妊娠高血壓綜合征患者血清高分子量脂聯(lián)素水平對滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇的影響

廖文珺 王 潔 (.惠州市惠東縣人民醫(yī)院，廣東 惠州 56300；.惠州市惠東縣第二人民醫(yī)院，廣東 惠州 5635)

妊娠期高血壓是孕婦在妊娠期常患有的一種比較特殊的疾病，在我國近年來的調(diào)查研究表明，妊娠期高血壓發(fā)病率較其他妊娠期疾病高，其對孕婦的生理以及心理均會產(chǎn)生極大的影響，嚴(yán)重者則會危機(jī)患者其他器官組織和腺體，從而影響胎兒的正常發(fā)育[1-2]。脂聯(lián)素(ADP)作為一種由脂肪細(xì)胞特異性分泌的細(xì)胞因子，其在體內(nèi)以三聚體、六聚體和高分子質(zhì)量(HMW)多聚體等結(jié)構(gòu)形式存在，HMW-ADP是其主要活性形式[3]。臨床研究[4]發(fā)現(xiàn)，一些妊娠期高血壓患者體內(nèi)的ADP水平表現(xiàn)出了顯著的降低，但目前國內(nèi)外針對原發(fā)性高血壓人群HMW-ADP的研究鮮見報(bào)道。凋亡是滋養(yǎng)細(xì)胞在應(yīng)對應(yīng)激反應(yīng)時表現(xiàn)出的一種重要調(diào)節(jié)性死亡方式，該通路可由多種信號通路相互作用相互介導(dǎo)形成，其中p53作為最重要的一個調(diào)控因子，該因子的累積水平的升高常常伴隨著凋亡水平升高，從而誘發(fā)子癇等一系列與妊娠相關(guān)的疾病[5]。本研究選取妊娠期高血壓患者共計(jì)100例，從而研究妊高征患者血清HMW-ADP水平對滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2016年11月～2018年11月期間我科的妊娠期高血壓患者共計(jì)100例，平均年齡為(24.35±6.98)歲。按照患者的患病程度將其分為輕度先兆子癇患者共計(jì)33例，患者平均年齡為(24.35±6.98)歲，懷孕時長為(31.98±2.15)周；中度先兆子癇患者共計(jì)33例，患者平均年齡為(26.09±4.31)歲，懷孕時長為(32.11±4.11)周；重度先兆子癇患者共計(jì)34例，患者平均年齡為(25.33±3.69)歲，懷孕時長為(31.76±3.21)周。以32例健康孕婦作為對照組。兩組孕婦的年齡、體重以及身體其他指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均表現(xiàn)為妊娠期高血壓；均為單胎發(fā)育；高血壓孕婦未選擇其他方式進(jìn)行治療；患者均為自愿參與本次調(diào)查研究，患者本人以及家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前患有高血壓和腎臟相關(guān)等疾??；入選者臨床資料信息不完整；無法積極配合本次研究。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2方法：清晨，取孕婦空腹?fàn)顟B(tài)下3 ml靜脈血于抗凝管中，在溫度為4℃的條件下按照2 500 r/min的速度離心處理10 min，取處理后的上清液貯存于溫度為-80℃的超低溫冰箱中備用；于清晨取所有孕婦尿液10 ml，根據(jù)試劑盒相關(guān)使用說明測定相關(guān)指標(biāo)；當(dāng)各孕婦胎盤經(jīng)剖宮產(chǎn)娩出后，在無菌條件下剝離胎盤與母體分離面的膜狀組織，靠近臍帶插入點(diǎn)于分離面隨機(jī)切取面積約為5 cm2的胎盤組織，組織厚度不能超過0.5 cm，液氮罐中速凍備用。胎盤病理免疫組織化表達(dá)，見圖1。

1.3觀測指標(biāo)及方法

1.3.1各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較分析:采用NII356-ATA型全自動生化分析儀中測定各樣品中的血清HMW-ADP、瘦素(LEP)、血清胱抑素C(CysC)和血清肌酐(Scr)水平；同時詳細(xì)記錄各組孕產(chǎn)婦收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)水平，計(jì)算平均動脈壓(MAP)。

圖1 胎盤病理免疫組織化表達(dá)(×200)

1.3.2各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較分析:取各組患者生產(chǎn)后的胎盤組織，組織分離后將組織浸于預(yù)冷的生理鹽水中清洗3次后，采用RNA抽提和RT-PCR法檢測各組細(xì)胞TSG mRNA和蛋白表達(dá)水平。

1.3.3各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較:取各組患者生產(chǎn)后的胎盤組織，組織分離后將組織浸于預(yù)冷的生理鹽水中清洗3次后，收集并重懸細(xì)胞，采用CCK-8法檢測各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖情況；通過24孔、孔徑8 μm的Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力體外經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。

1.3.4各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較:統(tǒng)計(jì)各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率以及各組孕產(chǎn)婦分娩后記錄各組胎兒胎齡、體重、體重指數(shù)(BMI)及胎盤質(zhì)量等指標(biāo)。

1.3.5相關(guān)性分析：以血清HMW-ADP為因變量多元逐步回歸分析及Spearman相關(guān)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件(美國IBM公司)進(jìn)行單因素方差分析，t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用多元回歸分析Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較:各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中對照組孕婦的HMW-ADP和LEP水平較輕度組、中度組和對照組高，而CysC和Scr則較低，并且隨著孕婦患病程度加重，HMWA-ADP和LEP水平越來越低，CysC和Scr水平越來越高；患病組孕婦的SBP、DBP和MAP均表現(xiàn)為異常，隨著孕婦患病程度加重，各壓力指標(biāo)也隨之增大。見表1。

表1 各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較

2.2各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較：患病組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，并且隨著時間延長，各組水平表現(xiàn)出了增加的趨勢，而對照組孕婦的p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中重度組孕婦的p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平在0 h到72 h分別由(0.87±0.31)和(0.81±0.46)增加到了(1.24±0.33)和(1.14±0.25)，而輕度組孕婦僅由(0.44±0.08)和(0.57±0.23)增加到了(0.90±0.21)和(0.91±0.34)。見表2，圖2，圖3。

2.3各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較：各組組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，并且隨著時間延長，各組水平表現(xiàn)出了增加的趨勢，另外，患病組細(xì)胞的增殖和遷移能力均小于對照組。其中重度組孕婦的p53增殖和遷移能力在0 h到72 h分別由(1.06±0.34)和(0.98±0.39)增加到了(1.51±0.98)和(1.55±0.62)，而輕度組孕婦則由(1.56±0.84)和(2.09±1.07)增加到了(3.53±1.49)和(3.21±1.98)。見表3。

表2 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較

圖2 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA表達(dá)條形圖

圖3 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53蛋白表達(dá)條形圖

表3 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較

2.4各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較：各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率相比均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中對照組繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率為0%，而輕度組、中度組和重度組的發(fā)生率則分別為12.12%、23.33%和35.29%，表明患有妊娠高血壓綜合征的孕婦出現(xiàn)繼發(fā)妊娠子癇的概率較健康孕婦高；各組胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)胎齡、體重、BMI以及胎盤質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.5以血清HMW-ADP為因變量的多元逐步回歸結(jié)果分析：以血清HMW-ADP為因變量，LEP、CysC、Scr、SBP、DBP和MAP作為自變量，結(jié)果表明，血清HMW-ADP為因變量與LEP(OR=-0.002，95%CI：0.021～-0.004，P=0.001)、CysC(OR=-0.325，95%CI：-0.543～-0.091，P=0.004)、Scr(OR=-0.934，95%CI：0.345～1.823，P=0.012)、SBP(OR=0.321，95%CI：0.119～1.723，P=0.009)、DBP(OR=0.092，95%CI：0.076～1.931，P=0.002)和MAP(OR=0.173，95%CI：0.123～0.934，P=0.018)各指標(biāo)之間存在密切的相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表4 各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較

表5 以血清HMW-ADP為因變量的多元逐步回歸結(jié)果

2.6血清HMW-ADP水平、滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生與先兆子癇嚴(yán)重程度相關(guān)性分析：血清HMW-ADP水平與滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生之間存在顯著的相關(guān)性，輕度組、中度組和重度組與HMWA、p53 mRNA和p53蛋白水平以及繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率之間均存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。見表6。

表6 血清HMW-ADP水平與滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生與先兆子癇嚴(yán)重程度相關(guān)性分析(r值)

3 討論

妊娠期高血壓患者若不能得到及時診斷和有效治療則存在迅速惡化的可能性，引發(fā)一系列不良妊娠結(jié)果，如胎盤早剝以及出血性休克等嚴(yán)重的并發(fā)癥，同時還會導(dǎo)致胎兒發(fā)育不良[6-8]。因此，準(zhǔn)確判斷妊娠期高血壓患者病情的發(fā)生和發(fā)展就尤為重要。脂聯(lián)素是脂肪組織特異性分泌的一種膠原樣細(xì)胞因子，HMW-ADP在體內(nèi)主要參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)以及免疫等重要的過程。妊娠期高血壓的發(fā)生不但與肥胖、胰島素抵抗和糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切的相關(guān)性，同時還會調(diào)控妊娠期孕婦體內(nèi)糖代謝過程[9-10]。妊娠期高血壓患者胰島素抵抗較健康孕婦顯著增強(qiáng)，而HMW-ADP又能增強(qiáng)體內(nèi)胰島素的敏感性，因而HMW-ADP水平變化與妊娠期高血壓之間存在密切的聯(lián)系[11]。凋亡的發(fā)生是滋養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)對應(yīng)激的一種重要調(diào)節(jié)性死亡方式，結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，妊娠期高血壓會引發(fā)體內(nèi)p53大量累積，滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)化就會失衡[12]。本研究結(jié)果顯示，妊娠期高血壓患者血清HMW-ADP水平會隨著孕婦患病程度加重而降低，且p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平失衡，繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率越來越高，這樣就表明低HMW-ADP水平可能參與了繼發(fā)妊娠子癇的發(fā)生發(fā)展。

子癇的發(fā)病機(jī)制是較為復(fù)雜的，而其中一個最重要的發(fā)病機(jī)制就算胎盤缺血或者缺氧導(dǎo)致的，這一過程的發(fā)生會進(jìn)一步引發(fā)胰島素抵抗、氧化應(yīng)激和免疫失衡，從而導(dǎo)致母體高血壓的發(fā)生[13-15]。血清HMW-ADP與子癇的發(fā)病密切相關(guān)，在子癇前期的發(fā)病過程中起到了一定的作用。在整個妊娠過程中，任何一個階段任何一個因素發(fā)生失調(diào)都可能導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞p53功能出現(xiàn)異常而引發(fā)妊娠期間的相關(guān)疾病[16-18]。若胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞p53侵襲不足就會引發(fā)孕婦自然流產(chǎn)、子癇前期以及胎兒宮內(nèi)生長受限等病理疾病，而滋養(yǎng)細(xì)胞p53侵襲過度則會導(dǎo)致葡萄胎、絨癌以及胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等[19-20]，因此，深入探索影響滋養(yǎng)細(xì)胞p53的生物學(xué)功能，也就有利于進(jìn)一步揭示子癇前期的發(fā)病機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示HMW-ADP的變化參與了繼發(fā)妊娠子癇的發(fā)生發(fā)展以及滋養(yǎng)細(xì)胞p53的平衡性，本研究結(jié)果在促進(jìn)妊娠期高血壓患者快速恢復(fù)的同時，也為該疾病的后續(xù)深入治療研究奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。