舒芬太尼后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制及其與mito-KATP的關(guān)系

龐 勇，王于藍(lán) (.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院麻醉科,四川 南充 637000;.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)室,四川南充 637000)

麻醉預(yù)處理是減少缺血再灌注損傷(IRI)的常見手段,然而該處理方式需要預(yù)防心肌缺血事件的發(fā)生,提前用藥,操作的可行性較低[1]。隨著臨床研究的不斷深入,有報(bào)道指出麻醉后處理可以在心肌缺血的事件后立刻實(shí)施,這較預(yù)處理而言,更符合臨床工作[2]。舒芬太尼在臨床使用中廣泛,安全劑量范圍大,常應(yīng)用于心血管手術(shù)，其麻醉劑量可達(dá)到8～30 μg/kg,在心肌保護(hù)方面已經(jīng)得到了證實(shí),但其作用機(jī)制仍未明確,因此有較高的探究價(jià)值[3]。為此,本研究針對(duì)舒芬太尼后處理的作用機(jī)制及其與線粒體ATP敏感性鉀通道(mito-KATP)的關(guān)系展開分析。

1 資料與方法

1.1動(dòng)物與分組：健康雄性成年SD大鼠,體重180～200 g,川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。隨機(jī)選擇成SD年大鼠,總共32只,隨機(jī)分為四組，每組各8只：A組為假手術(shù)組,B組為心肌缺血再灌注組,C組為心肌缺血再灌注+舒芬太尼,D組為缺血再灌注組+舒芬太尼+mito-KATP阻斷劑5-HD(5-羥葵酸)。

1.2研究方法：麻醉方式為腹腔注射50 mg/kg戊巴比妥鈉,成功后切開氣管,并與小動(dòng)物呼吸機(jī)(HX-300S)進(jìn)行連接,行機(jī)械通氣干預(yù)。右頸動(dòng)脈置管對(duì)血壓水平予以測量,右頸靜脈置管進(jìn)行輸液、給藥。采用熱板對(duì)大鼠直腸的溫度進(jìn)行控制,使其穩(wěn)定在37～38℃范圍內(nèi)。以阻斷及開放冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)的方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型。 發(fā)生嚴(yán)重低血壓(MAP<30 mmHg)或頑固性室顫的大鼠剔除出本研究。

A組LAD下只穿線,不結(jié)扎；B組、C組和D組先經(jīng)歷缺血30 min,隨后再進(jìn)行120 min的再灌注。在再灌注前10 min和3 min兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí),各組分別經(jīng)頸動(dòng)脈注入相應(yīng)藥物,容量均控制為1 ml/kg。A組：生理鹽水；B組：生理鹽水；C組：生理鹽水+舒芬太尼1 μg/kg；D組：生理鹽水+舒芬太尼1 μg/kg+5-HD 10 μg/kg。

1.3觀察指標(biāo)：①于再灌注120 min時(shí),采集大鼠頸動(dòng)脈血1 ml,1 500 r/min離心處理10 min,靜置15 min后分離上層血清,保存于-80℃的冰箱中及時(shí)送檢。采用全自動(dòng)生化分析以,行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)血清心肌肌鈣蛋白(cTn)I水平進(jìn)行檢測,試劑盒均購自美國R&D公司,操作時(shí)嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。②灌注90 min后每組隨即取出兩個(gè)心臟,沿平行房室溝方向切割成1.0～1.5 mm薄片,置于1% TTC溶液中顯色,靜置20 min后放在10%甲醛溶液中固定24 h后照相,采用Image-Pro Plus5.0圖像分析軟件測定左心室面積、缺血危險(xiǎn)面積和梗死面積，心肌梗死嚴(yán)重程度以梗死(IA)與缺血危險(xiǎn)面積(AAR)的比值(IA/AAR)表示。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

B組、C組和D組大鼠cTnI水平顯著高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),C組和D組大鼠cTnI水平顯著低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),D組大鼠cTnI水平顯著高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C組大鼠IA/AAR比值低于B組、D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),D組大鼠IA/AAR比值與B組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組cTnI、IA/AAR比值水平比較

3 討論

急性心肌缺血、心肌梗死在臨床上并不少見,是發(fā)病率較高的心腦血管疾病之一,會(huì)對(duì)人類的健康乃至生命安全構(gòu)成巨大的威脅,由于該病好發(fā)于中老年群體中,隨著人口老齡化進(jìn)程的加劇,其發(fā)病率逐年上升,已經(jīng)引起全社會(huì)的廣泛關(guān)注[4]。目前,臨床對(duì)于急性心肌梗死的治療中,溶栓、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)治療、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等較為常見,上述方法均可促進(jìn)冠狀動(dòng)脈再通,使得心肌重新獲得血供,即心肌再灌注(RP)[5]。但是,RP后仍有部分患者伴有IRI,導(dǎo)致預(yù)后受到極大的影響。因此,必須加強(qiáng)對(duì)急性心肌梗死的相關(guān)研究。

cTn是心肌收縮的調(diào)節(jié)蛋白,對(duì)心肌的正常運(yùn)動(dòng)有十分重要的指導(dǎo)意義。cTnI是cTn的具體表現(xiàn)形式,在心肌損傷的早期診斷中有非常高的特異度和敏感度,經(jīng)常被認(rèn)為是診斷心肌損傷的“金標(biāo)準(zhǔn)”[6-7]。本研究中,大鼠模型制備成功，進(jìn)一步研究證實(shí)舒芬太尼可以對(duì)心肌起到保護(hù)作用。但是有報(bào)道指出,不同劑量的舒芬太尼,可能對(duì)心肌的保護(hù)作用不同,而本研究設(shè)計(jì)劑量組過少,無法深入了解舒芬太尼不同劑量對(duì)心肌的保護(hù)作用。研究指出,芬太尼、瑞芬太尼、舒芬太尼們均可以模擬心肌缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)心臟IRI產(chǎn)生保護(hù)作用,主要是通過心臟上的δ-OR和κ-OR激活G蛋白,后者通過一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng),激活蛋白激酶C、mito-KATP通道,從而產(chǎn)生心臟保護(hù)作用[8-10]。但是由于上述有關(guān)報(bào)道并不多見,對(duì)于急性心肌IRI大鼠心肌保護(hù)而言,舒芬太尼是否通過蛋白激酶C、mito-KATP通道起到保護(hù)作用仍不明確。本研究中,靜脈給予mito-KATP抑制劑5-HD后,舒芬太尼對(duì)心肌的保護(hù)作用明顯減弱,提示這種保護(hù)作用于mito-KATP相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路密切相關(guān)。

綜上所述,舒芬太尼后處理對(duì)大鼠心肌I/R有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與mito-KATP通路參與該過程有關(guān)。