(fù)機(jī)體組織，緊急情況下能作為能源物質(zhì)給機(jī)體功能[17]。ALB和GLB的水平通常用于評(píng)估魚(yú)類的免疫水平，低水平的ALB和GLB會(huì)干擾正常蛋白質(zhì)的合成[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激4 h，虹鱒血清TP含量顯著下降，可能是急性熱應(yīng)激下，大量ALB和GLB產(chǎn)生了糖異生，分解為游離氨基酸作為能源物質(zhì)給機(jī)體供能[19]；也可能是急性熱應(yīng)激下ALB用來(lái)修復(fù)細(xì)胞膜的損傷。夏斌鵬等[2]研究發(fā)現(xiàn)，慢性熱應(yīng)激下虹鱒血清TP、ALB和GLB含量升高，但差異不顯著，這可能與熱應(yīng)激的方式有關(guān)。隨著熱應(yīng)激的持續(xù)，血清中ALB含量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，TP和GLB的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，說(shuō)明持續(xù)熱應(yīng)激激活了血清蛋白分泌的信號(hào)通路。Harsij等[20]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加納米硒能提高氨脅迫下虹鱒血清中ALB和GLB的含量，這與本研究結(jié)果一致，可能是由于納米硒在通過(guò)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制主動(dòng)吸收后，轉(zhuǎn)化為硒半胱氨酸，繼而合成硒蛋白，提高機(jī)體免疫力[21]。

GSH-Px是重要的抗氧化酶之一，其主要組成成分之一是硒代半胱氨酸[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激前期虹鱒血清GSH-Px活性降低，這與Shokraneh等[19]在肉雞胚胎發(fā)育中的研究結(jié)果相似，隨著熱應(yīng)激的持續(xù)，GSH-Px活性逐漸上升，推測(cè)熱應(yīng)激短時(shí)間內(nèi)使機(jī)體產(chǎn)生了大量ROS，急劇增加了GSH-Px的消耗，其機(jī)制是GSH-Px通過(guò)將氫過(guò)氧化物還原為相應(yīng)的醇，阻止活性氧自由基產(chǎn)生，從而起到保護(hù)機(jī)體生物大分子和生物膜抗氧化作用[23]。在本研究中，熱應(yīng)激下添加納米硒顯著提高了虹鱒血清中GSH-Px的活性，這與在羅非魚(yú)、草魚(yú)[13-14]上的研究相同，其機(jī)制可能是GSH-Px的表達(dá)依賴于硒的攝取，納米硒促進(jìn)了硒代半胱氨酸的合成，而硒代半胱氨酸正是GSH-Px的重要組成成分之一[9]。

MDA是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的敏感標(biāo)志物，是ROS短時(shí)間內(nèi)積累過(guò)多，脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)而產(chǎn)生的有毒物質(zhì)[5]。MDA引起蛋白質(zhì)和核酸等大分子交聯(lián)聚合，也是細(xì)胞受損程度的指標(biāo)[22]。研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加納米硒降低了羅非魚(yú)[14]、齊口裂腹魚(yú)[15]、草魚(yú)[13]血清中MDA活性。Harsij等[20]發(fā)現(xiàn)，添加納米硒能降低氨脅迫下虹鱒血清MDA含量，這與本研究結(jié)果一致，證明納米硒通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶活性，清除過(guò)量ROS，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生。此外，5 mg/kg納米硒組MDA含量在熱應(yīng)激12 h突然升高，可以解釋為此階段細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化速率大于抗氧化酶的分解速率，導(dǎo)致ROS一定程度的短暫積累，引起MDA的短暫升高，與之相對(duì)應(yīng)的是，在熱應(yīng)激48 h，添加納米硒組MDA出現(xiàn)顯著下降的趨勢(shì)，這可能是熱應(yīng)激后期抗氧化酶大量分泌，抗氧化酶的分解速率大于ROS的產(chǎn)生速率。此外，5 mg/kg納米硒組MDA的活性普遍低于10 mg/kg納米硒組，再一次說(shuō)明過(guò)量的納米硒對(duì)機(jī)體的促氧化作用。

TNF-α與IL-1β為細(xì)胞炎癥因子。TNF-α主要由淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，能夠激活巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞，促進(jìn)抗原活化和T、B淋巴細(xì)胞增殖分化；IL-1β形成于免疫反應(yīng)早期，在機(jī)體的免疫應(yīng)激中發(fā)揮著重要作用[28]。但也有些研究認(rèn)為，TNF-α與IL-1β細(xì)胞因子的增加是機(jī)體產(chǎn)生有害影響的原因[5]。IL-1β與TNF-α等細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌受核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-kB)信號(hào)通路的調(diào)控，熱應(yīng)激可以誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激，細(xì)胞中過(guò)量生成的ROS能夠作為信號(hào)分子激活NF-kB通路，這是機(jī)體前期細(xì)胞因子大量分泌的原因[29]。王紅權(quán)等[28]發(fā)現(xiàn)，在草魚(yú)日糧中添加0.2%的牛膝多糖能提高血清中TNF-α含量，提高機(jī)體的特異性免疫。但是隨著其分泌量的增加，表示機(jī)體炎癥反應(yīng)加劇，Sheiha等[5]發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激提高了兔血清中IL-1β含量，添加納米硒則能有效降低炎癥細(xì)胞因子，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。納米硒則可能通過(guò)調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?、促進(jìn)抗氧化酶合成等途徑間接調(diào)控NF-kB信號(hào)通路，促進(jìn)和抑制下游IL-1β與TNF-α細(xì)胞因子的釋放[30]。

免疫球蛋白IgM是由2條輕鏈和2條相同的重鏈構(gòu)成的多肽鏈結(jié)構(gòu)，分為恒定區(qū)和可變區(qū)，其中重鏈恒定區(qū)在免疫過(guò)程中起著多種效應(yīng)作用[31]。Choi等[32]研究發(fā)現(xiàn)，硒能提高鯽魚(yú)(Carassiusauratus)IgM的產(chǎn)生和表達(dá)，提高機(jī)體的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激4 h，3個(gè)組的IgM含量均下降，推測(cè)由于IgM具有抗感染作用，參與了細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，修復(fù)受損細(xì)胞[33]。熱應(yīng)激12 h，3個(gè)組的IgM含量均上升，表明此時(shí)機(jī)體相關(guān)免疫信號(hào)通路激活，調(diào)控分泌IgM，且添加納米硒組的IgM活性顯著高于對(duì)照組，推測(cè)硒也可能是IgM合成的重要元素，或硒蛋白與IgM分泌相關(guān)的信號(hào)通路存在關(guān)聯(lián)，通過(guò)促進(jìn)IgM分泌而提高機(jī)體免疫能力。

C3是補(bǔ)體系統(tǒng)的主要成員之一，是具有酶原活性的球蛋白，其水平是衡量體液免疫的重要指標(biāo)[34]。劉波[35]研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激1 h團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)血清中C3濃度顯著降低。陳星燦等[36]發(fā)現(xiàn)，添加硒化多糖和亞硒酸鈉能顯著提高黑鯛幼魚(yú)體內(nèi)C3的含量。本研究中，熱應(yīng)激使虹鱒血清中C3的含量呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，日糧中添加納米硒顯著提高了C3的含量。C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中的最關(guān)鍵成分，處于補(bǔ)體經(jīng)典、凝集素和旁路3條激活途徑的匯聚點(diǎn)上，參與了溶血、融菌與炎癥反應(yīng)等調(diào)控過(guò)程，C3含量的下降說(shuō)明機(jī)體正在發(fā)生抗氧化反應(yīng)，而納米硒促進(jìn)了C3的合成，這種促進(jìn)可能是納米硒直接參與了補(bǔ)體蛋白的合成，或者是納米硒合成半胱氨酸，硒蛋白對(duì)C3的合成具有調(diào)控作用，誘導(dǎo)合成的C3進(jìn)一步激活補(bǔ)體系統(tǒng)，通過(guò)免疫復(fù)合物和調(diào)理吞噬細(xì)胞等機(jī)制對(duì)機(jī)體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)等功能，提高虹鱒的免疫能力[8，34]。

飼糧中添加納米硒能提高急性熱應(yīng)激下虹鱒血清TP、ALB和GLB等血清蛋白含量，提高GSH-Px、SOD、CAT等抗氧化酶活性，降低MDA含量，提高TNF-α、IL-1β、IgM和C3等免疫酶的活性。納米硒通過(guò)合成硒蛋白、促進(jìn)抗氧化酶的分泌，提高細(xì)胞因子水平、促進(jìn)免疫球蛋白分泌和增強(qiáng)補(bǔ)體系統(tǒng)綜合調(diào)控虹鱒機(jī)體抗氧化和免疫系統(tǒng)，進(jìn)而提高虹鱒抗氧化能力和免疫能力，且添加5 mg/kg納米硒對(duì)機(jī)體的保護(hù)能力更強(qiáng)，其最適添加量有待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果為揭示納米硒對(duì)熱應(yīng)激下虹鱒抗氧化機(jī)制的影響提供了理論基礎(chǔ)，為虹鱒抗熱應(yīng)激飼料的研發(fā)提供了參考。