基于氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定葡萄果實(shí)與葡萄酒中揮發(fā)性酚

楊薇熹，張思奇，向小鳳，石 英，段長青，蘭義賓

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，葡萄與葡萄酒研究中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部葡萄酒加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100083）

揮發(fā)性酚在葡萄酒中質(zhì)量濃度范圍在μg/L至mg/L級別，由于容易辨識的香氣特征和較低的感官閾值，該類物質(zhì)極易影響和修飾葡萄酒的風(fēng)味。較低濃度的揮發(fā)性酚常賦予葡萄酒特殊的煙熏、皮革、香料、烘烤等香氣，但是在高濃度下表現(xiàn)為令人不愉悅的馬廄味、酚味、藥味等，破壞葡萄酒香氣的協(xié)調(diào)性。葡萄酒中的揮發(fā)性酚可能來源于橡木制品，同時(shí)，在未過桶的葡萄酒中也能檢測到揮發(fā)性酚的存在，這部分揮發(fā)性酚來源于葡萄果實(shí)。葡萄果實(shí)中的揮發(fā)性酚主要以游離態(tài)和糖苷結(jié)合態(tài)的形式存在。

由于揮發(fā)性酚在葡萄果實(shí)和葡萄酒中含量較低，再加上基質(zhì)較為復(fù)雜，常規(guī)的檢測技術(shù)難以實(shí)現(xiàn)葡萄果實(shí)與葡萄酒中揮發(fā)性酚的準(zhǔn)確定量。目前，已報(bào)道多種揮發(fā)性酚的靶向檢測方法，其中，由于較高的分離效率和靈敏度，氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）聯(lián)用技術(shù)在揮發(fā)性酚的檢測分析中最為常見。近年來發(fā)展了基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry，GC-QqQ-MS/MS）技術(shù)的多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）方法，該方法同時(shí)具備較高的分離度和較強(qiáng)的靶向性，非常適用于復(fù)雜基質(zhì)中痕量揮發(fā)性組分的定量分析。另外，為了進(jìn)一步提高檢測效果，目前報(bào)道了多種揮發(fā)性酚的提取和富集方法，包括頂空固相微萃取、攪拌棒吸附萃取、液液萃取、固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）等富集技術(shù)，以及乙酸酯化、硅烷化等衍生化方法。其中SPE方法操作簡便，可以在富集目標(biāo)物質(zhì)的同時(shí)除去部分雜質(zhì)，在多種基質(zhì)中的應(yīng)用均表現(xiàn)出較強(qiáng)的有效性和選擇性。但是，已報(bào)道的SPE法僅針對某幾種揮發(fā)性酚的提取和檢測，并不能完整描繪葡萄酒中揮發(fā)性酚的整體輪廓。另外，這些方法僅適用于葡萄酒基質(zhì)，而葡萄果實(shí)中揮發(fā)性酚及其糖苷態(tài)的檢測方法鮮有報(bào)道。為了進(jìn)一步研究葡萄酒中揮發(fā)性酚來源、轉(zhuǎn)化關(guān)系和演變規(guī)律，迫切需要建立葡萄果實(shí)中游離態(tài)和結(jié)合態(tài)揮發(fā)性酚的富集和定量方法。Allen等用SPE方法分別提取了果實(shí)中的游離態(tài)和糖苷結(jié)合態(tài)揮發(fā)性酚，采用酸解法對糖苷態(tài)揮發(fā)性酚進(jìn)行水解，然后對釋放出的揮發(fā)性酚進(jìn)行檢測。此外，糖苷態(tài)香氣物質(zhì)的水解釋放還能采用酶解法，酶解法具備更強(qiáng)的選擇性。

基于以上研究現(xiàn)狀，本研究采用SPE前處理方法，分別提取游離態(tài)和糖苷態(tài)揮發(fā)性酚，采用酶解法對果實(shí)中糖苷態(tài)揮發(fā)性酚進(jìn)行水解?；贕C-QqQ-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，建立葡萄果實(shí)與葡萄酒中揮發(fā)性酚的MRM定量方法，并對SPE條件進(jìn)行優(yōu)化，以期為葡萄與葡萄酒中揮發(fā)性酚的研究提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選用2020年產(chǎn)自新疆瑪納斯的‘赤霞珠’葡萄果實(shí)和一款2018年‘赤霞珠’干紅葡萄酒進(jìn)行方法的優(yōu)化以及準(zhǔn)確性、精密度的評價(jià)。分別在模擬葡萄酒和模擬葡萄汁體系中考察方法的線性關(guān)系。模擬葡萄酒為體積分?jǐn)?shù)10%的乙醇溶液，加入7 g/L酒石酸、4 g/L葡萄糖，用氫氧化鈉將溶液pH值調(diào)至3.3。模擬葡萄汁為含有160 g/L葡萄糖和7 g/L酒石酸的溶液，用氫氧化鈉將溶液pH值調(diào)至3.3。方法驗(yàn)證采用10 款商業(yè)干紅葡萄酒和10個(gè)釀酒葡萄果實(shí)樣品，見表1。

表1 用于方法驗(yàn)證的葡萄酒和葡萄果實(shí)樣品Table 1 Wine and grape samples used for method validation

苯酚（99.9%）、鄰甲基酚（≥99%）、間甲基酚（≥99%）、對甲基酚（≥99%）、4-乙基苯酚（99%）、3-乙基苯酚（≥98%）、4-乙烯基苯酚（95%）、愈創(chuàng)木酚（≥98%）、4-甲基愈創(chuàng)木酚（99%）、4-乙基愈創(chuàng)木酚（≥98%）、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚（98%）、4-丙基愈創(chuàng)木酚（≥99%）、丁香酚（98%）、異丁香酚（≥99%）、紫丁香酚（99%）、香草醛（≥98%）、丁香醛（≥98%）、松柏醛（98%）、3,4-二甲基苯酚（98%） 美國Sigma-Aldrich公司；氫氧化鈉、葡萄糖、檸檬酸、十二水合磷酸氫二鈉（均為分析純） 北京化工廠；酒石酸（分析純） 津科精細(xì)化工研究所；乙醇、甲醇、二氯甲烷（均為色譜純） 美國Fisher公司；交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮（polyvinylpolypyrrolidone，PVPP）、--葡萄糖酸內(nèi)酯（均為分析純） 生工生物工程（上海）股份有限公司；無水硫酸鈉（色譜純，99%） 上海麥克林公司；AR2000糖苷酶 荷蘭DSM公司；固相萃取柱Cleanert PEP-SPE（500 mg/6 mL） 天津博納艾杰爾科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

BSA223S分析天平（精度0.000 1 g） 德國賽多利斯有限公司；A 11 B S025果實(shí)研磨機(jī) 德國IKA公司；Micro 17R離心機(jī) 美國賽默飛世爾科技有限公司；Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀 中國瑞科集團(tuán)股份有限公司；Intuvo 9000-7010BGC-QqQ-MS/MS聯(lián)用儀、7693自動進(jìn)樣器 美國安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

葡萄果實(shí)取汁：參照Lan Yibin等的方法，稱取保存于-80 ℃冰箱的葡萄果實(shí)50 g，在液氮保護(hù)下除去果梗和種子，加入0.5 g-葡萄糖酸內(nèi)酯和1 g PVPP，用果實(shí)研磨機(jī)破碎為粉末狀；粉末在4 ℃密閉環(huán)境下浸漬4 h，然后在4 ℃、8 000 r/min條件下離心10 min，收集上層澄清葡萄汁。

葡萄果實(shí)和葡萄酒游離態(tài)揮發(fā)性酚的提?。翰捎孟嗤腟PE法分別提取葡萄汁和葡萄酒中的游離態(tài)揮發(fā)性酚。利用加入標(biāo)準(zhǔn)品的‘赤霞珠’葡萄酒進(jìn)行SPE方法的優(yōu)化，各目標(biāo)化合物的加標(biāo)質(zhì)量濃度為。分別對去離子水淋洗體積和二氯甲烷洗脫體積這2個(gè)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，通過比較不同條件下各目標(biāo)化合物的峰面積大小評價(jià)萃取效率，選擇能使各目標(biāo)化合物出峰面積最大的方法作為最優(yōu)萃取方案。樣品經(jīng)濾網(wǎng)過濾后，量取10 mL置于50 mL試管中，加入10 μL內(nèi)標(biāo)（3,4-二甲基苯酚，0.2 g/L溶解于乙醇）。Cleanert PEP-SPE萃取柱依次經(jīng)過10 mL二氯甲烷、10 mL甲醇和10 mL去離子水活化后，樣品以2 mL/min流速通過萃取柱，用去離子水洗去糖、酸和大分子的極性物質(zhì)，比較3個(gè)去離子水淋洗體積（5、10 mL和15 mL）對萃取效果的影響；游離態(tài)揮發(fā)性酚用二氯甲烷洗脫，比較了3個(gè)洗脫體積（5、10 mL和15 mL）對萃取效果的影響。收集的二氯甲烷洗脫液用1.5 g無水硫酸鈉除水后氮吹濃縮至500 μL待測。

葡萄汁中糖苷態(tài)揮發(fā)性酚的提取：葡萄汁在提取了游離態(tài)揮發(fā)性酚后，用10 mL甲醇溶液洗脫SPE柱中的糖苷結(jié)合態(tài)揮發(fā)性酚。結(jié)合態(tài)揮發(fā)性酚的酶解參考Allen等方法，收集的甲醇洗脫液在30 ℃真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后，用10 mL檸檬酸-磷酸緩沖液（0.2 mol/L，pH 5.0）復(fù)溶，加入200 μL AR2000溶液（0.1 g/mL，溶于檸檬酸-磷酸緩沖液），轉(zhuǎn)移至密閉離心管中，40 ℃恒溫酶解16 h。酶解后的溶液采用游離態(tài)揮發(fā)性酚的提取方法，提取酶解釋放出的揮發(fā)性酚。

1.3.2 GC-QqQ-MS/MS分析條件

GC條件：HP-5MS色譜柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；載氣為高純氦氣（＞99.999%），流速1.0 mL/min。進(jìn)樣量1 μL，采用4∶1分流進(jìn)樣方式，進(jìn)樣口溫度250 ℃。升溫程序：起始溫度40 ℃，以5 ℃/min升至80 ℃，以2 ℃/min升至120 ℃，以5 ℃/min升至160 ℃，最后以30 ℃/min升至220 ℃，后運(yùn)行以280 ℃保持1 min。

MS條件：電子電離源；電離能量70 eV；離子源溫度230 ℃；輔助加熱器溫度300 ℃；MS1和MS2四極桿溫度均150 ℃。猝滅氣為氦氣，流速2.25 mL/min；碰撞氣為氮?dú)?，流?.5 mL/min。首先采用全掃描模式檢測目標(biāo)化合物，確定各物質(zhì)保留時(shí)間，選擇1～2個(gè)豐度較高、質(zhì)荷比（/）較大的碎片離子作為前級離子。采用產(chǎn)物離子掃描模式對目標(biāo)物質(zhì)前級離子進(jìn)行二級質(zhì)譜掃描，在碎片離子中選擇豐度較高的離子作為相對應(yīng)的產(chǎn)物離子，得到特征離子對（前級離子→產(chǎn)物離子），優(yōu)化碰撞能量，建立MRM方法。

1.3.3 方法評價(jià)

靈敏度和線性關(guān)系：用模擬葡萄酒（模擬葡萄汁）配制第1梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液（），各化合物質(zhì)量濃度見表2。按照2 倍梯度稀釋方法分別得到12個(gè)梯度的模擬葡萄酒（或模擬葡萄汁）標(biāo)準(zhǔn)溶液。在每個(gè)質(zhì)量濃度梯度中均加入10 μL內(nèi)標(biāo)（3,4-二甲基苯酚，0.2 g/L）。各質(zhì)量濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過與樣品相同的前處理方法和GC-QqQ-MS/MS分析后，用目標(biāo)化合物和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（）與相對應(yīng)的質(zhì)量濃度（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將低質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液繼續(xù)稀釋，直到目標(biāo)化合物的峰面積比不再成線性降低（代入標(biāo)準(zhǔn)曲線后＜0.99），此時(shí)物質(zhì)質(zhì)量濃度作為線性范圍的最小值。檢出限和定量限的計(jì)算參考Qian Xu等的方法，以信噪比等于3對應(yīng)的化合物質(zhì)量濃度為檢出限，信噪比等于10對應(yīng)的化合物質(zhì)量濃度為定量限。

準(zhǔn)確性和精密度：通過計(jì)算在葡萄汁和葡萄酒基質(zhì)中目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收率評價(jià)方法的準(zhǔn)確性。分別用‘赤霞珠’干紅葡萄酒和‘赤霞珠’葡萄汁作為基質(zhì)溶液。在100 mL容量瓶中分別加入混標(biāo)，用基質(zhì)溶液定容，得到2種基質(zhì)下高濃度（H）和低濃度（L）的加標(biāo)樣品（表2）。用1.3.1節(jié)和1.3.2節(jié)方法對原基質(zhì)溶液和加標(biāo)樣品進(jìn)行提取和檢測，重復(fù)6 次實(shí)驗(yàn)，計(jì)算加標(biāo)回收率。

采用低濃度加標(biāo)樣品，考察日內(nèi)、日間檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）以評價(jià)方法的精密度。同一日內(nèi)不同時(shí)間提取檢測5 次，計(jì)算日內(nèi)RSD，評價(jià)日內(nèi)精密度；連續(xù)5 d同一時(shí)間進(jìn)行提取檢測，計(jì)算日間RSD，評價(jià)日間精密度。

表2 揮發(fā)性酚類物質(zhì)CAS編號、感官閾值及方法優(yōu)化和評價(jià)樣品的加標(biāo)質(zhì)量濃度Table 2 CAS number and sensory threshold of volatile phenols and spiked concentrations used for method optimization and evaluation

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

GC-QqQ-MS/MS數(shù)據(jù)分析采用Agilent Quantitative Analysis B.10.00軟件進(jìn)行，目標(biāo)物質(zhì)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間、離子碎片信息結(jié)合NIST 11標(biāo)準(zhǔn)譜庫比對進(jìn)行定性分析。定量分析采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法。單因素方差分析（Duncan，＜0.05）采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法優(yōu)化

2.1.1 儀器參數(shù)優(yōu)化

表3列出優(yōu)化后MRM方法中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間、特征離子對和碰撞能量等信息。用該方法檢測加標(biāo)的葡萄酒樣品，可以檢測到20個(gè)目標(biāo)物質(zhì)峰（其中異丁香酚存在順反異構(gòu)）和1個(gè)內(nèi)標(biāo)峰，目標(biāo)物質(zhì)所選特征離子對的掃描不受樣品中其他物質(zhì)干擾，物質(zhì)分離度較高、峰形良好（圖1）。

表3 揮發(fā)性酚檢測質(zhì)譜參數(shù)Table 3 Mass spectrometric parameters for determination of volatile phenols

續(xù)表3

圖1 加標(biāo)葡萄酒樣品中目標(biāo)物質(zhì)MRM色譜圖Fig. 1 MRM chromatogram of target compounds spiked in wine samples

2.1.2 淋洗體積優(yōu)化

圖2 去離子水淋洗體積對目標(biāo)化合物響應(yīng)的影響Fig. 2 Effect of washing with different volumes of deionized water on the response for target analytes

在二氯甲烷洗脫體積為10 mL條件下，采用3種不同體積（5、10 mL和15 mL）去離子水淋洗萃取柱，比較目標(biāo)化合物的出峰面積以評價(jià)不同體積去離子水淋洗后的萃取效果。與5 mL去離子水淋洗體積相比，采用10 mL去離子水淋洗后4-乙基愈創(chuàng)木酚、松柏醛和異丁香酚的響應(yīng)顯著降低；采用15 mL去離子水淋洗后間甲基酚、4-丙基愈創(chuàng)木酚的響應(yīng)顯著降低（圖2）。去離子水淋洗可以減少糖類和有機(jī)酸類物質(zhì)，除去體系中的親水性雜質(zhì)，但同時(shí)也可能溶解帶走部分目標(biāo)化合物，使其檢測響應(yīng)降低。此外，其他目標(biāo)化合物的響應(yīng)在不同淋洗體積下沒有表現(xiàn)出顯著差異（圖2）。綜合考慮各目標(biāo)化合物的萃取效果，選擇5 mL去離子水用量作為最佳淋洗體積。

2.1.3 洗脫體積優(yōu)化

在去離子水淋洗體積為5 mL的條件下，采用3種體積（5、10 mL和15 mL）二氯甲烷進(jìn)行洗脫，比較目標(biāo)化合物的出峰響應(yīng)，以評價(jià)不同洗脫體積對萃取效果的影響。甲基酚類、乙基苯酚、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚和丁香酚的響應(yīng)在不同洗脫體積下無顯著差異。采用5 mL二氯甲烷洗脫，苯酚和4-乙烯基苯酚的響應(yīng)顯著低于10 mL和15 mL的洗脫體積（圖3）。洗脫體積較少時(shí)可能存在物質(zhì)洗脫不完全的情況，導(dǎo)致萃取到的目標(biāo)化合物較少。各目標(biāo)化合物在10 mL和15 mL二氯甲烷洗脫后的響應(yīng)沒有顯著差異。綜合考慮各目標(biāo)化合物的萃取效果，選擇10 mL二氯甲烷用量作為最佳洗脫體積。

圖3 二氯甲烷洗脫體積對目標(biāo)化合物響應(yīng)的影響Fig. 3 Effect of elution with different volumes of dichloromethane on the response for target analytes

2.2 方法評價(jià)

在優(yōu)化后的前處理方法和儀器檢測條件下，對該方法的檢出限、定量限、線性關(guān)系、準(zhǔn)確性和精密度進(jìn)行評價(jià)。

2.2.1 線性范圍、檢出限及定量限

在模擬葡萄酒和模擬葡萄汁中，19種目標(biāo)物質(zhì)的檢出限和定量限范圍分別為0.02～1.01 μg/L和0.08～3.36 μg/L，其中有11種物質(zhì)定量限均小于1 μg/L，具有較高靈敏度。本方法中揮發(fā)性酚的檢出限和定量限比前人報(bào)道的液液萃取以及攪拌棒吸附萃取法更低或相近，遠(yuǎn)低于化合物的感官閾值（表2）。此外發(fā)現(xiàn)，4-乙基苯酚和4-乙基愈創(chuàng)木酚的檢出限和定量限均低于其相應(yīng)的乙烯基酚形式（表4），本方法對乙基酚類物質(zhì)的檢測靈敏度比乙烯基酚類更高，該現(xiàn)象與前人報(bào)道相符。

如表4所示，各目標(biāo)化合物在檢測范圍內(nèi)線性關(guān)系較強(qiáng)，回歸系數(shù)（）均大于0.99。相同質(zhì)量濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)液在模擬葡萄汁和模擬葡萄酒中進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，愈創(chuàng)木酚、4-乙基苯酚、3-乙基苯酚和4-丙基愈創(chuàng)木酚等物質(zhì)線性方程的斜率在2種基質(zhì)中有較大差異，這些物質(zhì)在模擬葡萄酒中檢測比在模擬葡萄汁中檢測所得線性方程的斜率更大。說明這些化合物的檢測容易受到基質(zhì)（乙醇和葡萄糖濃度）的影響，在實(shí)際樣品檢測時(shí)，應(yīng)使用相應(yīng)基質(zhì)中測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算。

表4 揮發(fā)性酚檢測線性范圍、檢出限和定量限Table 4 Linear ranges, limits of detection and limits of quantification of volatile phenols

2.2.2 準(zhǔn)確性評價(jià)

19種物質(zhì)在葡萄汁和葡萄酒基質(zhì)中的加標(biāo)回收率分別為81.99%～122.72%和82.59%～112.64%（表5）。除了香草酸在葡萄汁基質(zhì)中的加標(biāo)回收率為122.72%以外，其他物質(zhì)的加標(biāo)回收率都在80%～120%范圍內(nèi)，方法準(zhǔn)確性較高。

表5 揮發(fā)性酚檢測重復(fù)性、重現(xiàn)性及加標(biāo)回收率Table 5 Repeatability, reproducibility and spiked recoveries for the detection of volatile phenols%

續(xù)表5 %

2.2.3 精密度評價(jià)

該方法下，各目標(biāo)化合物日內(nèi)RSD小于8.26%，日間RSD小于13.25%（表5），該方法重復(fù)性良好。

Sousa等利用乙酸酐衍生結(jié)合液液萃取的方法對葡萄酒中的揮發(fā)性酚進(jìn)行檢測，方法的檢出限為1.5～3.9 μg/L，加標(biāo)回收率為67%～126%；Allen等報(bào)道了利用硅烷衍生結(jié)合SPE方法檢測葡萄果實(shí)和葡萄酒中的23種揮發(fā)性酚，方法檢出限為2.5～25 μg/L，加標(biāo)回收率平均為73.9%～114.5%，變異系數(shù)為10.3%～21.3%；本方法的檢出限為0.02～1.01 μg/L（表4），加標(biāo)回收率為81.99%～122.72%范圍，日內(nèi)、日間RSD均小于15%（表5），本方法的準(zhǔn)確性較高，穩(wěn)定性較強(qiáng)。

2.3 葡萄與葡萄酒中揮發(fā)性酚分析

為驗(yàn)證該方法的普遍適用性，對10個(gè)葡萄果實(shí)樣品及10 款干紅葡萄酒的揮發(fā)性酚進(jìn)行測定。20個(gè)樣品中均能檢出19種揮發(fā)性酚，其含量在檢測方法的線性范圍內(nèi)（表2、6）。

檢測到葡萄果實(shí)中香草酸含量均值最高，其游離態(tài)和結(jié)合態(tài)總量為36.04～865.75 μg/L（圖4）。檢測到葡萄酒樣品中，4-乙基苯酚、3-乙基苯酚及4-乙烯基苯酚是干紅葡萄酒中含量均值最高的3種目標(biāo)物，其質(zhì)量濃度范圍較廣，分別為2.43～6 379.99、5.39～3 786.69 μg/L和32.06～869.09 μg/L，樣品間含量差異較大。檢測到一些干紅葡萄酒樣品中，4-乙基苯酚、4-乙烯基苯酚、3-乙基苯酚、4-乙基愈創(chuàng)木酚和4-乙烯基愈創(chuàng)木酚含量遠(yuǎn)高于葡萄果實(shí)中游離態(tài)和結(jié)合態(tài)總和（表4），說明這些物質(zhì)有除糖苷態(tài)以外的其他前體來源。有研究表明，乙基酚類和乙烯基酚類物質(zhì)可能來源于發(fā)酵過程中微生物代謝羥基肉桂酸產(chǎn)生，且該反應(yīng)受到前體物含量、微生物類型、發(fā)酵工藝和陳釀條件等因素的影響。由于受到多種因素的影響，在葡萄酒釀造和陳釀過程中可能不同程度地生成了這些物質(zhì)，所以這類揮發(fā)性酚在干紅葡萄酒中的含量范圍通常較廣（表4），本研究建立方法具備較廣線性范圍，在所需檢測范圍內(nèi)大于0.99，線性較好，可以滿足檢測要求。

表6 10個(gè)葡萄果實(shí)樣品與10 款葡萄酒中揮發(fā)性酚質(zhì)量濃度Table 6 Concentrations of volatile phenols in 10 grape samples and 10 wine samples μg/L

圖4 葡萄果實(shí)（A）與葡萄酒（B）中揮發(fā)性酚的含量分布Fig. 4 Distribution of volatile phenols in grape berry (A) and wine (B) samples

3 結(jié) 論

針對葡萄與葡萄酒中揮發(fā)性酚的檢測建立基于GCQqQ-MS/MS的MRM方法，采用SPE前處理方法結(jié)合糖苷酶酶解法，能夠同時(shí)滿足葡萄汁和葡萄酒中19種揮發(fā)性酚的定量分析。該方法分別在葡萄汁和葡萄酒2種基質(zhì)中進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法具有較高靈敏度（檢出限和定量限范圍分別為0.02～1.01 μg/L和0.08～3.36 μg/L）；在檢測所需含量范圍內(nèi)具備良好的線性關(guān)系（＞0.99）；加標(biāo)回收率為81.99%～122.72%，日間、日內(nèi)RSD不高于13.25%，方法具備較高的準(zhǔn)確度和精密度。