• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    復(fù)合米糠蛋白-卵白蛋白的起泡特性及相關(guān)機理分析

    2022-07-07 03:04:48張燕鵬張曼君刁云春張維農(nóng)胡志雄
    食品科學(xué) 2022年12期
    關(guān)鍵詞:泡沫粒徑蛋白質(zhì)

    張燕鵬,張曼君,刁云春,張維農(nóng),胡志雄,胥 偉,*

    (1.武漢輕工大學(xué) 大宗糧油精深加工教育部重點實驗室,湖北 武漢 430023;2.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,湖北 武漢 430023)

    米糠蛋白(rice bran protein,RBP)不僅氨基酸配比合理均衡,營養(yǎng)價值較高,而且具有低過敏性、高消化率等良好的生理功能特性,因此是一種優(yōu)質(zhì)的植物蛋白質(zhì)資源,特別適合開發(fā)應(yīng)用于嬰幼兒和特殊人群營養(yǎng)配方食品。另外RBP中高含量的白蛋白和球蛋白使其具有較好的溶解性和其他相關(guān)的加工功能特性,如起泡性和乳化性,因此也可被研究作為起泡劑與乳化劑而應(yīng)用于食品加工中。卵白蛋白(ovalbumin,OVA)作為蛋清中的主要蛋白質(zhì),因其分子結(jié)構(gòu)中含有較多的疏水性氨基酸組分,可作為乳化劑和發(fā)泡劑以使得多相體系保持良好的穩(wěn)定特性,因此是食品加工制備過程中一種良好的功能性成分。已有研究表明,RBP在等電點附近的起泡能力較差,而OVA在等電點附近時其起泡能力則較好,這表明不同來源的蛋白質(zhì)根據(jù)環(huán)境因子的變化會表現(xiàn)出不同的起泡特性,這也使得單一蛋白質(zhì)在泡沫型食品加工過程中具有一定的局限性。因此在實際應(yīng)用中如果可以將兩種或更多的蛋白質(zhì)復(fù)配應(yīng)用,不僅可以增加蛋白質(zhì)營養(yǎng)功效,同時也是一種簡單高效的改善蛋白質(zhì)溶液功能特性的方法。

    本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)RBP溶液pH 4.0和pH 7.0時,添加1%的NaCl其起泡能力可以顯著性增加,但只對pH 7.0條件下的泡沫穩(wěn)定性有顯著改善。因此結(jié)合上述的相關(guān)內(nèi)容,本實驗主要研究在pH 4.0和pH 7.0條件下添加1% NaCl后,RBP-OVA所組成RBP-OVA復(fù)合蛋白溶液起泡特性的變化規(guī)律,并對比研究分析溶液狀態(tài)和泡沫狀態(tài)下相關(guān)蛋白質(zhì)的理化特性,以探討RBP-OVA復(fù)合蛋白在起泡特性上的互補協(xié)同作用及其相關(guān)機理,以期為復(fù)合蛋白質(zhì)在實際應(yīng)用中提供理論依據(jù),并為促進(jìn)RBP在食品加工領(lǐng)域的應(yīng)用發(fā)展提供一定的參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    RBP(蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)84.9%)由實驗室自制;OVA(純度62%~88%)、1-苯胺基萘-8-磺酸(8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS,分析純) 美國Sigma公司;鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉(均為分析純) 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SorvallRC6Plus型高速冷凍離心機 美國Thermo Scientific公司;FiveEasy實驗pH計 瑞士Mettle Toledo公司;Alpha 1-2 LD plus冷凍干燥機 德國Christ公司;KND-103F自動定氮儀 上海纖檢儀器有限公司;手持式30631型電動打蛋器 日本ECHO公司;Zetasizer-NanoZS納米粒度電位儀 英國Malvern Instrument公司;F-4600熒光分光光度計 日本日立公司;HJ-4多頭磁力加熱攪拌器 金壇市榮華儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 RBP與OVA的復(fù)合蛋白質(zhì)溶液配制

    分別稱取適量的RBP與OVA配制5 mg/mL蛋白質(zhì)溶液,于磁力攪拌器上攪拌2 h后放入4 ℃冰箱水化過夜。將按照RBP-OVA質(zhì)量比分別為1∶0、3∶1、1∶1、1∶3、0∶1配制蛋白質(zhì)量濃度為5 mg/mL的RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)溶液,并分別調(diào)節(jié)至pH 4.0和pH 7.0,另外取部分RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)溶液再添加1% NaCl以研究鹽離子對其起泡特性的影響。

    1.3.2 蛋白質(zhì)溶液起泡特性的測定

    起泡特性的測定在解長遠(yuǎn)和Sheng Long等方法基礎(chǔ)上作一定的修改。取30 mL蛋白質(zhì)溶液于特制帶刻度的試管(直徑4 cm、高10 cm)中,將電動打蛋器伸入到溶液中約1 cm處,攪拌15 s后,立即測量泡沫體積,靜置2 h后再次測定體積。按式(1)、(2)計算蛋白質(zhì)的起泡能力及泡沫穩(wěn)定性:

    1.3.3 泡沫狀態(tài)下蛋白質(zhì)樣品的制備

    取RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)溶液,按1.3.2節(jié)方法進(jìn)行攪打起泡后,收集其上層泡沫待消泡后備用。

    1.3.4 蛋白質(zhì)粒徑分布與Zeta電位測定

    根據(jù)Wouters等的方法測定蛋白質(zhì)的粒徑分布與Zeta電位。取一定量的蛋白質(zhì)溶液,于25 ℃、8 000 r/min離心15 min,調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL,采用納米粒度電位儀,測定蛋白質(zhì)溶液的粒徑分布與Zeta電位。

    1.3.5 蛋白質(zhì)的表面疏水性測定

    參考馮芳等的方法,用ANS作熒光探針測定蛋白質(zhì)的表面疏水性。取配制好的蛋白質(zhì)溶液在25 ℃、8 000 r/min離心20 min后,分別配制質(zhì)量濃度0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14 mg/mL的蛋白質(zhì)溶液,并依次在5 mL不同質(zhì)量濃度的蛋白質(zhì)溶液中加入20 μL 8.0 mmo1/L的ANS溶液。采用熒光分光光度計測定加入ANS的蛋白質(zhì)樣品溶液及對照溶液的熒光強度,設(shè)定激發(fā)光和發(fā)射光分別為390 nm和470 nm,設(shè)定狹縫寬度為5 nm,將測定數(shù)據(jù)以蛋白質(zhì)量濃度和熒光強度分別為橫縱坐標(biāo)作圖,曲線斜率即為蛋白質(zhì)的表面疏水性指數(shù)。

    1.3.6 蛋白質(zhì)的熒光光譜測定

    參考Zhang Yanpeng等的方法測定RBP內(nèi)源熒光光譜。取配制好的蛋白質(zhì)溶液在25 ℃、8 000 r/min離心15 min后,將蛋白質(zhì)溶液質(zhì)量濃度調(diào)節(jié)為0.2 mg/mL,使用熒光光譜儀,設(shè)定激發(fā)波長為295 nm,在300~480 nm范圍內(nèi)1 200 nm/s進(jìn)行掃描分析。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    所有實驗均重復(fù)3 次求平均值,采用Origin 8.5和SPSS分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蛋白質(zhì)溶液的起泡特性分析

    2.1.1 蛋白質(zhì)溶液在pH 4.0條件下的起泡特性

    圖1 蛋白質(zhì)溶液在pH 4.0條件下的起泡特性Fig. 1 Foaming properties of proteins at pH 4.0

    由圖1a可知,當(dāng)pH 4時RBP的起泡能力明顯低于OVA,二者分別為20.0%和37.2%,而隨著RBP在RBPOVA復(fù)合蛋白中含量的減少,其起泡能力逐漸增加。這可能與兩種蛋白質(zhì)在pH 4.0條件下所帶的凈電荷量,蛋白溶解度,粒徑分布及分子結(jié)構(gòu)不同有關(guān),而這些理化性質(zhì)可以影響蛋白質(zhì)分子在界面的吸附速度,從而使其具有不同的起泡能力。由圖1b可知,當(dāng)pH 4.0時RBP的泡沫穩(wěn)定性優(yōu)于OVA,且當(dāng)RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1、1∶1和1∶3時,RBP-OVA復(fù)合蛋白在2 h以后的泡沫穩(wěn)定性相對OVA有顯著(<0.05)的改善,并且在1∶1和1∶3條件下RBP-OVA復(fù)合蛋白溶液的泡沫穩(wěn)定性在2 h后表現(xiàn)為協(xié)同作用,泡沫穩(wěn)定性均高于單一的蛋白質(zhì)溶液,這可能由于兩種蛋白質(zhì)在該條件下可以在界面處產(chǎn)生相互作用形成較好的黏彈性界面膜,使得RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)溶液的泡沫體系相對穩(wěn)定。

    圖2 蛋白質(zhì)在pH 4.0、1% NaCl條件下的起泡特性Fig. 2 Foaming properties of proteins under pH 4.0 and 1% NaCl conditions

    由圖2a可知,在加入1% NaCl后兩種蛋白質(zhì)的起泡能力均顯著增加,且RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)的起泡能力表現(xiàn)為協(xié)同作用,特別是當(dāng)RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1時,RBPOVA復(fù)合蛋白質(zhì)的起泡能力可達(dá)176.9%,與OVA的起泡能力相比沒有顯著性差異(>0.05)。這說明鹽離子的添加可改變蛋白質(zhì)的表面凈電荷,粒徑分布或者分子結(jié)構(gòu),從而使得蛋白質(zhì)分子易于吸附至氣-水界面。由圖2b可知,隨著OVA在RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)中比例的增加,其泡沫穩(wěn)定性顯著下降,當(dāng)RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1時,RBP-OVA復(fù)合蛋白在1~1.5 h內(nèi)的泡沫穩(wěn)定性相對RBP泡沫穩(wěn)定性無顯著差異(>0.05),但相比OVA則有顯著(<0.05)的改善。另外與未加NaCl的RBPOVA復(fù)合蛋白溶液相比,RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1時的RBP-OVA復(fù)合蛋白在2 h內(nèi)的泡沫穩(wěn)定性可顯著性增加至86.7%,這表明在該條件下RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)與物化性質(zhì)可保持較好的平衡,既能使其起泡能力得到較好的改善,同時也能使RBP-OVA復(fù)合蛋白保持較好的泡沫穩(wěn)定性,從而為在等電點附近蛋白質(zhì)得到更廣泛的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。

    2.1.2 蛋白質(zhì)溶液在pH 7.0下的起泡特性

    由圖3a可知,當(dāng)pH 7.0時,RBP的起泡能力優(yōu)于OVA,且RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)起泡能力隨RBP比例的減少而降低。這表明與pH 4.0相比,兩種蛋白質(zhì)的物化性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu)在pH 7.0發(fā)生了改變,使得其起泡能力發(fā)生了變化。圖3b結(jié)果表明,在pH 7.0條件下,RBP的泡沫穩(wěn)定性比OVA的穩(wěn)定性差,OVA泡沫穩(wěn)定性在4 h后依然可高達(dá)73.8%,因此在RBP中加入OVA后可一定程度上改善其泡沫穩(wěn)定性,但隨著OVA比例的增加其改善效果并沒有明顯的增加,這說明OVA對RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)泡沫穩(wěn)定性的提高有限。

    圖3 蛋白質(zhì)在pH 7.0條件下的起泡特性Fig. 3 Foaming properties of proteins at pH 7.0

    由圖4a可知,RBP的起泡能力優(yōu)于OVA,起泡能力可達(dá)103.0%,但RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)起泡能力隨RBP比例的減少先減少后增加。與圖3a相比,在pH 7.0條件下NaCl的添加均可以使得蛋白質(zhì)的起泡能力增加,但RBPOVA復(fù)合蛋白質(zhì)的起泡能力則表現(xiàn)為拮抗作用,這說明NaCl的添加使得兩種蛋白質(zhì)之間的相互作用不利于RBPOVA復(fù)合蛋白快速的吸附至氣-水界面以降低界面張力。圖4b結(jié)果表明,在該條件下,RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)泡沫穩(wěn)定性隨RBP比例的減少先增加后減少,其泡沫穩(wěn)定性表現(xiàn)為協(xié)同作用,當(dāng)RBP-OVA質(zhì)量比為1∶1時,起泡后4 h其泡沫穩(wěn)定性依然可維持在69.4%,這可能與兩種蛋白質(zhì)在界面處的相互作用有關(guān)。

    圖4 復(fù)合蛋白質(zhì)在pH 7.0、1% NaCl條件下的起泡特性Fig. 4 Foaming properties of mixed proteins under pH 7.0 and 1%NaCl conditions

    綜合上述有關(guān)蛋白質(zhì)起泡特性的相關(guān)分析,進(jìn)一步研究分析在pH 4.0、1% NaCl的條件下,RBP、OVA以及RBP-OVA復(fù)合蛋白(RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1)3種蛋白質(zhì)體系的相關(guān)物化性質(zhì)。因為在該環(huán)境條件下,兩種蛋白質(zhì)在起泡能力上表現(xiàn)為協(xié)同作用的同時也有效改善了RBP-OVA復(fù)合蛋白的泡沫穩(wěn)定性。另外pH 4.0接近兩種蛋白質(zhì)的等電點,通過對該條件下RBP-OVA復(fù)合蛋白的相關(guān)理化性質(zhì)進(jìn)行分析,有利于促進(jìn)兩種蛋白在等電點時的加工利用。

    2.2 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的粒徑分布分析

    由圖5可知,對于各種蛋白質(zhì)樣品而言,氣-液界面處的蛋白質(zhì)與溶液中蛋白質(zhì)具有相似的粒徑分布。在pH 4.0、1% NaCl的條件下RBP的粒徑大于OVA,而當(dāng)在RBP中加入OVA后,RBP-OVA復(fù)合蛋白的粒徑則變小且其粒徑與OVA一致。這說明OVA的加入改變了蛋白質(zhì)分子間的相互聚集狀態(tài),使得RBP-OVA復(fù)合蛋白的粒徑變小,從而使其更易于快速擴散至氣-液界面以改善RBPOVA復(fù)合蛋白的起泡能力。

    圖5 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的粒徑分布Fig. 5 Particle size distribution of proteins in solution and foam

    2.3 蛋白在溶液與泡沫狀態(tài)下的Zeta電位分析

    由表1可知,在溶液狀態(tài)下OVA所帶凈電荷量小于RBP,而較少的凈電荷量有利于降低蛋白質(zhì)在界面吸附時的空間位阻能量,因此有利于卵蛋白更快的吸附于界面,提高其起泡能力。當(dāng)兩種蛋白復(fù)合時,RBP-OVA復(fù)合蛋白的凈電荷量增加,這說明在pH 4.0、1% NaCl條件下兩種蛋白質(zhì)之間可能發(fā)生了相互作用,使得RBPOVA復(fù)合蛋白所帶表面電荷增加,水化能力增強,有利于增大其溶解性,進(jìn)而使得RBP-OVA復(fù)合蛋白的起泡能力顯著增加(圖2a)。另外表1顯示泡沫狀態(tài)下RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)與OVA所帶凈電荷相對溶液狀態(tài)下均有所增加,這可能是因為這兩類蛋白質(zhì)在界面處所受鹽離子的電荷屏蔽作用較弱,而蛋白質(zhì)表面凈電荷的增加可以使得氣泡之間的電荷排斥作用增強,有利于泡沫體系的穩(wěn)定性。從不同蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的Zeta電位的變化可知,凈電荷的變化會一定程度上影響RBP-OVA復(fù)合蛋白的起泡能力與穩(wěn)定性,但同時也要考慮其他因素比如蛋白質(zhì)在界面處的排列與相互作用及表面疏水性等物化性質(zhì)對其起泡特性的影響。

    表1 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的Zeta電位Table 1 Zeta potential of proteins in solution and foam

    2.4 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的表面疏水性分析

    由圖6可知,在溶液和泡沫狀態(tài)下,OVA因其含有較多的疏水基團(tuán),蛋白質(zhì)的表面疏水性較高,并且隨RBP所占比例的減少RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)的表面疏水性也顯著增加,而表面疏水性的增高有利于RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)更容易附到氣-液界面形成泡沫體系。同時結(jié)合粒徑以及Zeta電位的實驗結(jié)果可知,OVA的物化性質(zhì)更有利于RBP-OVA復(fù)合蛋白起泡能力的提高,這也與圖2a中蛋白質(zhì)起泡能力結(jié)果一致。圖6結(jié)果還表明,泡沫狀態(tài)下蛋白質(zhì)的表面疏水性低于溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì),這說明對于蛋白質(zhì)的起泡特性而言,蛋白質(zhì)的表面疏水性達(dá)到一定程度后將不會再對其起泡特性產(chǎn)生影響,因此還需要考慮吸附于界面的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的影響。

    圖6 蛋白質(zhì)的表面疏水性分析Fig. 6 Analysis of surface hydrophobicity of proteins

    2.5 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的熒光光譜分析

    由圖7可知,在pH 4.0、1% NaCl的環(huán)境條件下,RBP熒光圖譜中的最大發(fā)射波長在356 nm,而OVA與RBP-OVA復(fù)合蛋白的最大發(fā)射波長則在338 nm左右,這說明RBP的分子結(jié)構(gòu)相對比較展開,分子柔性較高,因此其在界面可以快速發(fā)生重排以行成黏彈性界面膜,從而有利于泡沫體系的穩(wěn)定性。當(dāng)RBP溶液中加入OVA后,RBP-OVA復(fù)合蛋白的最大熒光波長發(fā)生藍(lán)移,這說明RBP與OVA發(fā)生相互作用而使得RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)分子發(fā)生折疊而變的緊密,使得RBP-OVA復(fù)合蛋白質(zhì)的分子柔性結(jié)構(gòu)相對弱于RBP,因此在泡沫穩(wěn)定性上低于RBP。同時OVA與RBP-OVA復(fù)合蛋白在泡沫狀態(tài)下的熒光強度低于液體狀態(tài),這表明界面處蛋白質(zhì)分子微環(huán)境的極性增加,分子結(jié)構(gòu)發(fā)生去了去折疊。

    圖7 蛋白質(zhì)在溶液與泡沫狀態(tài)下的內(nèi)源熒光光譜圖Fig. 7 Intrinsic fluorescence spectra of proteins in solution and foam

    綜合上述研究可知,RBP與OVA在pH 4.0、1% NaCl的環(huán)境條件下之所以可產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),主要是因為二者在與起泡特性相關(guān)的分子特性方面具有一定的互補性,這樣有利于從物化性質(zhì)的不同方面改善RBP-OVA復(fù)合蛋白的起泡能力與泡沫穩(wěn)定性。

    3 結(jié) 論

    分析了在pH 4.0、7.0,1% NaCl等環(huán)境條件下,RBP、OVA及二者復(fù)合蛋白的起泡特性。研究結(jié)果表明NaCl的添加有利于改善蛋白質(zhì)的起泡能力,且在pH 4.0、NaCl添加量為1%的條件下,當(dāng)RBP-OVA質(zhì)量比為3∶1時,其RBP-OVA復(fù)合蛋白的起泡能力和泡沫穩(wěn)定性達(dá)到一個相對平衡的狀態(tài),起泡能力可達(dá)176.9%,泡沫在2 h內(nèi)可穩(wěn)定在86.7%。這表明在適合的條件下以一定的比例將蛋白質(zhì)進(jìn)行復(fù)合,可改善蛋白質(zhì)產(chǎn)品的起泡能力和泡沫穩(wěn)定性,這對泡沫型食品加工的實際加工應(yīng)用具有一定的指導(dǎo)意義。

    通過對蛋白質(zhì)在溶液和泡沫狀態(tài)下相關(guān)物化性質(zhì)的研究表明,在pH 4.0、1% NaCl的環(huán)境條件下,RBP與OVA之間可發(fā)生相互作用而影響RBP-OVA復(fù)合蛋白的凈電荷量、粒徑、表面疏水性及分子結(jié)構(gòu)等蛋白質(zhì)分子特性,并且這些分子特性在起泡能力與泡沫穩(wěn)定性方面可以產(chǎn)生一定的協(xié)同效應(yīng)以改善RBP-OVA復(fù)合蛋白的起泡特性。

    猜你喜歡
    泡沫粒徑蛋白質(zhì)
    毒泡沫
    蛋白質(zhì)自由
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:48
    廢棄的泡沫盒
    木屑粒徑對黑木耳栽培的影響試驗*
    人工智能與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
    海外星云(2021年9期)2021-10-14 07:26:10
    “搞死”國家的泡沫
    基于近場散射的顆粒粒徑分布測量
    蛋白質(zhì)計算問題歸納
    Oslo結(jié)晶器晶體粒徑分布特征的CFD模擬
    好泡沫與壞泡沫
    青春草亚洲视频在线观看| 欧美97在线视频| 免费看光身美女| 男女啪啪激烈高潮av片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 99久久精品国产国产毛片| 国产69精品久久久久777片| 国产色婷婷99| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 综合色丁香网| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品久久久久久久久亚洲| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 激情 狠狠 欧美| 国产乱人视频| 久久99蜜桃精品久久| 日本wwww免费看| 免费av中文字幕在线| 国产免费视频播放在线视频| 久久久久性生活片| 免费黄频网站在线观看国产| 久久鲁丝午夜福利片| 中文天堂在线官网| 精品一区二区免费观看| xxx大片免费视频| 一区二区av电影网| 国产伦精品一区二区三区视频9| av免费在线看不卡| 国产精品人妻久久久影院| 午夜激情久久久久久久| 男女国产视频网站| 综合色丁香网| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 亚洲在久久综合| 女性生殖器流出的白浆| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲一区二区三区欧美精品| av一本久久久久| 亚洲国产色片| tube8黄色片| 黄色配什么色好看| 五月伊人婷婷丁香| 国产有黄有色有爽视频| 国产男人的电影天堂91| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产伦在线观看视频一区| 只有这里有精品99| 丰满迷人的少妇在线观看| av女优亚洲男人天堂| 日韩视频在线欧美| 日韩av不卡免费在线播放| 一本色道久久久久久精品综合| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 1000部很黄的大片| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 少妇的逼水好多| 成人毛片60女人毛片免费| 一级毛片 在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 欧美高清性xxxxhd video| 网址你懂的国产日韩在线| 男女下面进入的视频免费午夜| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 中文字幕免费在线视频6| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 中文在线观看免费www的网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品人妻视频免费看| 国产男女内射视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲久久久国产精品| 日本午夜av视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 大码成人一级视频| 韩国av在线不卡| 国产欧美日韩精品一区二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 夫妻午夜视频| 91精品国产九色| 女人久久www免费人成看片| 久久精品国产自在天天线| 美女福利国产在线 | 91aial.com中文字幕在线观看| 视频中文字幕在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久久久久九九精品二区国产| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 各种免费的搞黄视频| 亚洲av免费高清在线观看| 一级爰片在线观看| 国产永久视频网站| 天美传媒精品一区二区| 99久久人妻综合| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品免费大片| 婷婷色av中文字幕| 99视频精品全部免费 在线| 日日撸夜夜添| 免费黄色在线免费观看| www.av在线官网国产| 日本wwww免费看| 大香蕉97超碰在线| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲四区av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久6这里有精品| 99久久人妻综合| 日本黄大片高清| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产成人freesex在线| 看非洲黑人一级黄片| 六月丁香七月| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品,欧美精品| 久久精品久久精品一区二区三区| 欧美成人午夜免费资源| 制服丝袜香蕉在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品久久久久久久电影| 搡老乐熟女国产| 免费看av在线观看网站| 国产精品不卡视频一区二区| h日本视频在线播放| 51国产日韩欧美| 国产久久久一区二区三区| 国产精品蜜桃在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 一个人免费看片子| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99久久综合免费| 欧美3d第一页| 亚洲精品国产av蜜桃| 黄色欧美视频在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 在线播放无遮挡| 精品国产乱码久久久久久小说| 美女福利国产在线 | 亚洲精品亚洲一区二区| av卡一久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 激情 狠狠 欧美| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日韩强制内射视频| 99久久人妻综合| 欧美精品人与动牲交sv欧美| av卡一久久| 国产免费又黄又爽又色| 一区在线观看完整版| 欧美zozozo另类| av线在线观看网站| 午夜福利高清视频| 久久青草综合色| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 有码 亚洲区| 嘟嘟电影网在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 日韩三级伦理在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 99久久综合免费| 免费人成在线观看视频色| 国产一区二区三区av在线| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲伊人久久精品综合| 国产一级毛片在线| 男的添女的下面高潮视频| 国产av国产精品国产| 久久久久久久亚洲中文字幕| 黄片wwwwww| 亚洲四区av| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品一及| 美女视频免费永久观看网站| 久久精品人妻少妇| 日本一二三区视频观看| 精品酒店卫生间| 一级a做视频免费观看| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩伦理黄色片| 久久久色成人| 亚洲av二区三区四区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 男人狂女人下面高潮的视频| 在线观看av片永久免费下载| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品一区二区免费观看| 极品教师在线视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 天天躁日日操中文字幕| 91狼人影院| 日韩中文字幕视频在线看片 | 十分钟在线观看高清视频www | 国产日韩欧美亚洲二区| 免费观看a级毛片全部| 老司机影院成人| 亚洲在久久综合| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产精品国产精品| av国产免费在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 99久久人妻综合| 国产精品国产三级专区第一集| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲无线观看免费| 亚洲内射少妇av| 国产91av在线免费观看| 国产极品天堂在线| 在线 av 中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 成人影院久久| 国产高清三级在线| 亚洲欧洲国产日韩| 晚上一个人看的免费电影| av.在线天堂| 亚洲精品久久午夜乱码| 成人午夜精彩视频在线观看| 草草在线视频免费看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本av手机在线免费观看| 联通29元200g的流量卡| 99久久中文字幕三级久久日本| 婷婷色av中文字幕| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品99久久久久久久久| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久婷婷青草| 午夜激情久久久久久久| 国产成人a区在线观看| 观看av在线不卡| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲成色77777| 激情 狠狠 欧美| 国产免费又黄又爽又色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 性色av一级| 1000部很黄的大片| 日韩欧美精品免费久久| 欧美人与善性xxx| xxx大片免费视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲精品第二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久热这里只有精品99| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久久久国产电影| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | videossex国产| 一个人看视频在线观看www免费| 一边亲一边摸免费视频| 欧美97在线视频| 国产成人91sexporn| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美xxⅹ黑人| 丰满少妇做爰视频| 亚洲成色77777| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲自偷自拍三级| 老女人水多毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 精品人妻视频免费看| 秋霞在线观看毛片| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲人与动物交配视频| 久久久久久九九精品二区国产| 国产在视频线精品| 在线天堂最新版资源| 久久6这里有精品| 国产成人一区二区在线| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品免费大片| 秋霞伦理黄片| 丰满乱子伦码专区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 插阴视频在线观看视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产黄色免费在线视频| 免费大片18禁| 国产深夜福利视频在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美人与善性xxx| 舔av片在线| 午夜视频国产福利| 国产精品免费大片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 成人特级av手机在线观看| 国产色婷婷99| 精品久久久久久久久av| 精品视频人人做人人爽| 一边亲一边摸免费视频| 成人综合一区亚洲| 亚洲国产欧美在线一区| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲美女视频黄频| 国产久久久一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久久久九九精品二区国产| 女性被躁到高潮视频| 国产av码专区亚洲av| 嫩草影院入口| 免费av不卡在线播放| 国产av国产精品国产| 久久精品国产亚洲av涩爱| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜免费观看性视频| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲丝袜综合中文字幕| 激情五月婷婷亚洲| 男女边摸边吃奶| 日本欧美国产在线视频| 交换朋友夫妻互换小说| 少妇人妻精品综合一区二区| 只有这里有精品99| 91精品国产九色| 日本色播在线视频| 成年av动漫网址| 婷婷色综合大香蕉| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 最黄视频免费看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲真实伦在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 边亲边吃奶的免费视频| 国产 精品1| 成人毛片a级毛片在线播放| 99久国产av精品国产电影| 永久网站在线| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 两个人的视频大全免费| 丝袜脚勾引网站| 午夜福利高清视频| 国产视频内射| 久久国产乱子免费精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久99热这里只有精品18| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产高清三级在线| 国产精品三级大全| 尾随美女入室| 天美传媒精品一区二区| 三级经典国产精品| 我要看黄色一级片免费的| 永久网站在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美3d第一页| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 在线观看人妻少妇| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品精品国产色婷婷| 伦精品一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美+日韩+精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美成人a在线观看| .国产精品久久| 国产在视频线精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产亚洲一区二区精品| 最新中文字幕久久久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品乱久久久久久| 99久久精品一区二区三区| 一级毛片电影观看| 在线精品无人区一区二区三 | 国产成人精品久久久久久| av女优亚洲男人天堂| 男人舔奶头视频| 国产69精品久久久久777片| 五月伊人婷婷丁香| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久久视频综合| 99久久精品一区二区三区| 久久影院123| 免费看光身美女| 91精品伊人久久大香线蕉| av福利片在线观看| av女优亚洲男人天堂| 国产黄色免费在线视频| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲综合色惰| av专区在线播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 久久99热这里只频精品6学生| 在线观看免费视频网站a站| 成人影院久久| 人妻一区二区av| 多毛熟女@视频| 中文字幕久久专区| 搡老乐熟女国产| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲欧美清纯卡通| 午夜日本视频在线| 晚上一个人看的免费电影| 少妇人妻久久综合中文| 男人添女人高潮全过程视频| 偷拍熟女少妇极品色| 免费大片黄手机在线观看| 一级毛片我不卡| 国产免费福利视频在线观看| 国产乱来视频区| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲不卡免费看| 亚洲av福利一区| 亚洲精品一二三| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲成人av在线免费| 国产片特级美女逼逼视频| freevideosex欧美| 一级av片app| 亚洲国产av新网站| h视频一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品.久久久| 午夜老司机福利剧场| 男女免费视频国产| 国产精品国产三级国产专区5o| 在线观看一区二区三区| 夜夜爽夜夜爽视频| 欧美性感艳星| 黄色日韩在线| av女优亚洲男人天堂| 国产精品成人在线| 久久精品国产a三级三级三级| 国产亚洲91精品色在线| 午夜免费观看性视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久热精品热| 嘟嘟电影网在线观看| 精品久久久久久电影网| 精品视频人人做人人爽| 久久99热这里只频精品6学生| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲av成人精品一区久久| 在线观看国产h片| 亚洲成色77777| 国产人妻一区二区三区在| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲内射少妇av| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品国产av成人精品| freevideosex欧美| 亚洲国产精品国产精品| 丰满乱子伦码专区| 亚洲av二区三区四区| 乱系列少妇在线播放| 美女主播在线视频| 欧美97在线视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久99热这里只有精品18| 人妻 亚洲 视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产高潮美女av| 如何舔出高潮| 高清av免费在线| 亚洲最大成人中文| 国内精品宾馆在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 成人美女网站在线观看视频| 天堂8中文在线网| 欧美日韩综合久久久久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美97在线视频| 免费观看性生交大片5| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 大香蕉久久网| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日本午夜av视频| 精品久久久噜噜| 国产综合精华液| 欧美三级亚洲精品| 欧美丝袜亚洲另类| 日本vs欧美在线观看视频 | 日本与韩国留学比较| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 中国国产av一级| 国产有黄有色有爽视频| 妹子高潮喷水视频| 777米奇影视久久| 在线精品无人区一区二区三 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 大片免费播放器 马上看| 午夜福利高清视频| 国产在线一区二区三区精| 成人影院久久| 日本免费在线观看一区| 超碰97精品在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线免费十八禁| 成人国产麻豆网| 久久毛片免费看一区二区三区| videossex国产| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产综合精华液| 大话2 男鬼变身卡| 久久久久久久国产电影| 一级毛片电影观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 超碰97精品在线观看| 午夜激情久久久久久久| 看十八女毛片水多多多| 免费在线观看成人毛片| 黑人高潮一二区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 少妇人妻 视频| 97超碰精品成人国产| 亚洲va在线va天堂va国产| 深夜a级毛片| 日韩视频在线欧美| 91精品伊人久久大香线蕉| 婷婷色麻豆天堂久久| av在线app专区| 午夜免费鲁丝| 我的老师免费观看完整版| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲精品国产成人久久av| 在线天堂最新版资源| 久热久热在线精品观看| 少妇的逼好多水| 欧美最新免费一区二区三区| 日韩一区二区三区影片| 亚洲国产欧美在线一区| 三级经典国产精品| 天堂俺去俺来也www色官网| 777米奇影视久久| 女性生殖器流出的白浆| 下体分泌物呈黄色| 国产成人91sexporn| 99国产精品免费福利视频| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产毛片在线视频| 热99国产精品久久久久久7| 日韩精品有码人妻一区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 99久久精品国产国产毛片| 最新中文字幕久久久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产老妇伦熟女老妇高清| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产片特级美女逼逼视频| 少妇人妻久久综合中文| 国产成人一区二区在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久久久久久成人| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品久久久久久电影网| 十八禁网站网址无遮挡 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 最后的刺客免费高清国语| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品人妻久久久久久|