血液透析病人血清維生素D3與單核細胞TLRs信號通路活化及不良心血管事件的關(guān)系

靳四海，孟景昱，徐春苗

血液透析是終末期腎病病人維持機體代謝穩(wěn)定，延長生存時間的治療方式，隨著透析時間延長，病人可能出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)，并對重要組織臟器功能產(chǎn)生影響，導(dǎo)致血液透析病人死亡[1-2]。維生素D3是調(diào)節(jié)鈣磷代謝的重要激素，兼具抗炎、抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性等作用。有研究顯示，血清活性維生素D3水平與維持性血液透析病人的營養(yǎng)狀態(tài)直接相關(guān)，故推測其與此類病人心血管事件發(fā)生關(guān)系緊密[3]。本研究檢測血液透析病人血清活性維生素D3水平，探討其與機體炎癥反應(yīng)、心血管事件發(fā)生的關(guān)系，旨在明確血液透析病人不良心血管事件發(fā)生的危險因素并進行早期干預(yù)。

1 資料與方法

1.1 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：接受規(guī)律血液透析≥3個月；年齡18～79歲；病人簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：長期服用糖皮質(zhì)激素；合并嚴(yán)重冠心病、瓣膜性心臟病、病毒性心肌炎等心血管疾??；既往腦梗死、腦出血、腦外傷病史。病例脫落標(biāo)準(zhǔn)：研究中途未經(jīng)主管醫(yī)師同意自主離組；隨訪期間突發(fā)急癥；拒絕進行隨訪。

1.2 一般資料 選取2019年1月—2020年1月在我院進行血液透析的病人128例作為治療組，同期在我院進行體檢的健康者100名作為對照組。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。詳見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核并批準(zhǔn)。

表1 兩組一般資料比較

1.3 血清25羥基維生素D3[25(OH)D3]水平檢測及分組 入組即刻，留取兩組研究對象空腹外周靜脈血標(biāo)本3.0 mL，分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測25(OH)D3水平。25(OH)D3中位數(shù)為32.4 nmol/L，根據(jù)25(OH)D3中位數(shù)將治療組病人進一步分為高VitD3組和低VitD3組，各64例。

1.4 外周血單核細胞Toll樣受體(TLRs)信號通路相關(guān)基因 入組即刻留取治療組病人空腹外周靜脈血標(biāo)本，分離單核細胞后采用Trizol提取細胞總RNA，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將其轉(zhuǎn)錄為cDNA并保存。參照熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒擴增TLR2、TLR4 mRNA。TLR2正向引物為 5′-AGCTTGTAGCGTAGTAGCT，反向引物為3′-CTGATGAACGTTAGCGTA；TLR4正向引物為5′-AATGCTGAACCGTGCGT，反向引物為3′-CCTGAAGCTGAAGCTGTA。計算對應(yīng)基因的相對表達量。

1.5 炎性因子 取治療組1.3中處理過的血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-17(IL-17)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。

1.6 不良心血管事件發(fā)生情況 入組后隨訪6個月，記錄不同血清25(OH)D3水平血液透析病人不良心血管事件發(fā)生情況，包括心肌梗死、心力衰竭、腦梗死、周圍血管病、透析相關(guān)低血壓。

2 結(jié) 果

2.1 治療組和對照組血清25(OH)D3水平比較 治療組血清25(OH)D3水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。詳見表2。

表2 治療組和對照組血清25(OH)D3水平比較(±s) 單位：nmol/L

2.2 不同25(OH)D3水平病人單核細胞TLRs信號通路相關(guān)基因表達比較 低VitD3組外周血TLR2、TLR4 mRNA表達高于高VitD3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。詳見表3。

表3 不同25(OH)D3水平病人單核細胞TLRs信號通路相關(guān)基因表達比較(±s)

2.3 不同25(OH)D3水平病人炎性因子比較 低VitD3組血清IL-2、IL-6、IL-17、TNF-α水平高于高VitD3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。詳見表4。

表4 不同25(OH)D3水平病人炎性因子比較(±s) 單位：pg/mL

2.4 不同25(OH)D3水平病人不良心血管事件發(fā)生情況比較 隨訪期間，低VitD3組不良心血管事件發(fā)生率高于高VitD3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表5。

表5 不同25(OH)D3水平病人不良心血管事件發(fā)生情況比較 單位：例(%)

2.5 不良心血管事件影響因素的Logistic回歸分析 以不良心血管事件為因變量，以單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的25(OH)D3、TLR2、TLR4、IL-2、IL-6、IL-17、TNF-α作為自變量，進行Logistic回歸分析，最終25(OH)D3、TLR4、IL-6、IL-17、TNF-α納入方程，結(jié)果顯示：25(OH)D3升高是發(fā)生不良心血管事件的保護因素，TLR4、IL-6、IL-17、TNF-α升高是發(fā)生不良心血管事件的危險因素。詳見表6。

表6 不良心血管事件影響因素的Logistic回歸分析

3 討 論

維持性血液透析是腎臟替代的主要手段，隨著透析時間延長，機體微炎癥狀態(tài)加劇，成為影響病人預(yù)后的重要因素[4-5]。終末期腎病病人維持性血液透析過程中微炎癥狀態(tài)可能與以下幾方面有關(guān)：腎小球濾過率下降導(dǎo)致炎性因子排出減少[6-7]，體內(nèi)蓄積的毒素刺激血管通路、誘發(fā)炎癥介質(zhì)合成釋放，透析膜與血液長期接觸[8]，透析病人長期容量負荷過重[9]。25(OH)D3是維生素D3的活性成分，與相應(yīng)受體結(jié)合后可調(diào)節(jié)鈣磷代謝，單核細胞等炎質(zhì)細胞中有維生素D3受體的表達，推測其對機體微炎癥狀態(tài)有一定的干預(yù)作用。治療組血清25(OH)D3水平降低，說明維持性透析病人存在活性維生素D3異常低表達。

為明確活性維生素D3與機體炎癥反應(yīng)及心血管不良反應(yīng)間的關(guān)系，本研究進一步根據(jù)治療組病人血清25(OH)D3中位數(shù)分為高VitD3組和低VitD3組，結(jié)果顯示：低VitD3組外周血TLR2、TLR4 mRNA表達量較高。TLR2、TLR4均是單核細胞TLRs信號通路的下游因子，其激活并大量合成是導(dǎo)致機體炎癥反應(yīng)的重要機制。本研究結(jié)果提示，25(OH)D3缺乏可能導(dǎo)致其對單核細胞TLRs信號通路的抑制作用減弱，TLR2、TLR4大量釋放并促進一系列細胞因子產(chǎn)生，參與血液透析病人微炎癥的發(fā)生發(fā)展。

多項研究證實，血液透析病人IL-2、IL-6、IL-17、TNF-α高表達，且隨著透析時間延長，上述炎癥介質(zhì)水平呈上升趨勢[10-12]。本研究結(jié)果顯示，低VitD3組血清IL-2、IL-6、IL-17、TNF-α水平較高，說明25(OH)D3缺乏導(dǎo)致促炎因子合成釋放增加，與單核細胞TLRs信號通路活化有關(guān)，再次明確了25(OH)D3分泌不足的促炎作用。

本研究結(jié)果顯示，低VitD3組不良心血管事件總發(fā)生率較高，提示活性維生素D3表達缺失可增加心血管事件發(fā)生率。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，25(OH)D3升高是發(fā)生不良心血管事件的保護因素，TLR4、IL-6、IL-17、TNF-α升高是發(fā)生不良心血管事件的危險因素。

綜上所述，血液透析病人活性維生素D3水平相對較低，是導(dǎo)致病人全身微炎癥狀態(tài)及遠期不良心血管事件發(fā)生率增加的危險因素之一。早期監(jiān)測血液透析病人25(OH)D3水平并采取相應(yīng)干預(yù)措施，可能在改善遠期預(yù)后方面具有重要意義。