子午嶺林區(qū)野生白囊耙齒菌生物學(xué)特性研究

張秀麗 劉亞亞 肖正璐 秦一統(tǒng) 段建鋒 李欣

摘要：為了解子午嶺林區(qū)野生白囊耙齒菌生物學(xué)特性，為其進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。采用生長速率法測定不同培養(yǎng)條件對其菌絲生長的影響。結(jié)果表明，最適宜菌絲生長的碳源是果糖，氮源是酵母膏，最適生長溫度為25 ℃，菌絲致死溫度為50 ℃條件下處理15 min，對pH的適應(yīng)范圍較廣，pH 5.0～10.0條件下生長差異不顯著。

關(guān)鍵詞：慶陽;子午嶺;白囊耙齒菌;生物學(xué)特性

中圖分類號(hào)：S718.81? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：1001-1463（2022）06-0072-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2022.06.017

Study on the Biological Characteristics of Wild Irpex lacteus in

the Forest Area of Ziwu Mountain

ZHANG Xiuli， LIU Yaya， XIAO Zhenglu， QIN Yitong， DUAN Jianfeng， LI Xin

（Qingyang Academy of Agricultural Sciences， Qingyang Gansu 745000， China）

Abstract： In order to clarify the biological characteristics of wild Irpex lacteus（Fr.） Fr. in forest region of Ziwu mountain for further development and utilization， the effects of different culture conditions on the growth of its mycelia were measured by growth rate method. The results showed that the most suitable carbon and nitrogen source were fructose and yeast extract， respectively， the optimal growth temperature was 25 ℃ and the lethal temperature was 50 ℃ for 15 min. The suitable growth range of pH value for mycelia was wide， and no significant difference was detected from the pH value range of 5.0 to 10.0.

Key words： Qingyang; Ziwu mountain; Irpex lacteus （Fr.） Fr.; Biological characteristic

白囊耙齒菌（Irpex lacteus），又叫白囊孔菌、白耙齒菌等，屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），多孔菌目（Polyporales），皺孔菌科（Meruliaceae），耙齒菌屬（Irpex） [1 ]。白囊耙齒菌為一種藥用真菌，具有抗腎炎、提高免疫力等功效[2 ]，其所含多糖具有治療腎小球腎炎引起各種癥狀的作用[1 ]，其發(fā)酵提取物具有抗疲勞及增強(qiáng)缺氧耐受力等多種作用[3 ]，有極高的醫(yī)學(xué)價(jià)值，但其野生資源生長對環(huán)境要求較為嚴(yán)格，且生長緩慢[4 ]，生產(chǎn)上常通過菌絲體培養(yǎng)、人工栽培等方式進(jìn)行繁殖以滿足市場需求。我們在分離與慶陽市子午嶺野生豬苓共生的蜜環(huán)菌菌種時(shí)得到菌株Z，經(jīng)單胞純化后通過ITS分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果為白囊耙齒菌。為探明其生長發(fā)育與溫度、酸堿度、營養(yǎng)等生物學(xué)因子的關(guān)系[5 ]，我們對其進(jìn)行了生物學(xué)特性的測定，旨在為進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

供試菌株從與慶陽市子午嶺林區(qū)野生豬苓菌核共生的蜜環(huán)菌菌索中分離得到，其在Gen Bank數(shù)據(jù)庫里的rDNA-ITS序列登錄號(hào)為OL351834，編號(hào)為菌株Z。

1.2? ?試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 不同碳源下白囊耙齒菌菌絲生長情況測定

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基（20 g葡萄糖、2 g蛋白胨、0.5 g磷酸二氫鉀、0.5 g磷酸氫二鉀、0.1 g 維生素B1 、0.5 g硫酸鎂、20 g瓊脂、1 000 mL蒸餾水）為基準(zhǔn)[6 ]，碳源分別用20 g等量的蔗糖、甘露醇、可溶性淀粉、果糖、麥芽糖替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，配制成不同碳源平板培養(yǎng)基，對照為基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 3次重復(fù)。取單孢分離后在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的白囊耙齒菌菌種，用內(nèi)徑0.5 cm的無菌打孔器，取直徑為0.5 cm的菌餅接種于平板中央，每皿接1個(gè)菌餅，置于25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，每天觀察菌絲生長情況，分別于3、5、7 d用十字交叉法測量菌落直徑[7 ]，計(jì)算菌絲生長速率，培養(yǎng)7 d時(shí)觀察菌絲生長情況。菌絲長勢強(qiáng)，用“+ + +”表示;菌絲長勢一般，用“+ +”表示;菌絲生長勢差，用“+”表示;菌絲不生長，用“-”表示。

菌絲生長速度=（菌落直徑-菌餅直徑）/培養(yǎng)天數(shù)

1.2.2? ? 不同氮源下白囊耙齒菌菌絲生長情況測定

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對照，氮源分別用2 g等量的硝酸銨、硫酸銨、氯化銨、尿素、酵母膏替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蛋白胨，配制成不同氮源平板培養(yǎng)基， 3次重復(fù)。接種、培養(yǎng)及測定方法同1.2.1。

1.2.3? ? 不同pH下白囊耙齒菌菌絲生長情況測定

用0.1 mo1/L 的HCI或NaOH調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0后滅菌，分別制成平板，將菌餅接在不同pH 的PDA平板中央，在25 ℃條件下黑暗培養(yǎng)，3次重復(fù)，觀測菌落生長情況（同1.2.1）。

1.2.4? ? 不同溫度下白囊耙齒菌菌絲生長情況測定

培養(yǎng)7 d的單孢菌落，取直徑為0.5 cm的菌餅移入PDA平板中央，每皿1塊，分別于5、10、15、20、25、30、35 ℃溫度條件下黑暗培養(yǎng)，3次重復(fù)，觀測菌落生長情況（同1.2.1）。

1.2.5? ? 白囊耙齒菌致死溫度測定? ? 移取直徑為0.5 cm的菌餅到無菌試管中，加入2 mL的無菌水，分別置于25、30、35、40、45、50 ℃下水浴加熱15 min，取出后立即于冰水中冷卻至室溫。將處理后的菌餅接種到PDA平板上，觀測菌落生長情況（同1.2.1）。

1.3? ?數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)利用 Microsoft Excel 2007進(jìn)行處理，用spss17.0軟件中的Duncan進(jìn)行差異顯著性分析。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?不同碳源對白囊耙齒菌菌絲生長的影響

從表1可以看出，白囊耙齒菌在不同碳源培養(yǎng)基上均可以生長。在果糖培養(yǎng)基上菌落直徑最大，菌絲生長速度最快，平均生長速度0.85 cm/d，顯著高于對照;其次是蔗糖培養(yǎng)基，但與對照差異不顯著;在其他碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度均低于對照，但與對照差異不顯著。說明果糖和蔗糖培養(yǎng)基上菌絲生長勢強(qiáng)。綜合菌絲生長速度和生長勢，白囊耙齒菌生長最適碳源為果糖。

2.2? ?不同氮源對白囊耙齒菌菌絲生長的影響

從表2可以看出，白囊耙齒菌在不同氮源培養(yǎng)基上均可以生長。平均生長速度最快的是酵母膏培養(yǎng)基，為0.75 cm/d，但與對照差異不顯著。在其他培養(yǎng)基上菌絲生長速度均低于對照，其中尿素培養(yǎng)基與對照差異極顯著，硫酸銨、硝酸銨培養(yǎng)基與對照差異顯著，氯化銨培養(yǎng)基與對照差異不顯著。在酵母膏培養(yǎng)基上菌絲生長勢最強(qiáng)，尿素培養(yǎng)基菌絲生長勢最差，其他處理下菌絲長勢一般。綜合菌絲生長速度和生長勢，白囊耙齒菌生長的最適氮源為酵母膏。

2.3? ?不同pH對白囊耙齒菌菌絲生長的影響

從表3可以看出，白囊耙齒菌在pH 5.0～10.0下均可以生長。在pH 10.0培養(yǎng)基上菌落直徑最長，平均生長速度最快，達(dá)0.99 cm/d。各處理間菌絲生長速度無顯著性差異，菌絲生長勢一致，可見其生長過程中對pH的適應(yīng)范圍較大。

2.4? ?不同溫度對白囊耙齒菌菌絲生長的影響

從表4可以看出，不同培養(yǎng)溫度對菌絲生長影響較大，隨著溫度的升高菌絲生長速度總體呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。5 ℃條件下培養(yǎng)，前7 d菌落不生長，直到第8 d才開始萌發(fā)生長，且生長速度僅為0.04 cm/d。10 ℃條件下培養(yǎng)，前4 d菌落不生長，直到第5 d才開始萌發(fā)生長，生長速度為0.07 cm/d。培養(yǎng)溫度為15～35 ℃的5個(gè)處理，均在培養(yǎng)3 d時(shí)開始萌發(fā)生長，且15～25 ℃時(shí)隨著培養(yǎng)溫度的升高菌絲生長速度也隨之增加，25～35 ℃時(shí)隨著培養(yǎng)溫度的升高菌絲生長速度隨之降低。不同溫度條件下培養(yǎng)3～8 d，菌絲生長最快的是 25 ℃下培養(yǎng)，平均生長速度1.02 cm/d，極顯著高于30、35、10、5 ℃條件下，顯著高于15 ℃條件下，與20℃培養(yǎng)差異不顯著。25℃和20℃條件下菌絲生長勢最強(qiáng)，15、30、35 ℃下培養(yǎng)菌絲生長勢一般，5 ℃和10 ℃下培養(yǎng)菌絲生長勢最差。綜合菌絲生長速度和生長勢，白囊耙齒菌最適生長溫度范圍為20～25 ℃，以25 ℃左右最佳。

2.5? ?不同致死溫度對白囊耙齒菌菌絲生長的影響

從表5可以看出，培養(yǎng)3 d時(shí)，25、30、35、40 ℃處理下的菌絲生長速度較快，處理間差異不顯著，極顯著高于45 ℃處理，50 ℃處理菌絲未生長。培養(yǎng)5 d時(shí)，30、35、40 ℃處理下菌絲生長速度極顯著高于25 ℃和45 ℃處理，50 ℃處理菌絲未生長。培養(yǎng)7 d時(shí)，25、30、35 ℃處理下的菌絲生長速度較快，顯著高于40 ℃處理，極顯著高于45 ℃處理，50 ℃處理菌絲依然未生長;30、35、40 ℃菌絲平均生長速度較快，處理間差異不顯著，但均極顯著高于45 ℃處理;25 ℃處理下菌絲生長速度顯著高于45 ℃處理。25和30 ℃處理下菌絲生長勢最強(qiáng)，35 ℃和40 ℃處理下菌絲生長勢一般，45 ℃處理下菌絲生長勢較差，50 ℃菌絲始終未生長。綜上可見，35 ℃和40 ℃處理下影響菌絲生長勢，45 ℃處理影響菌絲生長速度和生長勢，而50 ℃處理為白囊耙齒菌的致死溫度。

3? ?結(jié)論與討論

研究結(jié)果表明，適于慶陽市野生白囊耙齒菌培養(yǎng)的最佳碳源為果糖，最佳氮源為酵母膏，最佳培養(yǎng)溫度為25 ℃。野生白囊耙齒菌生長對pH的適應(yīng)性較廣，pH 5.0～10.0均可以很好生長，且差異不顯著。其致死溫度為50 ℃條件下處理15 min。

白囊耙齒菌在藥理方面的研究較多[8 - 11 ]，但對其培養(yǎng)條件的研究較少見。王忠艷等[12 ]對長白山林區(qū)白耙齒菌子實(shí)體分離純化得到的菌株進(jìn)行最佳培養(yǎng)基配方研究，認(rèn)為其生長最佳碳源為淀粉、最佳氮源為酵母膏。于萍等[13 ]對長白山野生白耙齒菌研究的結(jié)果表明，YPAD培養(yǎng)基為其菌絲體生長的最佳固體培養(yǎng)基、最佳培養(yǎng)溫度為29～32℃，以29 ℃為最佳;最適pH為6.5～7.5，以7.0最佳。本研究結(jié)果與王忠艷研究的最佳氮源一致，而最佳碳源不一致，可能是因?yàn)椴煌a(chǎn)地環(huán)境菌株之間的差異;與于萍研究結(jié)果不一致可能是因?yàn)椴捎玫呐囵B(yǎng)基不同，也有可能是與產(chǎn)地環(huán)境不同菌株的生物學(xué)特性不一樣。

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收稿日期：2022 - 03 - 14

基金項(xiàng)目：2021年度甘肅省重點(diǎn)人才項(xiàng)目（2021RCXM73）;甘肅省中藥材產(chǎn)業(yè)體系種子種苗繁育崗位項(xiàng)目。

作者簡介：張秀麗（1983 — ），女，甘肅環(huán)縣人，農(nóng)藝師，研究方向?yàn)樗幱弥参镌耘嗉夹g(shù)研究與示范推廣。Email：996458411@qq.com.。

通信作者：劉亞亞（1983 — ），女，甘肅慶城人，高級(jí)農(nóng)藝師，研究方向?yàn)樗幱弥参镌耘嗉夹g(shù)研究與示范推廣。Email： 362902941@qq.com。